DB12 T 866-2019 水和沉积物中孔雀石绿及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

1、ICS 65.150 B 50 DB12 天津市 地 方 标 准 DB12/T 866 2019 水和沉积物中孔雀石绿及其代谢物残留量 的测定 液相色谱 -串联质谱法 Determination of malachite green and its metabolite residues in water and sediment by high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2019 - 01 - 14发布 2019 - 02 - 15实施 天津 市市场 监督管理委员会 发布 DB12/T 866 201

2、9 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草 。 本 标准 由 天津市渔业发展服务中心 提出并归口。 本 标准 起草单位：农业 农村 部渔业环境及水产品质量监督检验测试中心（天津）。 本 标准 主要起草人：陈永平、李春青、时文博、高丽娜、李宝华 。 DB12/T 866 2019 1 水 和沉积物中孔雀石绿及其代谢物残留量的测定 液相色谱 -串联质 谱法 1 范围 本标准规定了水 质 及沉积物中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留量 测定 的 试剂、仪器设备、测定步骤、 计算、方法灵敏度、方法回收率、方法精密度 。 本标准适用于 水和 沉积物中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留量检测。

3、2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅 注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实 验室用水规格和试验方法 3 原理 沉积物中孔雀 石绿 (Malachite Green MG)及其代谢物无色孔雀石绿（ Leucomalachite Green LMG） 残留提取，利用 N， N， N， N-四甲基对苯二胺 (2,3,5,6-tetramethyl-1,4- phenylenediamine TMPD) 解吸附后，二氯甲烷萃取。水中孔雀石绿和无色孔雀石绿二氯甲烷提取，质

4、谱检测器检测， 内标法定量。 4 试剂 4.1 孔雀石绿及无色孔雀石绿标准品：孔 雀石绿纯度 98% ，无色孔雀石绿纯度 98%。 4.2 乙腈 ：色谱纯 。 4.3 甲醇： 色谱纯 。 4.4 二氯甲烷 。 4.5 实验用水符 合 GB/T 6682 一级 水指标 4.6 2.0 mmoLL-1乙酸铵缓 冲溶液：称取 0.077 g无水乙酸铵溶解于适量水中，再加入 0.5 mL甲酸 ， 再加水 定容至 500 mL。 4.7 TMPD 溶液 (1.0 mgmL-1)：称取 50 mg N， N， N， N-四甲基对苯二胺 （ TMPD ） 溶于 50 mL甲醇 中 。 4.8 孔雀石绿 （

5、MG）、无色孔雀石 绿 (LMG)标准储备液（ 100 gmL-1）：准确称取适量的孔雀石绿、无 色孔雀石绿标准品，分别用乙腈溶解并定容， 于 -18 避光保存， 可使用 1年。 4.9 氘代孔雀石绿（ MG-D5）和氘代无色孔雀石绿（ LMG-D6）内标标准储备液（ 100 gmL-1）：准确称 取适量的氘代 孔雀石绿和氘代无色孔雀石绿标准品，分别用乙腈溶解并定容， 于 -18 避光保存， 可使 用 1年。 4.10 混合 外标 标准中间液（ 1.0 gmL-1）：分别准确吸取 1.0 mL孔 雀石绿 和 无色孔雀石绿的标准储 备液 （ 4.7） 于 100 mL容量瓶中，用乙腈稀释定容，

6、于 -18 避光保存， 可使用 6个月。 DB12/T 866 2019 2 4.11 混合内标标准中间液（ 1.0 gmL-1）：分别准确吸取 1.0 mL氘代 孔雀石绿和氘代 无 色孔雀石绿 标准储备液 （ 4.8） 于 100 mL容量瓶中，用乙腈稀释定容， 于 -18 避光保存， 可使用 6个月。 4.12 混合 外 标 标准使用液（ 0.10 gmL-1）：准确吸取 1.00 mL混合 外标 标准中间液 （ 4.9） 于 10.0 mL 容量瓶中，用乙腈稀释定容， 于 -18 避光保存， 可使用 1个月。 4.13 混合内标标准使用液（ 0.10 gmL-1）：准确吸取 1.00 m

