1、NORME INTERNATIONALE ISO 6870 Deuxime dition 2002-04-15 Numro de rfrence ISO 6870:2002(F) ISO 2002 Aliments des animaux Dosage qualitatif de la zaralnone Animal feeding stuffs Qualitative determination of zearalenoneISO 6870:2002(F) ii ISO 2002 Tous droits rservs PDF Exonration de responsabilit Le p
2、rsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y
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6、e que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou au comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E
7、-mail copyrightiso.ch Web www.iso.ch Imprim en SuisseISO 6870:2002(F) ISO 2002 Tous droits rservs iii Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est
8、 en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troi
9、tement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 3. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont s
10、oumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments de la prsente Norme internationale peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle o
11、u de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. La Norme internationale ISO 6870 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous- comit SC 10, Aliments des animaux. Cette deuxim
12、e dition annule et remplace la premire dition (ISO 6870:1985), dont elle constitue une rvision mineure. Le titre a t modif pour souligner le fait que la mthode nest que qualitative, et dans le domaine dapplication il est maintenant spcifi que la mthode ne sert qu des fins de dtection. La plage des t
13、empratures indique en 3.8.2 a t rectifie pour lire 0 C 5 C. Lannexe A de la prsente Norme internationale est donne uniquement titre dinformation.NORME INTERNATIONALE ISO 6870:2002(F) ISO 2002 Tous droits rservs 1 Aliments des animaux Dosage qualitatif de la zaralnone 1 Domaine dapplication La prsent
14、e Norme internationale spcifie une mthode qualitative de dosage de la zaralnone dans les aliments des animaux et en particulier dans le mas. Cette mthode ne sert qu des fins de dtection. La limite de dtermination de la zaralnone se situe aux environs de . NOTE Bien que le sorgho prsente des taches p
15、arasites de fluorescence identiques celles de la zaralnone, la mthode est applicable cet aliment, car les valeurs de sont diffrentes aprs le dveloppement du chromatogramme dans la seconde direction. Ces taches ne sont pas rvles par la technique de confirmation spcifie. 2P r i n c i p e Extraction su
16、r une prise dessai par un mlange dactonitrile et de solution de chlorure de potassium. Filtration, prlvement dune partie aliquote suivi dune dlipidation liso-octane puis dune purification dans un mlange dactonitrile, deau et dactate de plomb en prsence de terre de diatomes. Aprs filtration, prlvemen
17、t dune partie aliquote et extraction dans du chloroforme qui est ensuite vapor. Dissolution de lextrait sec dans un mlange de benzne et dactonitrile et chromatographie bidimensionnelle sur couche mince dune partie aliquote de cette solution. Dtermination de la teneur en zaralnone par mesure visuelle
18、 ou par mesure, laide dun fluorodensitomtre, de lintensit de fluorescence de la tache examine la lumire UV, par comparaison avec des quantits connues dun talon de zaralnone plac sur la mme plaque. Confirmation de lidentit de la zaralnone laide dun ractif la benzidine bis-diazote. 3R actifs Utiliser
19、uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue et de leau distille ou dminralise ou de leau de puret quivalente. 3.1 Actonitrile. 3.2 Iso-octane. 3.3 Chloroforme. AVERTISSEMENT Le chloroforme est une substance toxique. viter linhalation de chloroforme et lexposition au chloroforme. Travailler
20、sous hotte ventile lors de la manipulation du solvant ou de ses solutions. 3.4 Mlange de benzne-actonitrile, , en volume. AVERTISSEMENT Le benzne est une substance toxique par inhalation et contact avec la peau, et trs inflammable. 50 g/kg R f 98+ 2ISO 6870:2002(F) 2 ISO 2002 Tous droits rservs 3.5
21、Solvants de dveloppement. 3.5.1 Mlange de tolune-actate dthyle-acide formique, , en volume. 3.5.2 Mlange de chloroforme-thanol, , en volume. 3.6 Chlorure de potassium, solution . 3.7 Actate de plomb, solution prpare comme suit. Peser dans une fiole de , dactate de plomb, ajouter dacide actique, comp
