1、 Numro de rfrence ISO 12872:2010(F) ISO 2010NORME INTERNATIONALE ISO 12872 Premire dition 2010-05-01Huiles dolive et huiles de grignons dolive Dtermination de la teneur en 2-glycryl monopalmitate Olive oils and olive-pomace oils Determination of the 2-glyceryl monopalmitate content ISO 12872:2010(F)
2、 PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisat
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7、6 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2010 Tous droits rservsISO 12872:2010(F) ISO 2010 Tous droits rservs iiiSommaire Page Avant-propos .iv Introduction.v 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences normatives.1 3 Ter
8、mes et dfinitions 1 4 Principe.1 5 Ractifs.1 6 Appareillage .2 7 chantillonnage.3 8 Prparation de lchantillon pour essai 3 9 Mode opratoire.4 9.1 tapes prparatoires.4 9.2 Chromatographie sur colonne .4 9.3 Hydrolyse par la lipase pancratique5 9.4 Prparation des drivs silyls et de la chromatographie
9、en phase gazeuse5 9.5 Chromatographie en phase gazeuse.5 10 Expression des rsultats6 11 Fidlit 6 11.1 Essai interlaboratoires6 11.2 Rptabilit 6 11.3 Reproductibilit .6 12 Rapport dessai6 Annexe A (informative) Chromatogrammes.7 Annexe B (informative) Rsultats dun essai interlaboratoires10 Annexe C (
10、informative) Prparation et activit de la lipase11 Bibliographie.13 ISO 12872:2010(F) iv ISO 2010 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes intern
11、ationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO c
12、ollabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes
13、 internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lment
14、s du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 12872 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentair
15、es, sous-comit SC 11, Corps gras dorigines animale et vgtale. ISO 12872:2010(F) ISO 2010 Tous droits rservs vIntroduction Dans le cadre de la Norme commerciale applicable aux huiles dolive et aux huiles de grignons dolive, le Conseil olicole international (COI) a publi la COI/T.20/Doc. 23:2006 6 . L
16、a COI/T.20/Doc. 23 tait applicable aux huiles dolive et aux huiles de grignons dolive et tait utilise pour faire la distinction entre les huiles dolive vierges lampantes et les huiles de grignons dolive brutes. Les grignons dolive constituent la pte rsiduelle qui contient encore une quantit variable
17、 deau et dhuile aprs pressage ou centrifugation. En 2008, le COI a soumis le document lISO/TC 34/SC 11 en vue de son adoption en tant que Norme internationale. NORME INTERNATIONALE ISO 12872:2010(F) ISO 2010 Tous droits rservs 1Huiles dolive et huiles de grignons dolive Dtermination de la teneur en
18、2-glycryl monopalmitate 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie une mthode pour la dtermination de la teneur, sous forme de fraction massique en pourcentage, en 2-glycryl monopalmitate des huiles dolive et des huiles de grignons dolive liquides temprature ambiante (20 C). NOTE
19、 La prsente Norme internationale est fonde sur la mthode COI/T.20/Doc. 23:2006 6 . 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition d
20、u document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 661, Corps gras dorigines animale et vgtale Prparation de lchantillon pour essai 3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 teneur en 2-glycryl monopalmitate
21、fraction massique de 2-glycryl monopalmitate dans la fraction monoglycridique, dtermine conformment la mthode spcifie dans la prsente Norme internationale NOTE La teneur en 2-glycryl monopalmitate est exprime en pourcentage. 4 Principe Aprs une prparation approprie, lhuile est soumise laction de la
22、lipase pancratique. Une hydrolyse partielle et spcifique aux positions 1 et 3 de la molcule de triglycride entrane la formation de 2-monoglycrides. Le pourcentage de 2-glycryl monopalmitate dans la fraction monoglycridique est dtermin, aprs silylation, par chromatographie en phase gazeuse sur colonn
