ISO 4134-1999 Meat and meat products - Determination of L-(+)-glutamic acid content - Reference method《肉和肉制品 L-(+)-谷氨酸含量的测定 参照法》.pdf

1、A Numroderfrence ISO4134:1999 (F) NORME INTERNATIONALE ISO 4134 Deuximedition 19991201 Viandeetproduitsbasedeviande Dterminationdelateneurenacide L(+)glutamiqueMthodederfrence MeatandmeatproductsDeterminationof L (+)glutamicacidcontent ReferencemethodISO4134:1999(F) ISO1999 Droitsdereproductionrserv

2、s.Saufprescriptiondiffrente,aucunepartiedecettepublicationnepeuttrereproduiteniut ilisesousquelque formequecesoitetparaucunprocd,lectroniqueoumcanique,ycomprislaphotocopieetlesmicrofilms,sanslaccordcr itdelditeur. Organisationinternationaledenormalisation Casepostale56 CH1211Genve20 Suisse Internet

3、isoiso.ch ImprimenSuisse ii Avantpropos LISO(Organisationinternationaledenormalisation)estunefdrationmondialedorganismesnationauxde normalisation(comitsmembresdelISO).LlaborationdesNormesinternationalesestengnralconfieaux comitstechniquesdelISO.Chaquecomitmembreintressparunetudealedroitdefairepartie

4、ducomit techniquecrceteffet.Lesorganisationsinternationales,gouvernementalesetnongouvernementales,en liaisonaveclISOparticipentgalementauxtravaux.LISOcollaboretroitementaveclaCommission lectrotechniqueinternationale(CEI)encequiconcernelanormalisationlectrotechnique. LesNormesinternationalessontrdige

5、sconformmentauxrglesdonnesdanslesDirectivesISO/CEI,Partie3. LesprojetsdeNormesinternationalesadoptsparlescomitstechniquessontsoumisauxcomitsmembrespour vote.LeurpublicationcommeNormesinternationalesrequiertlapprobationde75 %aumoinsdescomits membresvotants. LaNormeinternationaleISO 4134atlaboreparlec

6、omittechniqueISO/TC 34, Produitsagricoles alimentaires,souscomitSC6, Viandeetproduitsbasedeviande . Cettedeuximeditionannuleetremplacelapremiredition(ISO4134:1978),dontelleconstitueunervision technique. LannexeAconstitueunlmentnormatifdelaprsenteNormeinternationale.LesannexesBetCsontdonnes uniquemen

7、ttitredinformation.NORMEINTERNATIONALE ISO ISO4134:1999(F) 1 ViandeetproduitsbasedeviandeDterminationdela teneurenacide L(+)glutamiqueMthodederfrence 1Domaine dapplication LaprsenteNormeinternationalespcifieunemthodederfrencepourladterminationdelateneurenacide L(+)glutamiquedesviandesetproduitsbased

8、eviande,ycomprislavolaille. 2Rfrences normatives Lesdocumentsnormatifssuivantscontiennentdesdispositionsqui,parsuitedelarfrencequiyestfaite, constituentdesdispositionsvalablespourlaprsenteNormeinternationale.Pourlesrfrencesdates,les amendementsultrieursoulesrvisionsdecespublicationsnesappliquentpas.

9、Toutefois,lespartiesprenantes auxaccordsfondssurlaprsenteNormeinternationalesontinvitesrechercherlapossibilitdappliquerles ditionslesplusrcentesdesdocumentsnormatifsindiqusciaprs.Pourlesrfrencesnondates,ladernire ditiondudocumentnormatifenrfrencesapplique.LesmembresdelISOetdelaCEIpossdentleregistred

10、es Normesinternationalesenvigueur. ISO648, VerreriedelaboratoirePipettesuntrait. ISO8352, VerreriedelaboratoirePipettesgraduesPartie2:Pipettessanstempsdattente. ISO1042, VerreriedelaboratoireFiolesjaugesuntrait. ISO1442, ViandeetproduitsbasedeviandeDterminationdelhumidit(Mthodederfrence). 3 Termeetd

