1、 AFNOR 2001 Tous droitsrservsFA104321 ISSN 0335-3931NF U 47-020Juillet 2001Indice de classement : U 47-020ICS : 11.220 ; 65.020.30Mthodes danalyse en sant animaleGuide de bonnes pratiques de traitement de lchantillon soumis des analyses immuno-srologiquesE : Animal health analysis methods Good pract
2、ices guide for processing of the sample submitted to immuno-serological analysesD : Analysen Verfahren in der Veterinrmedizin Leitfaden fr die gute fachliche Praxis fr die Behandlung der immuno-serologisch geprften ProbeNorme franaise homologuepar dcision du Directeur Gnral dAFNOR le 5 juin 2001 pou
3、r prendre effetle 5 juillet 2001.Correspondance la date de publication du prsent document, il nexiste pas de travaux europensou internationaux traitant du mme sujet.Analyse Le prsent document sinscrit dans un ensemble de normes de mthodes danalyseen sant animale. Il dcrit les conditions de recevabil
4、it, de prparation, de conser-vation et dlimination des fluides dorigine animale destins aux analyses immuno-srologiques.Descripteurs Thsaurus International Technique : maladie des animaux, mthode danalyse,essai biologique, immunologie, dpistage, srum, sang, plasma sanguin, lait, uf,chantillon, code
5、de bonnes pratiques, conservation, essai de laboratoire.Modifications AFNOR 2001 AFNOR 2001 1er tirage 2001-07-Fditeetdiffusepar lAssociation Franaise de Normalisation (AFNOR) 11, avenue Francis de Pressens 93571 Saint-Denis La Plaine Cedex Tl. : + 33 (0)1 41 62 80 00 Fax : + 33 (0)1 49 17 90 00 www
6、.afnor.frCorrectionsMthodes danalyse en sant animale AFNOR U47AMembres de la commission de normalisationPrsident : M TOMASecrtariat : MME DRUEZ AFNORMME BADUEL MINISTRE DE LAGRICULTURE ET DE LA PCHE DIRECTION GNRALE DE LALIMENTATIONM BAROUX LABORATOIRE DPARTEMENTAL DANALYSES DE LAINMME BEDIDI-MADANI
7、 LABORATOIRE VTRINAIRE DPARTEMENTAL DE LA MEUSEMME BELLEMAIN MINISTRE DE LAGRICULTURE ET DE LA PCHE DIRECTION GNRALE DE LALIMENTATION MME BERTIN LABORATOIRE DPARTEMENTAL DE LA CHARENTEM BIET SANDERS ALIMENTSM BIND LABORATOIRE DE TOURAINEMME BLANCHARD LABORATOIRE AVIMARMME BONNET LABORATOIRE DPARTEME
8、NTAL VTRINAIRE DES ALPES DE HAUTE-PROVENCEM BUFFEREAU LABORATOIRE DE DVELOPPEMENT ET ANALYSES DES CTES-DARMORMME BUGGIN-DAUBIE DELTAVIT SICA SAM CARPINSCHI LABORATOIRE DPARTEMENTAL DANALYSES DE LA MANCHEM CHABANET LABORATOIRE DPARTEMENTAL DANALYSES DE LAVEYRONM CUDENNEC LABORATOIRE DPARTEMENTAL DE D
9、IAGNOSTIC DE LAISNEMME DRUEZ AFNORMEUZEBY COLE NATIONALE VTRINAIRE DE TOULOUSEMME FEILLOU LABORATOIRE DPARTEMENTAL DANALYSES DE LINDREM FORTIER LABORATOIRE DPARTEMENTAL DU CALVADOSM FRETTE OFIVALM GARIN-BASTUJI AFSSA ALFORTMME GENEIX COFRACMME GERSTER-HARLY LABORATOIRE DPARTEMENTAL DANALYSES DE LA C
10、TE-DORMME GIRAL LABORATOIRE VTRINAIRE DPARTEMENTAL DES BOUCHES-DU-RHNEM GIRAUD LABORATOIRE DPARTEMENTAL DANALYSES DU PAS-DE-CALAISMME GREZEL COLE NATIONALE VTRINAIRE DE LYONMME GUERITTE CIAL SOM HUGUET BIOSUD ANALYSES SARLMME JOUARON LABORATOIRE DPARTEMENTAL DE LA CHARENTEM KAZEK SYNDICAT DE LINDUST
11、RIE DU MDICAMENT VTRINAIREM KLEIN LABORATOIRE DPARTEMENTAL DANALYSES DE LORNEMME KOBISCH AFSSA PLOUFRAGANM LAMBERT AFSSA SOPHIAM LE DREAN LABORATOIRE DPARTEMENTAL VTRINAIRE DILLE-ET-VILAINEMME LE POTIER AFSSA PLOUFRAGANM MAUCCI LIDAL GIEMME MENARD IDAC LABORATOIRE DE BIOLOGIE VTRINAIREM MIELI LABORA
12、TOIRE DE DVELOPPEMENT ET ANALYSES DES CTES-DARMORM MORVAN LABORATOIRE DE DVELOPPEMENT ET ANALYSES DES CTES-DARMORM NUSSBAUM VETOQUINOL SAMPARODI COLE NATIONALE VTRINAIRE DALFORT 3 NF U 47-020Ce document a t prpar dans le cadre du GT 1 Immuno-srologie anim par Monsieur Luc MIELI. Ila t plus particuli
