DB41 T 1574-2018 芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定 高效液相色谱法.pdf

1、ICS 65.080 G 20 DB41 河南省 地 方 标 准 DB 41/T 1574 2018 芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定 高效液相色谱法 2018 - 04 - 17发布 2018- 07 - 17实施 河南省质量技术监督局 发布 DB41/T 1574 2018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由河南省质量技术监督局提出。 本标准起草单位：河南省产品质量监督检验院。 本标准主要起草人：郭蕊、孙晓霞、丁国涛、侣丽莎、仵春、赵海波、鲍春铭。 DB41/T1574 2018 1 芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定高效液相色谱法 1 范围

2、 本标准规定了芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定方法。 本标准适用于以芝麻饼为原料，经微生物发酵、加工制成的芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测 定。 本方法的检出限为：芝麻素 0.02 mg/100 g；芝麻林素 0.04 mg/100 g。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY 525 2012 有机肥料 3 方法提要 试样中芝麻素、芝麻林素经乙醇溶液超声提取，以甲醇 +水为流动相，在波长 28

3、7 nm处使用 C18反相 高效液相色谱柱进行分离，外标法定量。 4 鉴别试验 本鉴别试验可与芝麻素（或芝麻林素） 含量的测定同时进行。在相同的色谱条件下，试样溶液某一 色谱峰的保留时间与标样溶液色谱图上芝麻素（或芝麻林素）色谱峰的保留时间，其相对差值在 1.5% 以内，即可确认试样中含有芝麻素或芝麻林素。 当以上方法对芝麻素（或芝麻林素）鉴别有疑问时，可采用其他有效方法进行鉴别。 5 试剂和材料 芝麻素标样：已知质量分数 98.0%； 芝麻林素标样：已知质量分数 98.0%； 甲醇：色谱纯； 乙醇：优级纯， 8+2溶液； 标准储备液： 称取 0.0100 g（精确至 0.0001 g） 芝麻

4、素标样于 100 mL容量瓶中， 加入 80 mL乙醇 溶 液，超声 5 min，取出，冷却至室温，用乙醇溶液定容至刻度，摇匀。配制成 100 g/mL 芝麻素标准贮 备液，于 4 避光保存。 采用同样的方法，称取 0.0100 g（精确到 0.0001 g） 芝麻林素标样，配制成 100 g/mL芝麻林素标准贮备液，于 4 避光保存。 6 仪器和设备 高效液相色谱仪：具紫外可变波长检测器或二极管阵列检测器； DB41/T1574 2018 2 色谱数据处理机或色谱工作站； 色谱柱： C18 柱， 250 mm 4.6 mm（ i.d.)， 5 m，或柱效相当的色谱柱； 进样器： 20 L；

5、过滤器：滤膜孔径为 0.45 m； 涡旋混匀器； 超声波振荡器； 离心机。 7 标准曲线的制备 7.1 标准溶液的制备 准确量取 1.0 mL、 2.0 mL、 5.0 mL、 10.0 mL、 20.0 mL、 40.0 mL芝麻素和芝麻林素标准储备液于 100 mL 容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度，摇匀 。其 质量浓度为 1 g/mL、 2 g/mL、 5 g/mL、 10 g/mL、 20 g/mL、 50 g/mL的芝麻素、芝麻林素混合标准溶液。 7.2 色谱操作条件 流动相：甲醇 +水 80+20，经滤膜过滤，并进行脱气； 柱温：室温（温度波动应不大于 2 ）； 流速： 1.0 mL

6、/min； 检测波长： 287 nm； 进样体积： 5.0 L； 保留时间：芝麻素约 6.0 min，芝麻林素约 7.2 min。 以上操作参数是典型的，可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳分离 效果（见图 1）。 图 1 芝麻饼肥提取液高效液相色谱图 DB41/T1574 2018 3 7.3 操作步骤 在上述色谱条件下，待仪器稳定后，对标准溶液进行分析。以芝麻素、芝麻林素标准溶液浓度为横 坐标，以对应的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，得到线性方程。 按式（ 1）计算回归参数： bxay （ 1） 式中： y 色谱图上芝麻素或芝麻林素的峰面积值； a 回归曲线的斜率

7、 x 标准溶液中芝麻素或芝麻林素的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； b 回归曲线的截距。 8 测定 8.1 试样提取液的制备 按 NY 525 2012 中 6.6 规定的方法制备试样，称取试样 0.5 g（精确至 0.0001 g），置于 10 mL 离心管中，准确加入 5 mL 乙醇溶液，涡旋混匀，超声提取 15 min，以 8000 r/min 离心 6 min，取上 清液于 10 mL容量瓶中；残渣中再加入 4 mL乙醇溶液按同样步骤提取，合并提取液，用乙醇溶液定容， 摇匀，过滤。 8.2 色谱操作条件 同 7.2。 8.3 测定 按 8.2的方法，对试样提取液进样分析，得到芝麻素和芝麻林素色谱峰峰面积。 9 计算 试样中芝麻素或芝麻林素含量按式（ 2）计算。 10m VcX （ 2） 式中： X 试样中芝麻素或芝麻林素的含量，单位 为毫克每 100克（ mg/100 g） ； c 试样提取液中芝麻素或芝麻林素的浓度 ，单位为 微克每毫升（ g/mL） ； V 样品提取液的体积，单位为毫升（ mL） ； m 试样的质量，单位为克（ g）。 10 允许差 DB41/T1574 2018 4 在重复条件下获得的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%，结果保留至 小数点后两 位 。 _