23、e capillaire. 5 Ractifs AVERTISSEMENT Il est ncessaire de se conformer toute rglementation locale relative la manipulation des substances dangereuses. Des mesures de scurit technique, organisationnelle et personnelle doivent tre suivies. Au cours de lanalyse, sauf indication contraire, utiliser uniq
24、uement des ractifs de qualit analytique reconnue et de leau distille ou dminralise ou de leau de puret quivalente. ISO 12872:2010(F) 2 ISO 2010 Tous droits rservs5.1 Gel de silice, ayant une granulomtrie comprise entre 0,063 mm et 0,200 mm (70/280 mesh), prpar comme suit: mettre le gel de silice dan
25、s une capsule de porcelaine, scher ltuve 160 C pendant 4 h, puis laisser refroidir temprature ambiante dans un dessiccateur. Ajouter un volume deau quivalent 5 % de la masse de gel de silice, comme suit: dans un Erlenmeyer de 500 ml, peser 152 g de gel de silice et ajouter 8 g deau, boucher et agite
26、r dlicatement pour homogniser. Laisser reposer au moins 12 h avant lemploi. 5.2 n-Hexane, qualit pour chromatographie. 5.3 Isopropanol. 5.4 Mlange isopropanol-eau, fractions volumiques 50 ml/100 ml. 5.5 Lipase pancratique, activit comprise entre 2,0 et 10 units de lipase par milligramme (voir Annexe
27、 C). 5.6 Solution tampon de tris(hydroxymthyl)aminomthane: prparer une solution aqueuse (1 mol/l) de pH 8 et mlanger avec du HCl concentr, fractions volumiques 50 ml/100 ml. 5.7 Cholate de sodium, qualit enzymatique, solution aqueuse, fraction massique 0,1 g/100 g. Utiliser cette solution dans les 1
28、5 jours suivant sa prparation. 5.8 Chlorure de calcium, solution aqueuse, fraction massique 22 g/100 g. 5.9 ther dithylique, qualit pour chromatographie. 5.10 Solvant dlution: mlange de n-hexane-ther dithylique, fraction volumique de n-hexane 87 ml/100 ml et fraction volumique dther dithylique 13 ml
29、/100 ml. 5.11 Hydroxyde de sodium, solution aqueuse, fraction massique 12 g/100 g. 5.12 Phnolphtaline, solution thanolique, concentration en masse 1 g/100 ml. 5.13 Gaz vecteur: hydrogne ou hlium, qualit pour chromatographie en phase gazeuse. 5.14 Gaz auxiliaires: hydrogne, exempt dhumidit et de subs
30、tances organiques, et air synthtique, qualit pour chromatographie en phase gazeuse. 5.15 Ractif de silylation: mlange de pyridine, dhexamthyldisilazane (HMDS) et de trimthylchlorosilane (TMCS), fractions volumiques: 9 ml/13 ml, 3 ml/13 ml et 1 ml/13 ml, respectivement. 5.16 chantillons de rfrence: m
31、onoglycrides purs et mlanges de monoglycrides ayant une composition connue similaire celle de lchantillon. 6 Appareillage Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit. 6.1 Erlenmeyer, dune capacit de 25 ml. 6.2 Bchers, de capacits 100 ml, 250 ml et 300 ml. 6.3 Colonne en verre pour
32、 chromatographie, diamtre intrieur de 21 mm 23 mm, longueur 400 mm, quipe dun septum et dun robinet. 6.4 prouvettes gradues, de capacits 10 ml, 50 ml, 100 ml et 200 ml, ISO 4788 2classe A. ISO 12872:2010(F) ISO 2010 Tous droits rservs 36.5 Ballons, de capacits 100 ml et 250 ml. 6.6 vaporateur rotati
33、f. 6.7 Tubes pour centrifugeuse, fond conique, dune capacit de 10 ml, avec bouchon rod. 6.8 Centrifugeuse, pour tubes de 10 ml et 100 ml. 6.9 Bain-marie, permettant de maintenir une temprature de (40 0,5) C. 6.10 Pipettes gradues, de capacits 1 ml et 2 ml, ISO 835 1classe A. 6.11 Seringue hypodermiq
34、ue, de 1 ml. 6.12 Microseringue, de 100 l. 6.13 Ampoule dcanter, de 1 000 ml. 6.14 Chromatographe en phase gazeuse, appropri au fonctionnement avec colonnes capillaires, quip des lments spcifis de 6.14.1 6.14.5. 6.14.1 Dispositif dinjection on column froid. 6.14.2 Dtecteur ionisation de flamme. 6.14
35、3 Four pour colonne, capable de maintenir la temprature 1 C. 6.14.4 Systme informatique dintgration. 6.14.5 Colonne capillaire en silice fondue, de 8 m 12 m de long, dun diamtre intrieur de 0,25 mm 0,32 mm, recouverte dun film de mthylpolysiloxane ou de phnyl mthylpolysiloxane 5 %, dune paisseur de
