ISO 7358-2002 Oils of bergamot lemon citron and lime fully or partially reduced in bergapten - Determination of bergapten content by high-pressure liquid chroma.pdf

1、 Numro de rfrence ISO 7358:2002(F) ISO 2002NORME INTERNATIONALE ISO 7358 Premire dition 2002-11-01 Huiles essentielles de bergamote, de citron, de bigarade et de limette compltement ou partiellement prives de bergaptne Dtermination de la teneur en bergaptne par chromatographie liquide haute pression

2、 (CLHP) Oils of bergamot, lemon, citron and lime, fully or partially reduced in bergapten Determination of bergapten content by high-pressure liquid chromatography (HPLC) ISO 7358:2002(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformmen

3、t aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes

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6、euillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. ISO 2002 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la phot

7、ocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax. + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.ch Web www.iso.ch Imprim en Suisse ii ISO 2002 Tous droi

8、ts rservsISO 7358:2002(F) ISO 2002 Tous droits rservs iiiAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lIS

9、O. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique int

10、ernationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 3. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales ad

11、opts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments de la prsente Norme internationale peuvent faire lobjet

12、de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 7358 a t labore par le comit technique ISO/TC 54, Huiles essentielles. Lannexe A de la prsente Norme internation

13、ale est donne uniquement titre dinformation. NORME INTERNATIONALE ISO 7358:2002(F) ISO 2002 Tous droits rservs 1Huiles essentielles de bergamote, de citron, de bigarade et de limette compltement ou partiellement prives de bergaptne Dtermination de la teneur en bergaptne par chromatographie liquide h

14、aute pression (CLHP) 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie une mthode danalyse par chromatographie liquide sous pression, avec utilisation soit dun talon interne, soit dun talon externe, pour la dtermination de la teneur en bergaptne des huiles essentielles de bergamote Citr

15、us aurantium ssp. bergamia (Risso et Poit.) Wight et Arn. ex Engl., de citron Citrus limon (L.) Burm. f., de bigarade (Citrus bigaradia Risso) et de limette Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle et Citrus latifolia Tanaka, compltement ou partiellement prives de bergaptne. La mthode de ltalon intern

16、e est applicable aux huiles essentielles ayant une teneur en bergaptne suprieure ou gale une fraction massique de 0,001 %. La mthode de ltalon externe est applicable aux huiles essentielles ayant une teneur en bergaptne correspondant une fraction massique comprise entre 0,000 1 % et 0,001 %. 2 Rfren

17、ces normatives Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la rfrence qui y est faite, constituent des dispositions valables pour la prsente Norme internationale. Pour les rfrences dates, les amendements ultrieurs ou les rvisions de ces publications ne sappliquent

18、 pas. Toutefois, les parties prenantes aux accords fonds sur la prsente Norme internationale sont invites rechercher la possibilit dappliquer les ditions les plus rcentes des documents normatifs indiqus ci-aprs. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document normatif en rfrence sapplique

19、. Les membres de lISO et de la CEI possdent le registre des Normes internationales en vigueur. ISO 356, Huiles essentielles Prparation des chantillons pour essai ISO 8432:1987, Huiles essentielles Analyse par chromatographie liquide sous pression Mthode gnrale 3 Principe La chromatographie liquide e

20、st base sur des phnomnes physico-chimiques dadsorption, de partage, dchange dions ou dexclusion. Elle permet lanalyse de petites quantits dhuiles essentielles sur une colonne de chromatographie avec un remplissage adquat, dans des conditions appropries, la localisation des diffrents constituants et

21、la dtermination quantitative des composs spcifiques. ISO 7358:2002(F) 2 ISO 2002 Tous droits rservs4 Ractifs Sauf indications contraires, utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue. DANGER Lattention est attire sur les risques drivant de lemploi spcifi du chloroforme, qui est un s

22、olvant toxique. 4.1 Substance de rfrence: bergaptne, de puret connue W 95 %. 4.2 talon interne: coumarine, de puret connue W 98 %. 4.3 Solvants. 4.3.1 Chloroforme, de puret analytique, contenant moins de 2 % (fraction volumique) dthanol, utiliser lors de la prparation de lchantillon dhuile essentiel

