1、NORME INTERNATIONALE INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION l MEX)JYHAPOAHAII OPrAHM3ALWifl l-I0 CTAHjJAPTM3AMM.ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION Laine - Dtermination de la teneur en acide cystique dans les hydrolysats de laine par lectrophorse sur papier et calorimtrie Wool - Det
2、ermination of cysteic acid content of wool hydrolysates by paper electrophoresis and colorimetry Premire dition - 1975-05-01 CDU 677.31 : 677.01 Rf. no : ISO 29154975 (F) Descripteurs : textile, laine, analyse chimique, dosage, acide cystique, mthode par lectrophorse, mthode calorimtrique. Prix bas
3、sur 5 pages AVANT-PROPOS LISO (Organisation Internationale de Normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (Comits Membres 60). Llaboration de Normes Internationales est confie aux Comits Techniques ISO. Chaque Comit Membre intress par une tude a le droit de faire
4、partie du Comit Technique correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec IISO, participent galement aux travaux. Les Projets de Normes Internationales adopts par les Comits Techniques sont soumis aux Comits Membres pour approbation, avant
5、leur acceptation comme Normes Internationales par le Conseil de IISO. La Norme Internationale ISO 2915 a t tablie par le Comit Technique ISO/TC 38, Textiles, et soumise aux Comits Membres en dcembre 1972. Elle a t approuve par les Comit Membres des pays suivants : Afrique du Sud, Rp. d Allemagne Aus
6、tralie Belgique Bulgarie Canada Danemark gypte, Rp. arabe d Espagne Finlande France Hongrie Inde Iran Isral Japon Norvge Nouvelle-Zlande Pays-Bas Pologne Aucun Comit Membre na dsapprouv le document. Portugal Roumanie Royaume-Uni Sude Suisse Tchcoslovaquie Thalande Turquie U.R.S.S. 0 Organisation Int
7、ernationale de Normalisation, 1975 l Imprim en Suisse NORME IN-l-ERNATIONALE ISO 2915-1975 (F) Laine - Dtermination de la teneur en acide cystique dans les hydrolysats de laine par lectrophorse sur papier et calorimtrie 0 INTRODUCTION La prsente Norme Internationale reprend le contenu de la mthode F
8、LI-23-70, mise au point par la Fdration lainire internationale (F LI). Lacide cysteique est lun des produits doxydation des acides arnins cystine et cystine. La teneur en acide cystique de la laine brute est nsrmalement extrmement faible; elle augmente par dgradation photochimique (exposition aux in
9、tempries). Les traitements dapprt, tels que lclaircissement, le blanchiment ou le chiorage entranent toujours une augmentation de la teneur en acide cystique. Le dosage quantitatif de lacide cystique permet de dterminer directement le degr de loxydtion, quelquefois sa nature. Exceptionnellement, il
10、peut tre utile de contrler, titre de comparaison, les matires textiles non traites ou non dgrades. 1 OBJET ET DOMAINE DAPPLICATIION La prsente Norme Internationale spcifie une mthode de dtermination de la teneur en acide cystique des hydrolysats de laine par lectrophorse sur papier et calorimtrie. L
11、a mthode est applicable directement la laine pure, teinte ou non teinte, sous quelque forme que ce soit, cest-dire en bourre, ruban, mche, fil ou toffe. Dans le cas de mlanges, ii convient de dterminer exactement le pourcentage de laine. La mthode sapplique galement aux laines carbonises. 2 PRINCIPE
12、 Aprs lhydrolyse dune prise dessai de la laine contrler, sparation de lacide cystique, existant dans Ihydroiysat, des autres acides amins par lectrophorse sur papier. Coloration de la bande de papier, puis iution de la zone renfermant lacide cystique. Par comparaison avec une quantit dtermine dacide