13、rement rdig par les personnes suivantes :MLLE PELLETIER LABORATOIRE DPARTEMENTAL DES LANDESM PICAULT AFSSA PLOUFRAGANMME POILANE LASAMME POLIAK LABORATOIRE DPARTEMENTAL DE LA SARTHEM POURQUIER SYNDICAT DE LINDUSTRIE DU MDICAMENT VTRINAIREM POUTREL INRA CENTRE DE RECHERCHES DE TOURSMME RAULT FNGDSBM
14、REYNAUD LABORATOIRE VTRINAIRE DPARTEMENTAL DU PUY-DE-DOMEMME ROISIN SANOFI DIAGNOSTICS PASTEURM ROSE LABORATOIRE DPARTEMENTAL DU MORBIHANM SALORD SYNDICAT DE LINDUSTRIE DU MDICAMENT VTRINAIREM SCHELCHER COLE NATIONALE VTRINAIRE DE TOULOUSEM SZYMANSKI UCAAB LABORATOIRE DANALYSES ET DE BIOLOGIEM THEAU
15、-AUDIN ADOUR BIO CONSEILMME THOREL AFSSA MAISONS ALFORTMME TKACZUK-MOQUAY LABORATOIRE VTRINAIRE DPARTEMENTAL DE LA HAUTE-GARONNEMTOMA COLE NATIONALE VTRINAIRE DALFORTM TUFFERY AFSSA MAISONS ALFORTM VALARCHER COLE NATIONALE VTRINAIRE DE TOULOUSEMME VALOGNES LABORATOIRES DPARTEMENTAUX DES PYRNES-ATLAN
16、TIQUESMME VAUCLARE SYNDICAT DE LINDUSTRIE DU MDICAMENT VTRINAIREM VAUTOR AFSSA SOPHIA ANTIPOLISM VERSAVAUD GRIMAUD FRRES SAM VERY LABORATOIRE VTRINAIRE DPARTEMENTAL DE SANE-ET-LOIREMME VIALARD COLE NATIONALE VTRINAIRE DE LYONM CHEVALM CHABANETMMIELMPICAULTM POURQUIERNF U 47-020 4 Introduction 51 Dom
17、aine dapplication 52 Termes et dfinitions 53 chantillonnage 64 Appareillage et verrerie 65 Recevabilit de lchantillon pour laboratoire . 76Prparation de lchantillon pour analyse 87 Conservation des chantillons 98 limination de lchantillon pour laboratoire et de lchantillon pour analyse 10SommairePag
18、e 5 NF U 47-020IntroductionLe plan dvelopp ci-dessous correspond un plan type. Dans certains cas, les diffrentes tapes du traitementde lchantillon peuvent se succder dans un ordre diffrent, mieux adapt la ralisation pratique du traitement.Prcautions de scuritLe laboratoire doit prendre toutes les pr
19、cautions pour garantir, au manipulateur et lenvironnement, la scuritncessaire contre les risques biologiques et chimiques inhrents aux activits ralises dans le cadre du prsentdocument.Ces risques, entre autres, peuvent tre lis la nature et/ou lorigine de lchantillon. titre dexemples : Coxiella burne
20、tii dans le lait ; Brucella spp dans le lait ; Brucella spp sur des prlvements ventuellement souills par des scrtions gnitales ; prlvement provenant dun pays, dune rgion, o svit une pizootie et/ou une zoonose non prsente sur leterritoire dimplantation du laboratoire (peste porcine africaine, peste b
21、ovine, peste quine, etc.).1 Domaine dapplication1.1 Le prsent document dcrit les conditions de recevabilit, prparation, conservation et limination delchantillon pour laboratoire et de lchantillon pour analyse.1.2 Le prsent document est applicable aux fluides biologiques issus despces animales. titre
22、 dexemples : sang total prlev sur anticoagulant ; sang total prlev sur tube sec ; srum ; plasma ; sang prlev sur papier buvard ; lait ; jaune duf (vitellus) ; exsudat davorton.2 Termes et dfinitionsPour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent.2.1chantillon pour
23、laboratoirechantillon dans ltat de prparation o il est envoy au laboratoire et destin tre utilis pour un contrle oupour des analyses2.2chantillon pour analyse (essai)chantillon prpar partir de lchantillon pour laboratoire et partir duquel les prises dessai sont prlevesLchantillon pour analyse doit t
24、re reprsentatif de lchantillon pour laboratoire et doit tre rendu homogne.NF U 47-020 6 2.3partie aliquotepartie qui est contenue un nombre exact de fois dans un tout2.4ralisation de mlanges dchantillons pour analysele nombre maximal dchantillons pour analyse pouvant tre incorpors dans un mlange est