23、le contenant du bergaptne, ltalon interne et la phase mobile. 4.3.2 Hexane, de qualit CLHP, utiliser dans la phase mobile (4.3.4). 4.3.3 Actate dthyle, de qualit CLHP, utiliser dans la phase mobile (4.3.4). 4.3.4 Phase mobile. Les solvants utiliss pour la phase mobile doivent tre de qualit compatibl

24、e avec le systme de dtection utilis, et prpars en quantit suffisante pour lensemble de lanalyse. Prparer, titre indicatif, un des mlanges suivants: 4.3.4.1 Hexane (4.3.2) et actate dthyle (4.3.3), mlangs dans un rapport volumique de 80:20. 4.3.4.2 Hexane (4.3.2) et chloroforme (4.3.1), mlangs dans u

25、n rapport volumique de 85:15. 5 Appareillage 5.1 Systme de CLHP, compos des lments suivants. 5.1.1 Chromatographe pour phase liquide. 5.1.2 Colonne, en acier inoxydable, dune longueur comprise entre 150 mm et 250 mm, de diamtre intrieur compris entre 4 mm et 5 mm et garnie dune phase stationnaire de

26、 silice granule de qualit CLHP, prsentant une granulomtrie voisine de 5 m. 5.1.3 Systme dlivrant le solvant, permettant de dlivrer la phase mobile un dbit constant ou programm. 5.1.4 Systme de dgazage des solvants (facultatif). 5.1.5 Dtecteur UV, pouvant tre rgl une longueur donde de 254 nm ou de 31

27、3 nm. 5.1.6 Enregistreur et intgrateur (facultatif), compatibles avec lensemble du systme de CLHP. 5.2 Fioles jauges, de 15 ml 150 ml de capacit, selon les quantits supposes de bergaptne contenues dans lchantillon. 6 Prparation de lchantillon pour essai Prparer lchantillon pour essai conformment lIS

28、O 356. Dissoudre les ventuels dpts solides en les chauffant modrment. ISO 7358:2002(F) ISO 2002 Tous droits rservs 37 Mode opratoire 7.1 Conditions opratoires pour la CLHP Rgler le dbit de la phase mobile (4.3.4) de faon que les pics correspondant au bergaptne et la coumarine soient nettement spars

29、des autres constituants de lhuile essentielle dtectables par le dtecteur UV (5.1.5). Typiquement, le dbit se situe entre 0,5 ml/min et 1 ml/min. Suivre le mode opratoire spcifi dans lISO 8432. 7.2 Dtermination 7.2.1 Mthode de ltalon interne applique aux huiles essentielles ayant une teneur en bergap

30、tne W W W W 0,001 % (fraction massique) 7.2.1.1 Optimisation des conditions chromatographiques pour CLHP 7.2.1.1.1 Sparation Vrifier sur les chromatogrammes obtenus que le bergaptne est bien spar des autres constituants de lhuile essentielle. Vrifier en outre que la coumarine utilise comme talon int

31、erne (4.2) ne masque pas, ni ne concide avec, un quelconque constituant de lhuile essentielle. Dterminer les temps de rtention du bergaptne et de la coumarine. 7.2.1.1.2 Quantit dtalon interne La quantit de coumarine (talon interne) ajoute lchantillon est considre comme adquate lorsque les aires de

32、pic du bergaptne (dans lhuile essentielle) et de la coumarine sont approximativement gales sur les chromatogrammes. Pour dterminer cette quantit, injecter dans le CLHP une solution (par exemple 10 l) contenant une quantit connue (par exemple 10 mg) de coumarine (4.2) dissoute dans du chloroforme (4.

33、3.1, par exemple 10 ml). Ensuite, injecter le mme volume dune solution de lhuile essentielle doser dissoute dans du chloroforme. Ajuster la concentration en masse de ces deux solutions de manire obtenir des aires de pic comparables. 7.2.1.2 Coefficient de rponse K Prparer une solution dtalonnage com

34、me suit. Dans une fiole jauge (5.2) de capacit approprie, peser, 0,1 mg prs, environ 20 mg de coumarine (4.2). Dans la mme fiole jauge, peser, 0,1 mg prs, environ 10 mg de bergaptne (4.1), puis dissoudre les deux composs dans environ 20 ml de chloroforme (4.3.1). Injecter une quantit adquate (voir 7

35、.2.1.1) de la solution dtalonnage de faon rester dans les limites de la gamme de sensibilit du dtecteur. Mesurer les aires des pics. Un chromatogramme type de composs de rfrence est donn dans lannexe A. Calculer le coefficient de rponse K laide de lquation (1): RI S IS R mA K mA = (1) o m R est la m