11、finition Pourlesbesoinsdelaprsente Normeinternationale,letermeetladfinitionsuivantssappliquent. 3.1 teneurenacide L(+)glutamiquedesviandesetproduitsbasedeviande fractionmassiquedacide L(+)glutamiquedtermineselonlamthodedcritedanslaprsenteNorme internationale NOTE Lateneurenacide L(+)glutamiqueestexp

12、rimeenpourcentage. 4Principe Lacide L(+)glutamiqueprsentdansuneprisedessaiestextraitaumoyendunesolutiondacideperchlorique unetempraturede0C.Lextraitestcentrifug,dcantetfiltr,puislepHestajust10,0.Ladinuclotide nicotinamideadnine(NAD)estrduiteparlacide L(+)glutamiqueenprsencedeglutamatedhydrognase qua

13、tion (1).Ladinuclotidenicotinamideadninerduitersultante(NADH)ragitavecduchlorure diodonitrottrazoliumenprsencedediaphorasequation(2).Laformazanersultanteestmesureune longueurdondede492nmetlateneurenacide L(+)glutamiqueestcalcule.ISO4134:1999(F) ISO 2 L(+)glutamate+NAD + +H 2 O a ctoglutamate+NADH+NH

14、 3 +H + (1) NADH+chlorurediodonitrottrazolium+H + NAD + +formazane (2) 5Ractifs Saufindicationdiffrente,utiliseruniquementdesractifsdequalitanalytiquereconnue. Conservertouteslessolutions,sauflessolutionsdescompossminraux(5.2et5.3),dansdesrcipientsferms enverrebrun,soigneusementnettoyspuistraitslava

15、peuroustriliss. 5.1 Eaubidistille ,oueaudistilleetdminraliseobtenueenralisantladistillationfinaledansunappareil entirementenverre. NOTE Leaudistilleuneseulefoispeutcontenirdestracesdionsmtalliquesetleaudminralisepeutcontenirdes microorganismes.Lesionsmtalliquespeuventprovoquerunediminutiondelactivit

16、desenzymes,tandisquelesmicro organismespeuventdonnerlieuuneactivitenzymatiquesecondairenonspcifiquequipourraitaffecterdfavorablement lesrsultatsdelanalyse. 5.2 Acideperchloriquedilu , c(HCIO 4 )=1,0mol/l. AVERTISSEMENTLecontactavecunmatriauoxydableoucombustibleouavecdesagents dshydratantsourducteurs

17、peutentraneruneinflammationouuneexplosion.Ilconvientqueles personnesutilisantcetacidesoientfamiliarisesaveclesrisquescorrespondants.Voirlespratiquesde scuritmentionneslannexeA. Diluer8,6mldacideperchlorique70%(enmasse), r 20 =1,67g/ml,100mlavecdeleau(5.1).Ajouterlacide perchloriquedanslaplusgrandepa

18、rtiedeleauavantdilutionfinaleauvolumeethomogniser. 5.3 Hydroxydedepotassium ,solution, c(KOH)=2mol/l. Dissoudre56,1gdhydroxydedepotassiumdansdeleau(5.1).Laisserrefroidir,puiscomplter500mlet homogniser. 5.4 Phosphatetrithanolamine ,solutiontampon,pH=8,6. Dissoudre1,86gdechlorhydratedetrithanolamineda

19、nsdeleau(5.1)etajusterlepH8,6aumoyendela solutiondhydroxydedepotassium(5.3),enseservantdunpHmtre.Ajouter0,68gdoctylphnoldcathylne glycolther(parexempleTritonX100).Complter100mlavecdeleaupuishomogniser(solutionA). Dissoudre0,86 gdhydrognophosphatedipotassique(K 2 HPO 4 )et7 mgdedihydrognoorthophospha

20、tede potassium(KH 2 PO 4 )dansdeleau(5.1).Complter100mlavecdeleaupuishomogniser(solutionB). Mlanger20mldesolutionAavec5mldelasolutionB. Lasolutionrestestablependant2moissielleestconserveunetempraturecompriseentre0Cet6C. 5.5 Dinuclotidenicotinamideadnine(NAD) ,solution. Peser25mgdeNADdansunefioletroi