25、 dfini par la mthodedanalyse utiliseDans un mlange de x chantillons pour analyse, chaque chantillon doit reprsenter une fraction gale.Le volume dchantillon prlev pour constituer le mlange doit tre reprsentatif de lchantillon pour laboratoire.3 chantillonnageSans objet.4 Appareillage et verrerie4.1 q
26、uipement permettant lobtention et le conditionnement dun chantillon pour analyse partir delchantillon pour laboratoire titre dexemples : centrifugeuse rfrigre (si possible) permettant dobtenir une acclration adquate ; emporte-pice (type perforeuse de bureau) pour dcouper des pastilles denviron 5 mm
27、de diamtre dans lesbuvards. Lemporte-pice est spcifiquement rserv cet usage ; systmes de prlvement et de distribution volumtrie adapte (pipettes, micropipettes, multipipettes,automates,.) ; bain-marie rglable permettant de traiter les chantillons selon les prescriptions indiques dans les normes.4.2
28、quipement permettant le stockage et la conservation des chantillons avant, pendant et aprsanalyse titre dexemples : enceinte(s) de volume adapt, rgle(s) 5 C 3 C; conglateur permettant de maintenir une temprature 16 C.4.3 quipement permettant llimination des chantillons titre dexemple : lorsque lauto
29、clavage est retenu comme mthode dinactivation des chantillons pour laboratoire et/ou pouranalyse, lautoclave doit permettre datteindre et de maintenir une temprature minimale de 121 C pendant30 min, sauf exigences spcifiques aux mthodes danalyse. 7 NF U 47-0205 Recevabilit de lchantillon pour labora
30、toireLe laboratoire doit dcrire les conditions gnrales et spcifiques de recevabilit des chantillons pour laboratoire.Le laboratoire peut tre amen refuser des chantillons qui ne les respectent pas.5.1 Conditions gnrales de recevabilitLes conditions sont les suivantes : prsence dune demande danalyse a
31、ccompagnant le prlvement o doivent tre mentionnes les coordon-nes du ou des destinataires du rsultat ; lchantillon provient dun territoire dfini ; cohrence de lchantillon pour laboratoire par rapport la nature de la demande (dlai dacheminement,nature de lchantillon, nombre, etc.) ; cohrence de lchan
32、tillon pour laboratoire avec lanalyse demande.On sattachera vrifier dune part, la qualit de lchantillon transmis (intgrit du contenant, absence de conta-mination, souillure, etc.) et, dautre part, la prsence dune quantit suffisante pour la ralisation des analysesdemandes.5.2 Conditions spcifiques de
33、 recevabilit5.2.1 chantillon pour laboratoire prlev dans un contenant type tube, flaconLes conditions spcifiques sont : lintgrit du contenant ; la qualit physico-chimique de lchantillon ( titre dexemple : aspect, ou odeur, ou couleur, ou texture) doittre compatible avec la mise en uvre des technique
34、s considres.En effet, la ralisation de certaines analyses peut tre perturbe, voire rendue impossible, par les phnomnesdhmolyse qui affectent les prlvements de sang, ou de coagulation pour des prlvements tels que le plasma,le srum, le lait, les exsudats et les panchements. Pour ces analyses, les altr
35、ations cites ci-dessus peuventconstituer un critre de non-recevabilit.5.2.2 chantillon pour laboratoire prlev sur papier buvardLe papier buvard doit tre imbib sur ses deux faces et dans toute son paisseur, sur une surface permettant ledcoupage du nombre de pastilles dfini dans la mthode danalyse.Les
36、 conditions spcifiques de recevabilit sont dans ce cas : absence de condensation la surface des chantillons. Ce phnomne se produit par exemple lorsque lespapiers buvards imbibs sont stocks dans un contenant en matire plastique ; intgrit ou non intercontamination des chantillons par contact. Cette in