7、L混合内标标准中间液 （ 4.10） 于 10.0 mL容量瓶中，用乙腈稀释定容， 于 -18 避光保存， 可使用 1个月。 4.14 混合标准工作液：临用时准确吸取 相应体积 的混合 外标 标准使用液 （ 4.11） ， 再 加入混合内标标 准使用液 （ 4.12） 20 L，用乙腈和 2.0 mmoLL-1乙酸铵缓 冲溶液（ 1:1， V/V）稀释定容至 1 mL，标准 曲线系列浓度分别为 0.5、 1.0、 2.0、 5.0、 10、 20 ngmL-1，现用现配。 注： 除特殊注明外，所有试剂均为分析纯 。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾（ ESI）离子源

8、。 5.2 电子天平：感量 1.0 mg和 0.01 mg。 5.3 高速冷冻离心机 ：可制冷到 4 （最大转速高于 10 000 r/min）。 5.4 超声波震荡仪 。 5.5 涡旋振荡器 。 5.6 移液器 (10 L， 20 L， 50 L， 100 L， 1000 L)。 5.7 旋 转蒸发仪 。 5.8 纯水 器 。 5.9 冰箱：具有 4 冷 藏箱和 达到 -18 以下冷冻箱。 6 测定步骤 6.1 样品制备 6.1.1 水 ：将采集水样过 0.45 m滤膜，收集水样体积 1 L，于 4 冰箱保 存， 6 d内测定。 6.1.2 沉积物：将沉积物置于阴凉处风干，研磨过筛（ 150

9、目），收集沉积物质量 20 g，于 4 冰箱 保存 ， 6 d内测定 。 6.2 样品处理 6.2.1 水 ：量取 水样 500 mL，置于分液漏斗中，加入 40 L混合 内标 标准使用液（ 4.12） ， 再 加入 30 mL的二氯甲烷，振摇 5 min，静置 30 min，取下层二氯甲烷于 锥形瓶 中，再加入 30 mL二氯甲烷重复 一次，若分层不明显 ，取其 下层液于 50 mL离心管中 ，冷冻离心机 6000 r/min离心 3 min，再取下层 液，合并于 锥形瓶 中，旋转蒸发温度 30 ，旋转蒸发浓缩 至 近干，残留物加入 2.0 mL的乙腈 -2 mmoLL-1乙酸铵溶液 (1

10、1， V/V) （ 4.5） ，涡旋振荡 1 min，超声波振荡 2 min，过 0.22 m有机相滤 膜后，上机测定。 6.2.2 沉积物： 称取 粉末状沉积物样品 (5.0 0.01) g于 50 mL聚乙烯离心管中， 先 加入 200 L TMPD 溶液 （ 4.6） ， 再 加入 40 L混合 内标 标准使用液（ 4.12） ，加入 20 mL二氯甲烷，涡旋 2 min，超声 波震荡 25 min， 6000 r /min离心 5 min，取上层液于 锥形瓶 中，再向离心管中加入 20 mL二氯甲烷， 重复上述操作，合并上清液 锥形瓶 中，旋转蒸发温度 30 ，旋转蒸发浓缩 至 近干，

11、残留物加入 2.0 mL DB12/T 866 2019 3 的乙腈 -2 mmoLL-1乙酸铵溶液 (1 1， V/V)（ 4.5） ，涡旋振荡 1 min，超声波振荡 2 min，过 0.22 m 有机相滤膜后，上机测定。 6.3 标准工作曲线制作 分别准确移取 100 ngmL-1混合 外标 标准 使用 液 （ 4.11） ，乙腈稀释至 0.50 ngmL-1、 1.0 ngmL-1、 2.0 ngmL-1、 5.0 ngmL-1、 10.0 ngmL-1、 20.0 ngmL-1混合标准工作液 ，内标液浓度均为 2 ngmL-1，供 液相色谱 -串联质谱仪测定 。 6.4 测定 6.4