22、lter au trait repre avec de leau et homogniser. 3.8 Ractif la benzidine bis-diazote, prpar comme suit. AVERTISSEMENT La benzidine est une substance cancrogne trs toxique par inhalation, contact avec la peau et ingestion. 3.8.1 Prparation dune solution de benzidine Mettre de benzidine dans une fiole
23、de contenant deau et dacide chlorhydrique, puis complter avec de leau. Conserver cette solution labri de la lumire dans un flacon en verre inactinique. 3.8.2 Prparation du ractif Refroidir une temprature comprise entre et des volumes gaux de la solution de benzidine (3.8.1) et dune solution de nitri
24、te de sodium . Mlanger avec soin les deux solutions. La solution obtenue est trouble et de couleur pourpre fonc. La laisser se rchauffer la temprature du laboratoire avant utilisation (solution de couleur jaune). Prparer ce ractif extemporanment. 3.9 Terre de diatomes (Celite 545), lave lacide chlor
25、hydrique. 3.10 Azote. 3.11 Zaralnone, solution talon dans le benzne. Dterminer le spectre dabsorption de la solution entre et , laide dun spectromtre, dans une cuve en silice de dpaisseur, par rapport au benzne, et relever le maximum dabsorbance ( ) qui est proche de . Calculer la concentration en z
26、aralnone, en microgrammes par millitre, de la solution, laide de la formule suivante: o 318 est la masse molaire de la zaralnone; 6 060 est le coefficient dextinction molaire. 6+ 3+ 1 95+ 5 40 g/l 1 000 ml 200 g 3 ml 5 g/l 0,5 g 100 ml 20 ml 1,5 ml 0 C5 C 100 g/l 10 g/ml 300 nm 330 nm 10 mm A 317 nm
27、 318A 1 000 6 060ISO 6870:2002(F) ISO 2002 Tous droits rservs 3 4 Appareillage Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit. 4.1 Broyeur, permettant dobtenir un produit qui passe en totalit au travers dun tamis de douverture de maille. 4.2 Agitateur, permettant dobtenir environ 100
28、 oscillations par minute. 4.3 Papier-filtre, filtration moyenne (un papier filtration rapide donne une solution trouble, et un papier filtration lente entrane des colmatages). 4.4 Appareil rotatif vaporation sous pression rduite avec ballon fond rond. 4.5 Appareillage pour chromatographie sur couche
29、 mince, savoir matriel ncessaire la prparation des plaques (4.6) et au dpt des taches (pipettes capillaires ou microseringues), cuve de dveloppement et appareil pour pulvriser le ractif (3.8) sur les plaques. 4.6 Plaques de verre pour chromatographie sur couche mince, de dimensions , prpares comme s
30、uit (les quantits indiques conviennent pour la prparation de cinq plaques). Introduire de gel de silice G-HR dans une fiole conique, ajouter deau, boucher et agiter pendant . tendre la suspension sur les plaques de manire obtenir une couche uniforme de dpaisseur. Laisser scher lair et conserver ensu
31、ite les plaques dans un dessiccateur. Au moment de lemploi, activer les plaques en les maintenant durant dans ltuve rgle . Les plaques prtes lemploi conviennent dans la mesure o elles donnent des rsultats semblables ceux obtenus avec des plaques prpares comme indiqu ci-dessus. 4.7 Lampe UV ondes cou
32、rtes (longueur donde ). Lintensit dirradiation doit permettre de distinguer encore nettement une tache de de zaralnone sur une plaque pour chromatographie sur couche mince, une distance de de la lampe. AVERTISSEMENT La lumire UV tant dangereuse pour les yeux, il y a lieu de porter des lunettes prote
33、ctrices. 4.8 Tube essais, de de capacit avec bouchon de polythylne. 4.9 Fluorodensitomtre (ventuellement, mais de prfrence). 4.10 Bain deau, rglable . 4.11 Fiole conique, de de capacit, joint rod. 4.12 Ampoules dcanter, de de capacit. 4.13 prouvettes gradues, de et de capacit. 4.14 Pipettes, de et d
34、e capacit. 4.15 Microseringues. 5 chantillonnage Prlever lchantillon pour laboratoire sur le produit chantillonner, en se conformant la Norme internationale relative au produit concern, sauf si lchantillonnage en vue de la dtermination de la zaralnone est exclu de son 1mm 200 mm 200 mm 30 g 60 ml 1
35、min 0,25 mm 1h 1 10 C 3 C 253 nm 25 ng 100 mm 10 ml 60 C 1 C 500 ml 250 ml 100 ml 250 ml 50 ml 100 mlISO 6870:2002(F) 4 ISO 2002 Tous droits rservs domaine dapplication. Sil nexiste pas de Norme internationale approprie, les parties concernes doivent se mettre daccord sur ce sujet, en tenant compte
36、des caractristiques du produit chantillonner. 6 Mode opratoire 6.1 Prparation de lchantillon pour essai Broyer lchantillon de faon quil passe en totalit au travers dun tamis de douverture de maille. Bien homogniser. 6.2 Prise dessai Peser, prs, de lchantillon pour essai dans une fiole conique de (4.