21、tebouche.Ajouter5,0mldeau(5.1)ethomogniser. Cettesolutionrestestablependant2moissielleestconservelabridelalumireetunetempraturecomprise entre0Cet6C.ISO ISO4134:1999(F) 3 5.6 Chlorurediodonitrottrazolium(INT) chlorurede(4iodophnyl)2(4nitrophnyl)3phnylttrazolium5, solution. Peser30mgdINTdansunefioletr

22、oitebouche,enverrebrun.Ajouter50mldeau(5.1)ethomogniser. Cettesolutionrestestablependant4semainessielleestconservelabridelalumireetunetemprature compriseentre0Cet6C. 5.7 Diaphorase(lipoaminedhydrognase,EC 1) 1.8.1.4),solution. Dissoudre3mgdediaphoraselyophilisedans1mldeau(5.1)ethomogniser. Cettesolu

23、tionrestestablependant4semainessielleestconserveunetempraturecompriseentre0Cet 6C. 5.8 Glutamatedhydrognase(GLDH)(EC 1) 1.4.1.3),solution10mg/ml,exemptedesulfatedammonium, dacidethylnedinitrilottraactique(EDTA)etdeglutaminase. Cettesolutionestfournietellequelle(parexempleenquantitsde1,0ml)etrestesta

24、blependant12moissielleest conserveunetempraturecompriseentre0Cet6C. 5.9 Acide L(+)glutamique ,solutiontalon. Dissoudre50,0mgdacide L(+)glutamique(C 5 H 9 O 4 N)dans25mldeau(5.1).AjusterlepH7,0aumoyendela solutiondhydroxydedepotassium(5.3).Diluer50mlethomogniser. Conservercettesolutionunetempratureco

25、mpriseentre0Cet6Cetladiluer1+49peudetempsavant usage. 6Appareillage Matrielcourantdelaboratoireet,enparticulier,cequisuit. 6.1 Appareilmcaniqueoulectrique ,capabledhomogniserlchantillonpourlaboratoire. Cetappareilcomprenduncouteaurotatifgrandevitesseouunhachoirmuniduneplaqueavecdestrous nexcdantpas4

26、0mmdediamtre. 6.2 Mlangeurdelaboratoire. 6.3 Centrifugeusedelaboratoire ,muniedetubesdecentrifugeusede50mlou100ml,ayantuneacclration radialedenviron2000 g n . 6.4 pHmtre. 6.5 Papierfiltrepliss ,dediamtre15cmenviron,vitessemoyenneouleve. 6.6 Fiolesjaugesuntrait ,decapacits100mlet250ml,conformeslISO1

27、042,classeB. 6.7 Pipettesuntrait ,decapacits100ml,50mlet25ml,conformeslISO648,classeB. 1) LenumroECserfreauEnzymeClassificationNumbertelquilestdonndans:TheInternationalUnionof Biochemistry, Enzymenomenclature ,Elsevier,Amsterdam,1965.ISO4134:1999(F) ISO 4 6.8 Pipettes(automatiques)gradues ,permettan

28、tdedlivrer2,50ml,0,50ml,0,20mlet0,05ml,conformes lISO8352,classeA. 6.9 Spatuletroite ,enplastique,courbe90,destinemlangerlecontenudescuvesdephotomtre. 6.10 Colorimtrephotolectrique,munidunfiltreayantsonabsorbancemaximaleunelongueurdondede 492nm,ou spectromtre. 6.11 Cuvesdephotomtre ,de10mmdetrajetop

29、tique. 6.12 Balanceanalytique ,prcise0,1mgprs. 7chantillonnage LchantillonnagenefaitpaspartiedelamthodespcifiedanslaprsenteNormeinternationale.Unemthode dchantillonnagerecommandeestdonnedanslISO31001. Ilestimportantquelelaboratoirereoiveunchantillonvraimentreprsentatif,nonendommagoumodifilorsdu tran

30、sportetdelentreposage. Partirdunchantillonreprsentatifdaumoins200g.Leconserverdemanirevitertoutedtriorationou changementdelacomposition. 8 Prparationdelchantillonpouressai Homogniserlchantillonpourlaboratoirelaidedelappareilappropri(6.1).Veillercequelatempraturedu matriauchantillonnedpassepas25C.Enc