12、.1 色谱条件 色谱柱： C8柱 ， 2.2 m， 75 mm2.1 mm（内径），或相当。 柱温： 35 。 样品室温度： 15 。 流动相 A：含 0.1%甲酸的 2.0 mmoLL-1的乙酸铵水溶液；流动相 B： 0.1%甲酸 -乙腈溶液；进样体积： 5.0 L；具体参数见表 1。 流速： 0.25 mLmin-1。 表 1 流动相梯度洗脱程序 时间 （ min） A/% B/% 0.1 30 70 2 30 70 7 2 98 9 2 98 9.01 30 70 11 30 70 6.4.2 质谱条件 离子化模式 ：电喷雾离子源（ ESI），正离子模式 。 离子源温度： 600 。 气

13、帘气： 25；碰撞气 ：中；喷雾电压： 5000 v；辅气 1： 60；辅气 2： 40。 扫描模式：多反应监测（ MRM，反应监测母离子、子离子、锥孔电压和碰撞能 量见 表 2。 表 2 目标化合物质谱条件 目标 化合物 母离子 (m/z) 子离子 (m/z) 去簇电压 (v) 碰撞能量 (ev) MG 329 208 120 38 313* 120 38 LMG 331.1 316.1* 120 20 239.1 120 30 D5-MG 334.1 318.1 120 40 D6-LMG 337.1 322.1 110 22 注： *为定量碎片离子 DB12/T 866 2019 4 6

14、.5 定性依据 在同样测试条件下，阳性样品保留时间与标准物质保留时间相对偏差在 5%以内，且检测到的离子 的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准品相对丰度一致。次强 碎片离子丰度与定量离子丰度比应符合 表 3要求。空白样品、标准溶液及添加样品的离子流图 参 见附录 A 附录 E。 表 3 基峰与次强碎片离子丰度比要求 次强碎片离子相对丰度（ %） 允许相对偏差 (%) 50 20 20 50 25 10 20 30 10 50 6.6 定量测定 定量离子采用丰度最大的二级特征离子碎片 符合表 2的要求。 6.7 空白试验 除不加试祥外，均按上述测定条件和步骤进行 。 7 计算 7.1 用仪器自带

15、工作站 按内标法进行自动计算 ， 以化合物上机响应的峰面积与内标物峰面积比值为纵 坐标、化合物浓度与内标物浓度比值为横坐标，绘制标准曲线，再根据样品的峰面积响应值与内标物峰 面积比值，利用标准曲线， 得到样品制备液的实际测定浓度。 7.2 水 样品中 孔雀石绿及其代谢物 残留量按式（ 1）计算。计算结果 须 扣除空白值。 . (1) 式中： X 试样中目标物含量，单位为微克每升（ gL-1） ； C 试样溶液中目标物含量，单位为纳克每毫升（ ngmL-1） ； V 试样 体积 ，单位为 毫升 （ mL） ； v1 试样定容体积，单位为毫升（ mL）。 7.3 沉积物 样品中 孔雀石绿及其代谢物

16、 残留量按式（ 2）计算。计算结果 须 扣除空白值。 . (2) 式中： X 试样中目标物含量，单位为微克每千克（ gkg-1） ； C 试样溶液中目标物含量，单位为纳克每毫升（ ngmL-1） ； m 试样质量，单位为克（ g） ； v1 试样定容体积，单位为毫升（ mL）。 DB12/T 866 2019 5 8 方法灵敏度 8.1 水质中孔雀石 绿及其代谢物 (无色孔雀石绿 )的定量限 均 为 4 ngL-1。 8.2 沉积物中孔雀石绿及其代谢物 (无色孔雀石绿 )的定 量限 均 为 0.4 gkg-1。 9 方法回收率 9.1 水质中添加浓度为 4 ngL-1 100 ngL-1 时回

17、收率为 70% 110%。 9.2 沉积物中 添加浓度为 0.4 gkg-1 10 gkg-1 时回收率为 70% 110%。 10 方法精密度 本方法的批内相对标准偏差小于 10%，批间相对标准偏差小于 15%。 DB12/T 866 2019 6 A A 附 录 A （资料性附录） 空白沉积物特征离子色谱图 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 2 9 .30 0 / 3 1 3 .10 0 Da ID: M G-3 1 3 f r o m S a mp le 2 ( B L A NK ) o f Da taS E T1 .w if f ( Tu r b o

