DB35 T 1793-2018 海水中缩二脲的测定分光光度法和液相色谱-串联质谱法.pdf

1、ICS 07.060 A 45 DB35 福建省地方标准 DB35/T 17932018 海水中缩二脲的测定 分光光度法和液相色谱 -串联质谱法 Determination of biuret in sea water Spectrophotometric method and LC-MS/MS method 2018 - 11 - 22 发布 2019 - 02 - 22 实施 福建省市场监督管理局 发布 福建省地方标准 海水中缩二脲的测定 分光光度法和液相色谱串联质谱法 DB35/T 17932018 * 2018 年 11 月第一版 2018 年 11 月第一次印刷 DB35/T 179

2、32018 I 目 次 前言 . . II 1 范围 . . 1 2 规范性引用文件 . . 1 3 试验方法 . . 1 附录 A（资料性附录） 缩二脲的多反应监测（M RM）色谱图和质谱图. 6 DB35/T 17932018 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由福建省海洋与渔业局提出并归口。 本标准起草单位：莆田市海洋与渔业环境监测站、福建省海洋环境与渔业资源监测中心。 本标准主要起草人：张丽、张天闻、周丽、陈金飞、黄东仁、林秋生、林振华、颜志山、李青俞。 DB35/T 17932018 1 海水中缩二脲的测定 分光光度法和液相色谱-串联质谱法 1

3、范围 本标准规定了海水中缩二脲的测定方法：分光光度法和液相色谱-串联质谱法。 本标准适用于河口及近岸海水中缩二脲的测定。分光光度法适用于缩二脲含量较高的海水；液相色 谱-串联质谱法适用于缩二脲含量较低的海水。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的应用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 17378.3200 7 海洋监测规范 第3部分：样品采集、贮存与运输 3 试验方法 3.1 一般规定 除非另有说明，在分析中使用的化学试剂为分析纯，

4、水为符合GB/T 6682规定的一级水。 3.2 分光光度法 3.2.1 方法原理 缩二脲在硫酸铜、酒石酸钾钠的碱性溶液中生成紫红色络合物，在波长为550 nm处测定其吸光值， 计算样品中缩二脲的浓度。 3.2.2 试剂和溶液 3.2.2.1 氢氧化钠（NaOH）。 3.2.2.2 四水合酒石酸钾钠（NaKC 4H4O64H2O）。 3.2.2.3 五水合硫酸铜（CuSO 45H2O）。 3.2.2.4 无水碳酸钠（Na 2CO3）。 3.2.2.5 酒石酸钾钠碱性溶液（100 g/L）：称取 80.0 g氢氧化钠（3.2.2.1）溶解于 500 mL水中， 冷却后，加入 100 g 酒石酸钾

5、钠（3.2.2.2），待完全溶解后，用水稀释至 1 L，混匀，静置过夜，使 用前用定性滤纸过滤。 3.2.2.6 硫酸铜溶液（30 g/L）：称取 30 g硫酸铜（3.2.2.3）溶解于水中，用定性滤纸过滤，用水 稀释至1 L。 3.2.2.7 缩二脲（C 2H5N3O2）标准物质（CAS：108-19-0）：纯度98.0%。 3.2.2.8 缩二脲标准溶液（2 000 mg/L）：准确称取 2.0 00 g 缩二脲（3.2.2.7）溶解于水，转移至 DB35/T 17932018 2 1 L 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。该标准溶液临用前配制。 3.2.3 仪器设备 3.2.3.1 恒温水

6、浴锅：可控温度 30 5 。 3.2.3.2 分光光度计：可见光分光光度计（具 3 cm 吸收池）。 3.2.3.3 分析天平：分度值为 0.000 1 g。 3.2.3.4 天平：分度值为 0.01 g。 3.2.3.5 定性滤纸。 3.2.3.6 玻璃器皿：100 mL 具塞比色管，100 mL 量筒，100 mL 烧杯。 3.2.4 样品采集和保存 按照GB 17378.32007执 行，采集250 mL海水于棕色具塞玻璃瓶中，于4 下密闭冷藏。 3.2.5 分析步骤 3.2.5.1 标准曲线 具体步骤如下： a) 分别移取 0 mL、0.50 mL 、1.00 mL 、2.50 mL