31、asdutilisationdunhachoir,fairepasserlchantillonaumoins deuxfoisdanslappareil. Placerlchantillonprpardansunrcipienthermtiqueconvenable.Fermerlercipientetlestockerdemanire vitertoutedtriorationouchangementdelacomposition.Analyserlchantillonaussirapidementquepossible, maistoujoursdansles24hquisuiventlh

32、omognisation. 9Mode opratoire NOTE Silestdemanddevrifierquelonsatisfaitauxexigencesdonnesencequiconcernelalimitederptabilit (11.2),effectuerdeuxdterminationssparesconformment9.19.3. 9.1Prise dessai Peser,0,01gprs,environ50gdelchantillonpouressai(article8)ettransfrercetteprisedessaidansle rcipientdum

33、langeurdelaboratoire(6.2). 9.2 Prparationdelextrait 9.2.1 Ajouter100mldelasolutiondacideperchloriquedilu(5.2)unetempraturede0C,ethomogniser. 9.2.2 Transfrerunepartieduproduithomognisdansuntubedelacentrifugeuse(6.3).Centrifugerdurant 10minsousuneacclrationde2000 g n .Aprsavoirsoigneusementmisdectlaco

34、uchedematiregrasse, dcanterleliquidesurnageantsurunpapierfiltrepliss(6.5)etrecueillirlefiltratdansunefioleconiquede200ml. Rejeterlespremiers10mldufiltrat. 9.2.3 Transvaserlapipette(6.7)50mldelasolution(quinedevraittrequelgrementtrouble)dansunbcher de100ml.AjusterlepH10,0aumoyendelasolutiondhydroxyde

35、depotassium(5.3)etenseservantdun pHmtre(6.4).ISO ISO4134:1999(F) 5 9.2.4 Transvaserquantitativementlecontenudubcherdansunefiolejaugede100ml(6.6).Complterautrait repreavecdeleau(5.1)etagiter. 9.2.5 Refroidirlasolutiondanslaglacedurant10minetfiltrersurunpapierfiltrepliss(6.5).Rejeterlespremiers 10mldu

36、filtrat. 9.2.6 Introduire25mlouunautrevolumeappropri( V)dufiltrat,prlevslapipette,dansunefiolejaugede 250ml(6.6)etcomplterautraitrepreavecdeleau(5.1). NOTE Ilconvientdechoisirlevolume Vdefaonquelaconcentrationenacide L(+)glutamiquesoitinfrieure30mg/l. 9.3Dtermination 9.3.1 Porterlasolutiontampon(5.4

37、)etlefiltrat(9.2.6)unetempraturecompriseentre20Cet25C. Introduire,lapipette,danschacunedesdeuxcuvesdephotomtre(6.11),2,50mldelasolutiontampon(5.4), 0,20mldelasolutiondeNAD(5.5),0,20mldelasolutiondINT(5.6)et0,05mldelasolutiondediaphorase(5.7). AprslajoutdINT,rduireaustrictminimumlexpositiondumlangera

38、ctiflalumire. Ajouter,lapipette,0,50mldufiltrat(9.2.6)danslunedescuves;lasolutionobtenueestlasolutiondessai. Ajouter,lapipette,0,50mldeau(5.1)danslautrecuve;lasolutionobtenueestlasolutionblanc. Mlangerlessolutionslaidedelaspatuleenplastique(6.9)etlirelabsorbance A 1 dechaquecuve,lalongueur dondede49

39、2nm,parrapportleau.Latempraturedelasolutiondoittrecompriseentre20Cet25C. 9.3.2 Introduire,lapipette,danschacunedesdeuxcuves,0,05mldelasolutiondeGLDH(5.8).Mlangerle contenudescuves,enagitantdehautenbasaveclaspatule. Auboutde10min15min,lirelabsorbance A 2 dechaquecuve,lalongueurdondede492nm,parrapport

40、 leau,etensuitetoutesles2minjusqulobtentionduneaugmentationconstantedelabsorbance.Tracerun graphiqueenportantlabsorbanceenfonctiondutemps.Obtenirparextrapolationlesvaleursdelabsorbanceau momentdudbutdelaraction(voirlannexeB). 9.3.3 Rpterlesoprationsdcritesen9.3.1et9.3.2,maisenremplaant,danslapremirecuve,les0,50mlde filtrat(9.2.6)par0,50mldelasolutiontalo