13、 cystique dpos en mme temps, dtermination par calorimtrie de la teneur en acide cystique. 3 RACTIFS Au cours de lanalyse, nutiliser que des ractifs de qualit analytique reconnue, et que de leau distille ou de leau de puret quivalente. 3.1 Mthanol. 3.2 Acide chlorhydrique, solution 57 N, obtenue par
14、distillation azotropique partir dacide chlorhydrique concentr p 1,19 g/ml. 3.3 actif ninhydrine-cadmium. Dissoudre 100 mg dactate de cadmium dans 10 ml deau, ajouter successivement 5 ml dacide actique cristallisable, 100 ml dactone et 1 g de ninhydrine. Le ractif peut tre conserv en flacon brun, au
15、rfrigrateur, durant une semaine. Nutiliser quune seule fois la fraction de ractif prleve pour une rvlation colore dtermine. 3.4 Solution tampon, pH 35. Dissoudre 10 ml de pyridine et 100 ml dacide actique cristallisable dans 890 ml deau distille. Renouveier la solution tampon toutes les cinq sparati
16、ons. 3.5 Acide cystique, solution talon. Dans une fiole jauge de 100 ml, dissoudre, dans de leau distii le, II 06 mg dacide cystique monohydrat (correspondant 100 mg dacide cystique anhydre). Avant pesage, scher lacide cystique en le maintenant 24 h 70 “C environ sur de lanhydride phosphorique, dans
17、 un appareillage appropri (par exemple pistolet). 3.6 Chlorure de baryum, solution. Dans une fiole jauge de 100 ml, dissoudre dans de leau distille, 25 g de chlorure de baryum dihydrat (BaCl,.2H,O). 4 APPAREILLAGE 4.1 Vases peser. 4.2 Balance analytique, prcise 0,000 2 g. 4.3 tuve ventile, rglable 1
18、05 + 2 “C pour le schage et lhydrolyse des prises dessai analyser, et 70 “C pour le schage du papier. 4.4 Dessiccateur. 4.5 Tube en verre paroi paisse, de diamtre 2 cm envi- ron et de longueur 30 cm. 1 ISO 2915-1975 (F) 4.6 Pince et baguette en verre. 4.7 Chalumeau. 4.8 Couteau verre, 4.9 Pipette, d
19、e 20 ml 4.10 Pipettes, deux de 1 ml. 4.11 Pipettes de prcision, de 0,Ol ml. 4.12 Ballons fond rond, de 100 ml et de 250 ml. 4.13 Fiole jauge, de 100 ml. 4.14 Fioles jauges, deux de 5 ml. 4.15 Bcher, de 250 ml. 4.16 Evaporateur rotatif. 4.17 Chambre dlectrophorse et appareil dalimentation lectrique.
20、4.18 Bandes ou feuilles de papier filtre (Whatman No 1, ou Schleicher et Schull No 2043 aMgl ou tout autre papier de mme qualit). 4.19 Tube essais et support 4.20 Cuve de teinture ou cuve en verre. 4.21 Spectrophotomtre ou photomtre, muni dun filtre ayant une absorption maximale une longueur donde d
21、e 500* IOnm. Lappareil doit permettre de lire les densits optiques dans une zone comprise entre 0 et 0,7, 0,Ol prs, et dvaluer la dcimale suivante. 4.22 Bain thermostatique, rempli #huile point dbullition lev, ou plaque chauffante, munie dune plaque en amiante (voir 6.3). 4.23 Rfrigrant reflux. 5 PR
22、LVEMENT DE LCHANTILLON ET PRPARATION DES PRISES DESSAI Prlever, sur le lot tudier, un chantillon reprsentatif, en quantit suffisante pour obtenir les prises dessai suivantes : - deux prises dessai, chacune de masse 1 g environ, pour la dtermination de la masse dshydrate; - une prise dessai de masse
23、1 g environ, pour la prparation de Ihydrolysat. liminer toutes les impurets vgtales et autres substances trangres de la laine en bourre. Rduire ltat de fil de courte longueur (1 cm environ) les chantillons de fil ou dtoffe. Les matires feutres, qui ne peuvent tre rduites ltat de fil, doivent tre cou
24、pes en petits morceaux. Extraire lchantillon, par du dichloromthane, durant 1 h dans un extracteur Soxhlet, vitesse minimale de 6 cycles lheure, et laisser vaporer le dichloromthane de lchantillon nettoy. 6 MODE OPRATOIRE 6.1 Pesage des prises dessai Peser, successivement, 0,000 2 g prs, les trois p