37、tercontamination se produit lorsquedes chantillons non encore secs sont rassembls et mis en contact troit ; absence de dveloppement fongique.Limpossibilit dluer un papier buvard doit constituer un motif a posteriori de non-recevabilit dun chantillon.5.2.3 ufs destins une analyse sur le vitellusLe dv
38、eloppement excessif de lembryon doit constituer un motif de non-recevabilit de lchantillon.NF U 47-020 8 6Prparation de lchantillon pour analyseLe but de cette tape est dobtenir, en labsence de spcification particulire, par un moyen appropri, un chan-tillon pour analyse partir dun chantillon pour la
39、boratoire.Le temps scoulant entre la rception des chantillons pour laboratoire et la ralisation des analyses doit trechoisi de faon limiter laltration ou les modifications notables de la constitution physico-chimique des chan-tillons.Au cours de cette tape de prparation et pour toutes les tapes de t
40、raitement et danalyse qui suivent, le labora-toire doit mettre en place des dispositions qui permettent dassurer la traabilit des chantillons, y compris lorsdes tapes au cours desquelles les chantillons ne sont identifiables que daprs le repre de leur position danslespace et non par marquage individ
41、uel.Lorsque le systme de prlvement/distribution employ nutilise pas des embouts usage unique, le laboratoiredoit sassurer que le lavage des embouts entre chaque chantillon est suffisant pour viter les intercontamina-tions.Lorsque le systme de prlvement/distribution employ est utilis pour raliser des
42、 mlanges dchantillons, lelaboratoire doit mettre en place les moyens permettant de sassurer que les mlanges sont effectus correctement(en particulier le nombre dchantillons dans le mlange et le volume de chaque chantillon constituant lemlange).Lorsque lchantillon soumis analyse est susceptible de co
43、ntenir des inhibiteurs non spcifiques de nature ren-dre ininterprtable lanalyse, un traitement adapt visant rduire leffet de ces inhibiteurs peut tre mis en uvre.Par exemple, des srums soumis au test de linhibition de lhmagglutination (IHA) peuvent ncessiter uneadsorption pralable sur hmaties.Le tra
44、itement par la chaleur des chantillons se fait conformment aux dispositions prises dans les normes demthodes danalyse. La temprature du bain-marie ne doit pas excder 60 C, sauf dans le cas de certaines esp-ces animales (camlids, nes : 62 C), car au-del de cette temprature de 60 C, les immunoglobulin
45、es peuventtre altres.6.1 chantillon pour analyse issu de sang prlev sur tubeOn cherche sparer la phase contenant le srum ou le plasma de la phase contenant les lments cellulaires.Pour cela on peut utiliser la centrifugation pour permettre une sparation des deux phases meilleure et plus rapide.Dans l
46、e cas de sang prlev sur tube sec, la centrifugation est effectue aprs la coagulation de lchantillon pourlaboratoire.Exemples de vitesse de centrifugation : tube sec : 4 000 8 000 m.s2(soit environ 400 800 g avec g = 9,81 m.s2) pendant 10 min ; tube sparation de phase : 22 000 m.s2(soit environ 2 200
47、 g avec g = 9,81 m.s2) pendant 10 min.Sangs doiseau : la rtraction du caillot et la libration du srum sont souvent partielles. Aussi est-il recommandde dcoller les sangs coaguls, au moyen dune pipette de verre par exemple, avant centrifugation, afin dobtenirune quantit suffisante de srum pour analyse.6.2 chantillon pour analyse issu de sang prlev sur papier buvardLlution se fait partir de disq
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