36、 0,10 m 0,30 m, pouvant tre utilise 370 C. 6.15 Microseringue, de 10 l, munie dune aiguille rigide, dune longueur minimale de 7,5 cm, pour injection directe sur colonne. 7 chantillonnage Lchantillonnage ne fait pas partie de la mthode spcifie dans la prsente Norme internationale. Une mthode dchantil
37、lonnage recommande est indique dans lISO 5555 3 . Il est important que le laboratoire reoive un chantillon rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors du transport ou de lentreposage. 8 Prparation de lchantillon pour essai Prparer lchantillon pour essai conformment lISO 661. Les huiles ayant
38、 une acidit libre suprieure 3 % ncessitent une tape de neutralisation comme spcifi ici. Dans une ampoule dcanter de 1 000 ml (6.13), introduire 50 g dhuile et diluer dans 200 ml de n-hexane (5.2). Ajouter 100 ml disopropanol (5.3) et un volume de la solution dhydroxyde de sodium (5.11) correspondant
39、 lacidit libre de lhuile avec un excs de 5 %. Agiter nergiquement pendant 1 min. Ajouter 100 ml deau, agiter de nouveau et laisser reposer. Aprs dcantation, liminer la couche infrieure contenant les savons. liminer galement toutes couches intermdiaires de mucilage et de substances insolubles qui app
40、araissent souvent. Laver la solution hexanique ISO 12872:2010(F) 4 ISO 2010 Tous droits rservsde lhuile avec des portions successives de 50 ml 60 ml du mlange isopropanol-eau (5.4) jusqu ce que la phase lave soit neutre en prsence de phnolphtaline (5.12). liminer la plus grande partie de lhexane par
41、 distillation sous vide, en utilisant par exemple un vaporateur rotatif (6.6) et transfrer lhuile dans un ballon de 100 ml (6.5). Scher lhuile sous vide jusqu limination totale du solvant. la fin de cette opration, sassurer que lacidit de lhuile est infrieure 0,5 %. 9 Mode opratoire 9.1 tapes prpara
42、toires 9.1.1 Introduire 1,0 g dhuile, prpare (Article 8) le cas chant, dans un Erlenmeyer de 25 ml (6.1) et dissoudre dans 10 ml de solvant dlution (5.10). Laisser reposer la solution pendant au moins 15 min avant de commencer la chromatographie sur colonne avec le gel de silice. Si la solution est
43、trouble, la centrifuger pour garantir des conditions optimales pour la chromatographie. Des cartouches de gel de silice pour extraction en phase solide (SPE) de 500 mg prtes lemploi peuvent tre utilises. 9.1.2 Verser dans la colonne pour chromatographie (6.3) environ 30 ml de solvant dlution (5.10),
44、 introduire un morceau de coton dans la partie infrieure de la colonne laide dune baguette de verre; presser pour liminer lair. Dans un bcher, prparer une suspension de 25 g de gel de silice (5.1) dans environ 80 ml de solvant dlution et la verser dans la colonne laide dun entonnoir. Vrifier que tou
45、t le gel de silice a t introduit dans la colonne; laver avec le solvant dlution, ouvrir le robinet et laisser le solvant scouler jusqu atteindre un niveau denviron 2 mm au-dessus du niveau du gel de silice. 9.2 Chromatographie sur colonne 9.2.1 Mode opratoire classique Dans un Erlenmeyer de 25 ml (6
46、1), peser, 0,1 mg prs, 1,0 g de lchantillon pour essai prpar (9.1.1). Dissoudre lchantillon dans 10 ml de solvant dlution (5.10). Verser la solution dans la colonne pour chromatographie (9.1.2). viter de remuer la surface de la colonne. Ouvrir le robinet et laisser scouler la solution dchantillon j
47、usqu ce quelle atteigne le niveau du gel de silice. luer avec 150 ml de solvant dlution. Ajuster le dbit 2 ml/min (150 ml doivent scouler dans la colonne en 60 min 70 min environ). Rcuprer lluat dans un ballon de 250 ml (6.5) pralablement tar. vaporer le solvant sous vide et liminer les dernires traces de solvant sous un courant dazote. Peser le ballon et calculer la masse rcupre par diffrence. 9.2.2 Mode opratoire avec utilisation de cartouches de silice SPE prtes lemploi
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