ISO 8981-1993 Wheat identification of varieties by electrophoresis《小麦 用电泳法进行品种识别》.pdf

1、NORME INTERNATIONALE Iso 8981 Premire dition 1993-I 1-l 5 I Ble - Identification des varits par lectrophorse Wheat - Identification of varie ties b y electrophoresis Numro de rfrence ISO 8981 :1993(F) ISO 8981:1993(F) Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration

2、mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de IISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de IISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr a cet effet. Les organisations internationales

3、, gouvernementales et non gouvernemen- tales, en liaison avec IISO participent galement aux travaux. LISO colla- bore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les projets de Normes internationales adopts par les comits te

4、chniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des co- mits membres votants. La Norme internationale ISO 8981 a t labore par le comit technique ISODC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comit SC 4, C6rales

5、 et lgumineuses. Lannexe A fait partie intgrante de la prsente Norme internationale. Lannexe B est donne uniquement a titre dinformation. 0 60 1993 Droits de reproduction rservk Aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, le

6、ctronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lditeur. Organisation internationale de normalisation Case Postale 56 l CH-1 211 Genve 20 l Suisse Imprim en Suisse ii ISO 8981:1993(F) Introduction La composition protique du bl est directement contrle par les gn

7、es et gnralement indpendante des conditions denvironnement (lieu et anne de croissance). Par ailleurs, dans le cas du bl, la fcondation sef- fectue essentiellement par autopollinisation et la composition protique est donc stable sur plusieurs gnrations. Elle peut par consquent servir la caractrisati

8、on et donc lidentification varitale, partir des dia- grammes protiques qui peuvent tre obtenus en sparant les gliadines par lectrophorse en gel de polyactylamide. La sparation est suivie dune coloration des gels qui permet de rvler les diffrents composants protiques, et les schmas protiques obtenus

9、sont rapports aux diff- rentes varits de bl. II convient de dterminer les schmas types de toutes les varits susceptibles dtre rencontres dans une situation donne (tablissement dun catalogue varital). La comparaison de Ilectrophorgramme obtenu pour une varit inconnue avec les schmas types du catalogu

10、e permet lidentification varitale. Cette technique est totalement dfinie et couramment utilise dans de nombreux pays. Page blanche NORME INTERNATIONALE ISO 8981:1993(F) I Ble - Identification des varits par lectrophorse 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale prescrit une m- thode did

11、entification de la varit dun lot donn de bl tendre ou de bl dur, sous la forme de grains broys pris isolment, de farine, fcule ou semoule, par sparation des protines de gliadine. 2 Principe Sparation des gliadines du bl par lectrophorse en gel de polyacrylamide, dans des plaques de gel contenant un

12、tampon lactate daluminium de pH 3,l. 3 Ractifs Sauf indications contraires, utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue. Leau utilise doit tre de leau dionise ayant une rsistance su- prieure a 10 Ma. 3.1 Solution dextraction, thanol, solution 70 % (KW). Diluer 700 ml dthanol (absol

13、u) avec 300 ml deau. 3.2 Solution tampon, lactate daluminium, solution 2,5 g/l. Dissoudre 150 g de lactate daluminium dans 5,5 litres deau. Ajuster le pH a 3,l avec de lacide lactique. Complter a 6 litres avec de leau. Filtrer sous vide sur filtre de porosit 0,45 prn. Conserver a 4 OC. NOTE 1 La con

14、ductivit de la solution se situe approxi- mativement 950 pS/m. 3.3 Tampon de dilution des chantillons Dissoudre 60,O g de saccharose dans 50 ml de solu- tion tampon (3.2). Conserver 4 OC. 3.4 Acrylamide, solution a 60,O g/l de gel. AVERTISSEMENT - Le monomere acrylamide est une substance neurotoxiqu

15、e pouvant tre absor- bec par voie transcutane. II convient de le mani- puler avec prcaution, quil soit en poudre ou en solution. Dissoudre, dans une fiole jauge de 100 ml, 6,0 g dacrylamide (qualit pour lectrophorse), 0,300 g de A/,/V-mthylne biactylamide (qualit pour lectropho- rse) et 0,020 g daci

16、de ascorbique dans la solution tampon (3.2). Complter au volume avec la solution tampon. Conserver a 4 OC. 3.5 Solution dinitiation, solution de fer( II) heptahydrat 10 g/l Dissoudre, dans une fiole jauge de 10 ml, 0,l g de sulfate de fer(U) heptahydrat dans de leau et com- plter au volume avec de l

17、eau. Prparer cette solution extemporanment. 3.6 Solution de catalyse, peroxyde dhydrogne solution a 0,99 % (m/m). Dissoudre, dans une fiole jauge de 10 ml, 0,33 ml de peroxyde dhydrogne 30 % (ot Caractr iques lisation des diagrammes II est possible de caractriser visuellement le dia- gramme protique

18、 dune varit (voir figure 1) partir de la mobilit relative des composants et de Iinten- sit des bandes, suivant la mthode dcrite dans la rfrenceW Le schma type (ou les schmas types dans le cas de biotypes) obtenu pour chaque varit a partir de lanalyse de 100 grains est port sous cette forme, ainsi qu

19、e sous celle de rpliques photographi- ques, dans le catalogue varital. partir de ces don- nes caractristiques, on tablit une cl didentification fonde sur la prsence ou labsence des bandes correspondant a des mobilits relatives et/ou des intensits donnes. 8.2 Identification varitale Pour identifier u

20、ne varit inconnue partir de son lectrophorgramme, procder comme suit. a) Examiner visuellement le gel ou sa rplique pho- tographique et noter la position et lintensit des bandes par comparaison avec celles de Ilectrophorgramme ralis simultanment pour la varit de rfrence. b) Consulter la cl comme prp

21、are en 8.1 pour pro- cder lidentification. c) Vrifier le rsultat de lidentification en comparant le diagramme examin avec celui qui figure dans le catalogue. 9 Expression des rsultats Lorsque linterprtation de la composition protique est ralise a partir de lanalyse de grains pris isol- ment, il est ncessaire de recourir lanalyse statisti- que. Les intervalles de confiance sont donns en annexe A.