18、. . M a x . 5 3 3 .0 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 500 I . . . 3 .02 5 .41 5 .53 7 .406 .57 7 .636 .65 7 .13 5 .94 3 .96 4 .05 4 .61 3 .052 .05 2 .771 .701 .30 3 .66 0 .600 .37 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 4 .30 0 / 3 1 8

19、.20 0 Da ID: M G-D f r o m Sa mp le 2 (BL A NK ) of Da t a S E T 1 . w if f ( T u r b o S. . M a x . 1 .3e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .00 1 .00 e 5 I . . . 4 .04 6 .75 4 .20 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 1 .30 0 / 3 1

20、6 .30 0 Da ID: LM G-3 1 6 f r o m S a mp le 2 ( B L A NK ) of Da taS E T1 .w if f ( Tu r b . . M a x . 3 3 3 .0 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 333 I . . . 7 .887 .18 6 .01 6 .11 6 .854 .51 5 .323 .65 4 .70 2 .88 5 .51 2 .07 7 .597

21、 .32 3 .52 1 .55 4 .16 2 .18 6 .390 .44 0 .19 0 .66 0 .93 1 .39 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 7 .30 0 / 3 2 2 .30 0 Da ID: LM G-D f r o m Sa mp le 2 ( B L A NK ) of Da t a S E T 1 . w if f ( T u r b o . . M a x . 4 .3e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0

22、6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 4 .3e 5 I . . . 6 .75 5 .37 7 .04 7 .22 DB12/T 866 2019 7 B B 附 录 B （资料性附录） 孔雀石绿及其代谢物混合标准特征离子色谱图（ 10 ngmL-1） X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 2 9 .30 0 / 3 1 3 .10 0 Da ID: M G-3 1 3 f r o m S a mp le 7 ( 1 0 ) of Da t a S E T 1 . w if f ( T u r b o S p r . . M a x .

23、1 .7e 6 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 1 .0e 6 1 .7e 6 I . . . 4 .21 6 .81 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 4 .30 0 / 3 1 8 .20 0 Da ID: M G-D f r o m Sa mp le 7 (10 ) o f Da taS E T1 .w if f ( Tu r b o Sp r a y . . M a x .

24、1 .6e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 1 .0e 5 1 .6e 5 I . . . 4 .21 6 .78 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 1 .30 0 / 3 1 6 .30 0 Da ID: LM G-3 1 6 f r o m S a mp le 7 ( 1 0 ) of Da t a S E T 1 . w if f ( T u r b o S p . . M

25、 a x . 1 .5e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 1 .0e 5 1 .5e 5 I . . . 6 .80 4 .21 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 7 .30 0 / 3 2 2 .30 0 Da ID: LM G-D f r o m Sa mp le 7 ( 1 0 ) o f Da taS E T1 .w if f ( Tu r b o Sp r a . .

26、M a x . 4 .0e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 4 .0e 5 I . . . 6 .77 6 .95 5 .41 7 .34 DB12/T 866 2019 8 C C 附 录 C （资料性附录） 沉积物加标特征离子色谱图 （ 2.0 gk g-1） X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 2 9 .30 0 / 3 1 3 .10 0 Da ID: M G-3 1 3 f

27、r o m S a mp le 7 ( 1 0 ) of Da t a S E T 1 . w if f ( T u r b o S p r . . M a x . 1 .7e 6 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 1 .0e 6 1 .7e 6 I . . . 4 .21 6 .81 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 4 .30 0 / 3 1 8 .20 0 Da ID: M G-

28、D f r o m Sa mp le 7 (10 ) o f Da taS E T1 .w if f ( Tu r b o Sp r a y . . M a x . 1 .6e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 1 .0e 5 1 .6e 5 I . . . 4 .21 6 .78 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 1 .30 0 / 3 1 6 .30 0 Da ID: LM G

29、-3 1 6 f r o m S a mp le 7 ( 1 0 ) of Da t a S E T 1 . w if f ( T u r b o S p . . M a x . 1 .5e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 1 .0e 5 1 .5e 5 I . . . 6 .80 4 .21 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 7 .30 0 / 3 2 2 .30 0 Da I