7、、5.00 mL 、10.0 mL、20.0 mL、30. 0 mL 缩 二脲标准溶液（3.2.2.8），置于 100 mL 比色管中，用适量水稀释。依次加入 10.0 mL酒石酸 钾钠碱性溶液（3.2.2.5）和 10.0 mL硫酸铜溶液（3.2.2.6），稀释至刻度，摇匀。各比色管 中缩二脲浓度依次为 0 mg/L、10.0 mg/L、2 0.0 mg/L、50.0 mg/L 、100 mg/L、200 mg/L 、 400 mg/L、600 mg/L。 b) 将上述比色管于 30 5 水浴20 min，期间多次摇动混匀。水浴后 30 min 内，选550 nm 波长，3 cm 吸收池，以

8、水作参比，测定上述溶液的吸光值 Ai，其中零浓度为标准空白吸光值 A0。 c) 以吸光值（ Ai A0）为纵坐标，相应的缩二脲浓度（mg/L）为横坐标，得线性回归方程。 3.2.5.2 样品的测定 具体步骤如下： a) 量取 80.0 mL（ V1）水样于 100 mL 烧杯中，依次加入 0.15 g 碳酸钠（3.2.2.4）和 0.60 g 氢 氧化钠（3.2.2.1），混匀，静置 2 h 后，用定性滤纸过滤； b) 将过滤后的水样移入 100 mL 比色管中，依次加入 10.0 mL 酒石酸钾钠碱性溶液（3.2.2.5）和 10.0 mL 硫酸铜溶液（3.2.2.6 ），用水定容至刻度，摇

9、匀。按 3.2.5.1 b）的步骤测定上述溶 液的吸光值 Aw。 3.2.5.3 空白试验 用水，按3.2.5.2的步骤测定分析空白吸光值 Ab。 3.2.6 结果计算与表示 根据标准曲线线性回归方程计算得测定样中缩二脲的浓度，如式（1）所示。 DB35/T 17932018 3 a bAA C i bw . （1） 式中： Ci 测定样中缩二脲的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； Aw 测定样的吸光值； Ab 分析空白吸光值； a 标准曲线中的斜率； b 标准曲线中的截距。 水样中缩二脲浓度计算如式（2）所示： 1 2 V VC C i . （2） 式中： Ci 测定样中缩二脲的浓度，单位为

10、毫克每升（mg/L）； C 水样中缩二脲的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V1 量取水样的体积，单位为毫升（mL）； V2 定容体积，单位为毫升（mL）。 3.2.7 精密度和准确度 本方法测定结果的相对标准偏差小于5%，回收率90.0%110% 。本方法检出2.00 mg/L，定量限 6.70 mg/L。 3.3 液相色谱-串联质谱法 3.3.1 方法原理 水样中的缩二脲经固相萃取柱富集净化，乙腈溶液定容，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。 3.3.2 试剂和溶液 3.3.2.1 氮气（雾化气）：纯度99.999%。 3.3.2.2 氮气（辅助气）：纯度99%。 3.3.2.3 缩二

11、脲（C 2H5N3O2）标准物质（CAS：108-19-0）：纯度98.0%。 3.3.2.4 乙腈（CH 3CN）：色谱纯。 3.3.2.5 冰乙酸（CH 3COOH）：优级纯。 3.3.2.6 无水乙酸铵（CH 3COONH4）优级纯。 3.3.2.7 乙酸铵缓冲溶液（0.2 mmol/L）：称取 0.0 15 4 g 无水乙酸铵（3.3.2 .6）溶解于 1 000 mL 水中，用冰乙酸（3.3.2.5）调pH 到4.0。 3.3.2.8 乙腈溶液（4+1）：将4体积的乙腈（3.3.2.4）同 1 体积的水混匀。 3.3.2.9 缩二脲标准储备溶液（500 mg/L）：准确称取 0.05

12、0 0 g 缩二脲（3.3.2.3）溶解于水中，转 移至 100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。置 4 冰箱中保存。 3.3.2.10 缩二脲标准工作溶液（20 mg/L）：移取缩二脲标准储备溶液（3.3.2 .9）2.00 mL至 50 mL 容量瓶中，用乙腈溶液（3.3.2.8）稀释至刻度，摇匀。该标准工作溶液临用前配制。 DB35/T 17932018 4 3.3.3 仪器设备 3.3.3.1 分析天平：分度值为 0.000 1 g。 3.3.3.2 滤膜：0.45 m 醋酸纤维滤膜。 3.3.3.3 pH 计。 3.3.3.4 固相萃取柱：Oasis HLB，6 mL，500 m