36、asse, en milligrammes, du bergaptne (substance de rfrence) (4.1) ajout la solution; m IS est la masse, en milligrammes, de la coumarine (talon interne) (4.2) ajoute la solution; ISO 7358:2002(F) 4 ISO 2002 Tous droits rservsA R est laire du pic, en units dintgrateur, correspondant au bergaptne (subs

37、tance de rfrence) (4.1); A IS est laire du pic, en units dintgrateur, correspondant la coumarine (talon interne) (4.2). NOTE Dans lISO 8432:1987, cette quation quivaut la prsentation suivante: RE ER mA K mA = o m R est la masse, en milligrammes, du bergaptne (substance de rfrence) (4.1) ajout la sol

38、ution; m E est la masse, en milligrammes, de la coumarine (talon interne) (4.2) ajoute la solution; A R est laire du pic, en units dintgrateur, correspondant au bergaptne (substance de rfrence) (4.1); A E est laire du pic, en units dintgrateur, correspondant la coumarine (talon interne) (4.2). 7.2.1

39、.3 Dosage du bergaptne Dans une fiole jauge (5.2) de capacit approprie (par exemple 15 ml), prparer la solution pour essai comme suit. Peser, 0,1 mg prs, une quantit adquate de coumarine (m IS ) (environ 10 mg), comme dtermine en 7.2.1.2, et une quantit dhuile essentielle (m s ), de faon obtenir un

40、chromatogramme dans lequel laire du pic correspondant au bergaptne est sensiblement gale celle correspondant au pic de la coumarine. Ajouter du chloroforme (4.3.1) (environ 8 ml) et agiter soigneusement pour dissoudre la coumarine. La teneur en bergaptne des huiles essentielles varie dun chantillon

41、lautre, selon quil est compltement ou partiellement priv de bergaptne. Par consquent, il peut quelquefois tre ncessaire de prparer plusieurs dilutions de la solution pour essai, de faon que les aires des pics du bergaptne et de la coumarine soient sensiblement gales. De ce fait, pour le dosage, choi

42、sir la dilution la plus approprie rpondant cette exigence. Dans les mmes conditions opratoires que celles tablies en 7.2.1.1, injecter une quantit adquate de la solution pour essai de faon rester dans les limites de la gamme de sensibilit du dtecteur. Mesurer et consigner les aires des pics correspo

43、ndant au bergaptne (A x ) et la coumarine (A IS ). Un chromatogramme type de composs de rfrence est donn dans lannexe A. 7.2.2 Mthode de ltalon externe applique aux huiles essentielles ayant une teneur en bergaptne comprise entre 0,000 1 % et 0,001 % (fraction massique) Suivre le mode opratoire spci

44、fi dans lISO 8432 relatif la mthode de ltalon externe. 8 Calculs 8.1 Mthode de ltalon interne applique aux huiles essentielles ayant une teneur en bergaptne W W W W 0,001 % (fraction massique) laide de lquation (2) et en utilisant le coefficient de rponse K dtermin en 7.2.1.2, calculer la fraction m

45、assique, w x , exprime en pourcentage, du bergaptne prsent dans lhuile essentielle. IS sI S 100 % x x mA wK mA = (2) ISO 7358:2002(F) ISO 2002 Tous droits rservs 5o K est le coefficient de rponse calcul selon lquation (1) (voir 7.2.1.2); m ISest la masse, en milligrammes, de la coumarine (talon inte

46、rne) ajoute lchantillon pour essai (voir 7.2.1.3); m sest la masse, en milligrammes, de lhuile essentielle dans lchantillon pour essai (voir 7.2.1.3); A xest laire de pic, en units dintgrateur, correspondant au bergaptne dans lchantillon pour essai (voir 7.2.1.3); A ISest laire de pic, en units dint

47、grateur, correspondant la coumarine (talon interne) (voir 7.2.1.3). NOTE En 10.1 de lISO 8432:1987, la fraction massique, c x , exprime en pourcentage, du bergaptne prsent dans lhuile essentielle quivaut lquation (2) sous la prsentation suivante: E E 100 % X x x AmK c Am = o A Xest laire de pic, en units dintgrateur, correspondant au bergaptne dans lchantillon pour essai (voir 7.2.1.3); A Eest laire de pic, en units dintgrateur, correspondant