30、D: LM G-D f r o m Sa mp le 7 ( 1 0 ) o f Da taS E T1 .w if f ( Tu r b o Sp r a . . M a x . 4 .0e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 4 .0e 5 I . . . 6 .77 6 .95 5 .41 7 .34 DB12/T 866 2019 9 D D 附 录 D （资料性附录） 空白水质特征离子色谱图 X IC o f

31、+ M RM ( 6 pa ir s ) : 3 2 9 .30 0 / 3 1 3 .10 0 Da ID: M G-3 1 3 f r o m S a mp le 2 3 ( B L A NK ) of Da taS E T1 .w if f ( Tu r . . M a x . 2 3 0 0 .0 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 2000 I . . . 4 .25 6 .866 .29 7 .64 5 .84 7 .

32、325 .24 4 .35 5 .695 .07 4 .050 .17 3 .11 3 .933 .17 1 .310 .48 1 .05 2 .08 2 .36 2 .46 1 .59 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 4 .30 0 / 3 1 8 .20 0 Da ID: M G-D f r o m Sa mp le 2 3 ( B L A NK ) of Da t a S E T 1 . w if f ( T u r b o . . M a x . 1 .7e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0

33、 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 1 .0e 5 1 .7e 5 I . . . 4 .24 6 .77 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 1 .30 0 / 3 1 6 .30 0 Da ID: LM G-3 1 6 f r o m S a mp le 2 3 ( B L A NK ) of Da taS E T1 .w if f ( Tu r . . M a x . 4 0 0 .0 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3

34、.0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 400 I . . . 5 .39 7 .44 6 .81 5 .254 .51 5 .614 .57 6 .44 6 .27 7 .33 7 .973 .86 4 .09 3 .561 .24 3 .240 .87 1 .340 .43 2 .912 .581 .70 2 .14 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 7 .30 0 / 3 2 2 .30 0 Da ID: LM G-D f r o m Sa mp le 2 3 ( B

35、L A NK ) of Da t a S E T 1 . w if f ( T u r b . . M a x . 3 .9e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 3 .9e 5 I . . . 6 .77 5 .40 7 .06 7 .17 DB12/T 866 2019 10 E E 附 录 E （资料性附录） 空白水质加标特征离子色谱图 （ 20 ngL-1） X IC o f + M RM ( 6 pa ir s

36、 ) : 3 2 9 .30 0 / 3 1 3 .10 0 Da ID: M G-3 1 3 f r o m S a mp le 1 3 ( QC -5 ) o f Da taS E T1 .w if f ( Tu rbo . . . M a x . 8 .9e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 5 .0e 5 8 .9e 5 I . . . 4 .25 6 .82 4 .38 X IC o f + M RM ( 6

37、 pa ir s ) : 3 3 4 .30 0 / 3 1 8 .20 0 Da ID: M G-D f r o m Sa mp le 1 3 ( Q C- 5 ) of Da taS E T1 .w if f (Tu r b o S. . M a x . 1 .7e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 1 .0e 5 1 .7e 5 I . . . 4 .24 6 .76 4 .42 X IC o f + M RM

38、( 6 pa ir s ) : 3 3 1 .30 0 / 3 1 6 .30 0 Da ID: LM G-3 1 6 f r o m S a mp le 1 3 ( QC -5) o f Da taS E T1 .w if f ( Tu r b . . M a x . 7 .7e 4 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 5 .0e 4 7 .7e 4 I . . . 6 .81 1 .68 4 .25 X IC o f + M RM ( 6 pa ir s ) : 3 3 7 .30 0 / 3 2 2 .30 0 Da ID: LM G-D f r o m Sa mp le 1 3 ( Q C- 5 ) of Da taS E T1 .w if f (Tu r b o . . M a x . 4 .1e 5 c p s . 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5 2 .0 2 .5 3 .0 3 .5 4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .0 6 .5 7 .0 7 .5 Time , min 0 .0 4 .1e 5 I . . . 6 .76 5 .41 6 .97 7 .11 _