25、rises dessai dcrites dans le chapitre 5. Utiliser deux dentre elles pour dterminer la masse dshydrate (voir 6.2), et lautre pour prparer Ihydrolysat (voir 6.3). 6.2 Dtermination de la masse dshydrate Introduire chacune des deux prises dessai dans un vase peser (4.1), et les scher 105 * 2 “C dans ltu
26、ve (4.3). Puis boucher les vases et les laisser refroidir dans le dessiccateur (4.4), et peser. Rpter ces oprations jusqu masse constante.1 ) Retirer les prises dessai des vases peser, peser les vases vides, et en dduire la masse dshydrate des prises dessai. Calculer alors, par proportion, la masse
27、dshydrate de la prise dessai pour Ihydrolysat. 6.3 Hydrolyse Lhydrolyse doit tre effectue selon lune des mthodes suivantes : a) Introduire la prise dessai (6.1) pese et destine lhydrolyse, et 20 ml de la solution dacide chlorhydrique (3.2) dans un ballon fond rond de 100 ml, sur lequel sadapte un rf
28、rigrant reflux (4.23). Immerger le ballon dans le bain thermostatique (4.22) rempli dhuile point dbullition lev, et hydrolyser durant 4 h 105 “C. la place du bain dhuile, on peut galement utiliser une plaque chauffante conjointement avec une plaque en amiante. Introduire le ballon fond rond dans un
29、trou mnag dans la plaque en amiante de facon que le niveau du liquide reste visible et que le fond du ballon ne soit pas en contact avec la plaque chauffante. b) Introduire la prise dessai (6.1) pese et destine I hydrolyse, et 20 ml de la solution dacide chlorhydrique (3.2) mesurs avec la pipette (4
30、.9), dans te tube en verre paroi paisse (4.5). Sceller le tube au chalumeau (4.7) et laisser 24 h dans ltuve 105 “C. Pendant cette priode, agiter le tube plusieurs fois jusqu ce quil ny ait plus de rsidu de fibres dans lhydrolysat. 1) La masse constante est obtenue lorsque la masse de la prise dessa
31、i ne varie pas de plus de 0,000 2 aprs un nouveau schage durant 30 min au moins. 2 ISO 29154975 (F) . Transvaser Ihydrolysat obtenu selon la mthode a) ou b), accompagn de leau avec laquelle on a effectu les ri ncages : - soit, dans le cas o lchantillon nest pas de la laine carbonise, dans un ballon
32、fond rond (4.12) de 250 ml; - soit, dans le cas o lchantillon est de la laine carbonise ) , dans le bcher (4.15) de 250 ml, et chauffer jusqu lbullition. la solution bouillante, ajouter goutte goutte, laide dune pipette (4.10) et en agitant avec la baguette en verre (4.6) 1 ml de la solution de chlo
33、rure de baryum (3.6). Aprs que la solution refroidie a repos toute la nuit, filtrer dans un ballon fond rond (4.12) de 250 ml, en ayant soin de rincer correctement le papier filtre. Ensuite, et dans les deux cas, concentrer la solution une consistance sirupeuse, laide de lvaporateur rotatif (4.16) 5
34、0 “C. Pour liminer lacide chlorhydrique en excs, reprendre trois fois le sirop avec 10 ml deau, et reconcentrer chaque fois dans lvaporateur rotatif. Transfrer le rsidu ainsi obtenu, quantitativement, laide dun peu deau, dans une fiole jauge (4.14) de 5 ml, et diluer jusquau trait repre. 6.4 lectrop
35、horse Pour la sparation par lectrophorse, un appareil basse tension peut tre utilis. Tout appareil ayant, de prfrence, une tension de sortie de 300 V environ, peut convenir. Pour acclrer lanalyse, un appareil ayant une tension de sortie plus haute (jusqu 1 500 V environ) peut tre utilis. La chambre
36、de sparation doit pouvoir recevoir des bandes OU des feuilles de papier (4.18) dau moins 30 cm de long (distance entre les lectrodes). Matrialiser, au moyen dun trac de crayon, le milieu des supports en papier. Avec une pipette de prcision (4.11) dposer 001 ml de Ihydrolysat (6.3) tudier, sous forme