13、g，或性能相当者。 3.3.3.5 固相萃取装置。 3.3.3.6 氮气吹干仪。 3.3.3.7 针头过滤器：备孔径 0.45 m 有机相滤膜。 3.3.3.8 液相色谱串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。 3.3.4 样品采集和保存 样品采集和保存按照3.2.4。 3.3.5 分析步骤 3.3.5.1 仪器条件 3.3.5.1.1 色谱参考条件 色谱柱：POLARIS NH 2柱（2.1 mm100 mm，3.0 m，或性能相当者）；柱温：35 ；进样量： 10 L；流动相：A相乙酸铵缓冲溶液（3.3.2.7 ）；B相乙腈（3.3.2.4）；等度洗脱，流动相比例A B= 4555（V/V

14、），流速：0.2 mL/min。 3.3.5.1.2 质谱参考条件 电喷雾电离ESI正离子模式；电喷雾电压：4 000 V；雾化气：氮气（3.3.2.1），30 psi；辅助气： 氮气（3.3.2.2），流速10 L/min； 加热毛细管温度：300 ，扫描模式：多反应监测（MRM），母离子 m/z 104，定量子离子m/z 61，定性子离子m/z 44 .1；裂解电压：60 V；碰撞能量：m/z 10461为5 e V， m/z 10444.1为38 eV。 3.3.5.2 标准曲线 分别移取0.250 mL、0.500 mL、1.00 mL、2.00 mL 、3.00 mL、4.00 mL

15、、5.00 mL缩 二脲标准工作 溶液（3.3.2.10），置于10 mL容量瓶中，用乙腈溶液（3.3.2.8）稀释至刻度，摇匀。各容量瓶中缩二 脲浓度依次为0.500 mg/L、1.00 mg/L 、2.00 mg/L、4.00 mg/L 、6.00 mg/L、8.00 m g/L、10.0 mg/L， 用液相色谱-串联质谱仪测定。标准溶液色谱图参见附录A。 3.3.5.3 样品的测定 具体步骤如下： a) 水样用0.45 m 滤膜过滤，量取 10.0 mL 过滤后的水样，过 HLB 固相萃取柱（过柱前依次用 5 mL 甲醇，5 mL 纯水活化），流速不超过 3 mL/min，弃去流出液，真

16、空状态下将固相萃取柱 抽至近干，用 6 mL 乙腈（3.3.2.4）分两次洗脱，流速不超过 2 mL/min； b) 将洗脱液收集到 10 mL具塞玻璃管中，于 60 氮气吹干，用 1.0 mL 乙腈溶液（3.3.2.8）复 溶，过0.45 m 有机相滤膜，用液相色谱-串联质谱仪测定。 DB35/T 17932018 5 3.3.5.4 空白试验 用水，按3.3.5.3的步骤测定分析空白。 3.3.6 结果计算与表示 采用外标法定量，单位为mg/L。水样中缩二脲浓度计算如式（3）所示： 1 0 V VC C . （ 3） 式中： C 水样中缩二脲的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； C0 标准

17、曲线得到的色谱浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V 提取液浓缩后定容体积，单位为毫升（mL）； V1 量取水样的体积，单位为毫升（mL）。 3.3.7 精密度与准确度 本方法测定结果的相对标准偏差小于5%，回收率80.0%110% 。本方法检出限0.10 mg/L，定量限 0.35 mg/L。 3.4 注意事项 本方法执行中应注意如下事项： 接触过高浓度样品的样品瓶及器皿需用铬酸洗液浸泡洗涤； 缩二脲常温下微溶于水，所以配制缩二脲标准溶液时要适当加热溶解。 DB35/T 17932018 6 A A 附 录 A （资料性附录） 缩二脲的多反应监测（MRM）色谱图和质谱图 图A.1为缩二脲的多反应监测（MRM）色谱图，图A.2为缩二脲的质谱图。 0 20 40 60 80 100 1.0 1.5 3.53.02.5 相对丰度( %) 保留时间(min) 1.882 缩二脲 2.0 图A.1 缩二脲的多反应监测（MRM）色谱图 40 50 60 70 80 90 100 110 0.0 2.0 x10 3 4.0 x10 3 6.0 x10 3 8.0 x10 3 1.0 x10 4 1.2x10 4 1.4x10 4 104.0 61.0 丰度 质量数 44.1 图A.2 缩二脲的质谱图 _