37、11). 6.3 Extraction Ajouter dactonitrile (3.1) et de la solution de chlorure de potassium (3.6), mesurs avec prcision laide dune prouvette gradue (4.13). Boucher la fiole, agiter et mlanger pendant laide de lagitateur (4.2). Filtrer sur papier-filtre (4.3). laide dune pipette (4.14), transvaser du f
38、iltrat dans une ampoule dcanter (4.12), puis procder une dlipidation en effectuant deux extractions successives laide, chaque fois, de diso-octane (3.2). Recueillir la phase lactonitrile dans le ballon de lvaporateur rotatif (4.4) et vaporer sec sous pression rduite. 6.4 Purification Ajouter dactoni
39、trile (3.1) au rsidu obtenu, deau et de la solution dactate de plomb (3.7), mesurs avec prcision laide dune prouvette gradue (4.13). Mlanger et laisser dcanter pendant dans le bain deau (4.10) rgl . Il se forme un prcipit. Ajouter de terre de diatomes (3.9) et filtrer sur papier- filtre (4.3). laide
40、 dune pipette (4.14), transvaser du filtrat dans une ampoule d canter (4.12) et effectuer trois extractions successives laide, chaque fois, de de chloroforme (3.3) en schant les fractions chloroformiques par passage sur du sulfate de sodium. Rcuprer les fractions chloroformiques dans le ballon de lv
41、aporateur rotatif (4.4) et vaporer sous vide jusqu obtention dun rsidu presque sec. Transvaser ce rsidu quantitativement, en rinant avec du chloroforme, dans le tube essais (4.8), puis vaporer sec sous azote (3.10) au bain deau (4.10). Ajouter, avec prcaution, laide dune microseringue, du mlange ben
42、zne-actonitrile (3.4) et boucher soigneusement le tube. 6.5 Chromatographie bidimensionnelle sur couche mince 6.5.1 Application des solutions (voir Figure 1) Tracer sur une plaque (4.6) deux droites parallles deux cts contigus ( et , respectivement, de ces cts), destines d limiter la migration des f
43、ronts de solvants. Dposer sur la plaque, laide de microseringues, les solutions indiques ci-aprs: au point A, de lextrait purifi de lchantillon (6.4); au point B, de la solution talon (3.11); au point C, de la solution talon (3.11); 1mm 0,01 g 50 g 500 ml 180 ml 20 ml 30 min 100 ml 50 ml 20 ml 60 ml
44、 20 ml 10 min 60 C5 g 50 ml 50 ml 0,5 ml 50 mm 60 mm 25 l 10 l 5 lISO 6870:2002(F) ISO 2002 Tous droits rservs 5 au point D, de la solution talon (3.11); au point E, de la solution talon (3.11). Scher laide dun lger courant dair ou dazote. Les taches obtenues doivent avoir au plus un diamtre de envi
45、ron. 6.5.2 Dveloppement (voir Figure 1) Dvelopper le chromatogramme dans la direction laide du solvant de dveloppement (3.5.1) (couche de dans une cuve sature), labri de la lumire, jusqu ce que le front de solvant atteigne la ligne de dlimitation. Retirer la plaque de la cuve et laisser scher durant
46、 au moins labri de la lumire et la temprature ambiante. Il peut tre utile, aprs le dveloppement dans la direction dobserver rapidement le chromatogramme la lumire UV et dentourer au crayon les taches possibles de zaralnone (la tache au point B indiquant la position de la zaralnone). Dvelopper ensuit
47、e le chromatogramme dans la direction laide du solvant de dveloppement (3.5.2) (couche dedans une cuve non sature), labri de la lumire, jusqu ce que le front de solvant atteigne la ligne de dlimitation. Retirer la plaque de la cuve et laisser scher labri de la lumire et la temprature ambiante. Dimensions en millimtres Figure 1 Application des solutions et dveloppem
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