37、 dune ligne continue suivant le trac au crayon. Pratiquer cette opration sur deux bandes de papier, pour obtenir une double dtermination. Sur une autre bande de papier, ou bien sur une autre partie de la ligne trace sur la feuille, dposer 0,Ol ml de solution talon dacide cystique (3.5). Dans tous le
38、s cas, prendre soin de dposer rgulirement tout le contenu de la pipette sur la ligne de dpt, en mnageant un espace libre dau moins 05 cm partir du bord du papier. Introduire les deux extrmits du papier dans la cuve contenant les lectrodes. Le papier filtre absorbe rgulirement la solution tampon (3.4
39、). La dure dabsorption peut tre rduite en pulvrisant de la solution tampon sur le papier. Lorsque le papier est compltement imprgn de la solution tampon, appliquer une tension comprise entre 5 et 8 V/cm (soit entre 200 et 300 V selon la longueur du papier). Llectrophorse dure de 4 5 h. Retirer alors
40、 les bandes (ou feuilles) de papier, les accrocher par leurs extrmits anodiques dans ltuve (4.3), et les scher durant 30 min 70 “C. 6.5 Dveloppement de la coloration et lution Aprs avoir sch les bandes (ou feuilles) de papier, les imprgner soigneusement laide dun peu de ia solution de ninhydrine-cad
41、mium (3.3) rpartie en couche mince sur le fond de la cuve en verre (4.20). Dans ces conditions, le papier absorbe seulement la solution ractive, mais nest en aucun cas immerg dans celle-ci. Suspendre ensuite les papiers durant 30 min 70 “C danS ltuve, lextrmit anodique du papier tant place en haut.
42、Selon la tension applique et la dure de Ilectrophorse, la zone de lacide cystique est dplace de 4 6 cm en direction de lanode par rapport sa position initiale. Dcouper en surfaces autant que possible identiques les deux zones; acide cystique de Ihydrolysat et acide cystique de la solution talon. Dco
43、uper les surfaces en plusieurs morceaux, et les introduire dans trois tubes essais (4.19). Dans un quatrime tube essais, placer un morceau dcoup de la mme facon dune bande de papier de mme grandeur prleve entre la zone acide cystique et lextrmit anodique du papier (voir schma), de facon que la teint
44、e du papier de cette zone dcoupe soit identique celle de lensemble de la bande de papier. Lluat de ce papier permettra dobtenir un tmoin c blanc) du fond du papier (valeur de rfrence). 2. Zone acide cystique F I G UR E - Schma de sparation par iectrophorse Dans chacun des quatre tubes essais, introd
45、uire, laide dune pipette, 5 ml de mthanol (3.1). Aprs avoir agit lgrement plusieurs reprises, le colorant rouge est lu du papier en 30 min. 6.6 Colorimtrie Effectuer les mesurages des densits optiques une longueur donde de 500 + 10 nm, en utilisant des cuves de 10 mm de parcours optique. Les densits
46、 optiques se situent entre 02 et 07. Si lon obtient des valeurs trop 1) Dans le cas o lchantillon est de la laine carbonise, il est ncessaire dliminer de cette laine lacide sulfurique rsiduel en le prcipitant sous forme de sulfate de baryum. Sil nest pas limin, lacide sulfurique rsiduel peut interve
47、nir pendant la concentration pour former du sulfate de srine qui, se dplacant en lectrophorse comme lacide cystique, peut provoquer, par sa prsence, une valuation errone de la teneur en acide cystique. 3 ISO 29154975 (F) leves, ou si lon prvoit une teneur trs forte en acide cystique, utiliser une prise dessai moins importante, ou bien reprendre Ihydrolysat dans une fiole jauge de 10 m
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