GA T 1624-2019 法庭科学 生物检材中五氟利多检验 液相色谱-质谱法.pdf

1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中五氟利多检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for penfluridol in biological samples LC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员

2、会（ SAC/TC 179/SC 1） 提出并 归口。 本标准起草单位： 北京市公安司法鉴定中心（一） 。 本标准主要起草人： 杨继锋、乔静、杨士云、刘永涛、王燕燕 。 GA/T 1 法庭科学 生物检材中五氟利多检验 液相色谱 -质谱 法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物检材（血 液 、尿 液 、肝 脏组织 ）中 五氟利多的液相色谱 -质谱 （ LC-MS） 定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 生物检材中 五氟利多 的定性分析和定量分析。其他可疑 样品 中 五氟利多 的定 性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引

3、用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其 最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品 和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化 及 浓缩，采用液相 色谱 -质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度比 作 为定性判断依据；以峰面积 为依据，采用外标法进行定量分析。 5 试剂及材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的 一 级水。除非另有说明

4、，在分析中使用的试剂均为分析纯，试 剂包括： a) 甲醇 ； b) 乙酸乙酯 ； c) 乙腈 （色谱纯）； d) 无水硫酸钠； e) 甲酸铵 （色谱纯） ； f) 甲酸（色谱纯）； g) 标准溶液 ： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液 ： 根据 五氟利多 标准物质纯度和盐型换算后， 称 取适量 ， 用甲醇 配制 1.0mg/mL 五氟利多 标准物质溶液 ， 密封， 置于冰箱中 2 8 保存。有效期 6 个月 。 或采用市售标准溶液 ； 2) 10.0g/mL 五氟利多 标准工作 溶 液 ： 移取 1.0mg/mL 的 五氟利多 标准物质溶液 0.1mL， 用 甲醇 定容 至 10mL，混匀

5、 ， 配制成浓度为 10.0g/mL 的 标准工作 溶 液 ， 密封，置 于 冰箱中 GA/T 2 冷藏 保存 。 有效期 3 个月 。 实验中所用其 他 浓度的标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质 溶 液用甲醇稀释得到 。 注 ： 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料 包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 一次性注射器 ； d) 有机系微孔滤膜： 0.22m。 6 仪器和设备 仪器和设备 包括： a) 液相色谱 -质谱仪 ： 配 电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器； b) 电子天平； c) 离心机； d) 振荡 器； e) 移

6、液器； f) 浓缩器。 7 操作 方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体 检材 样品 1.0mL 2.0mL，或称取铰碎的 肝脏等 固体样品 1.0g 2.0g于 具盖离心管 中 ， 加入乙酸乙酯 4.0mL 8.0mL，振荡 5min， 8000r/min离心 10min，分离有机相；重复提取一次， 合 并两次提取的有机相，用无水硫酸钠脱水后，置于浓缩器上 45 浓缩至干， 残留物 用 甲醇 200L溶解 ， 用 0.22m的 有机 系 微孔滤膜过滤， 作为检材样品提取液 ， 供 仪器 分析。 7.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空

7、白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加 五氟利多 标准物质， 作为添加样品（添加样品的浓度 为 5ng/mL） ，与检材样品 平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液 ， 供仪器 分析 。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 （液相色谱 -质谱条件） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 ： a) 色谱柱 ： Zorbax Eclipse Plus C18（ 2.1mm50mm， 3.5m）； 注： Zorbax Eclipse Plus C18柱 是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息

8、是为了方便本标准的使用者，并不是 表示对该产品的认可。如果其他等效 产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 GA/T 3 b) 流速： 0.3mL/min； c) 柱温： 40； d) 进样量： 5L； e) 流动相 ： 流动相 A： 20mmol/L 的甲酸胺水溶液（含 0.1的甲酸） ， 流动相 B： 乙腈（含 0.1 的甲酸） ； f) 洗脱方式 ： 梯度洗脱 ， 梯度见表 1； 表 1 梯度洗脱程序 时间 min A B - 55% 45% 1.00 55% 45% 3.00 10% 90% 4.00 10% 90% 5.00 55% 45% 8.00 55% 45% g) 扫描方

9、式：正离子扫描； h) 检测方式：多反应 离子 监测（ MRM）； i) 离子源温度： 600； j) 雾化气： 40 psi； k) 辅助加热气： 40 psi； l) 气帘气： 20 psi； m) 碰撞气： medium； n) MS 参考条件（ 定性、定量离子和去簇电压、碰撞能量 ） 见表 2。 表 2 MS 参考 条件 目标物 定性离子 对 定量离子 对 去簇电压 V 碰撞能量 eV 五氟利多 524.1109.3 524.1109.3 164 75 524.1149.2 53 524.1203.7 58 524.1274.2 60 524.1292.1 50 7.1.2.2 进样

10、分别吸取空白、检材和添加样品提取液 及 标准工作溶液， 按 7.1.2.1 分析条件 进样分析 。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 提取 移取血液等液体检材样品 1.0mL 2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g 2.0g两份，按 7.1.1.1进行操作。 GA/T 4 另取等量相似基质的空白样品 四份，其中一份作为空白样品 ， 另三份根据五氟利多在不同基质中的 线性范围，分别添加低、中、高 浓度的 五氟利多 （定容后浓度为测定下限、线性范围中点、测定上限） ， 混匀后静置 24h以上 ，然后按 7.1.1.1平行操作。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 按 7

11、.1.2.1 规定的 条件分析。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1 的分析条件每个样品进样分析 2 3 次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6 次 。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品中五氟利多定量离子的峰面积值，同一样品 两 次峰面积值相对相差 小于等于 5%。 以添 加 低、中、高的样品浓度（ ng/mL 或 ng/g，即样品中添加五氟利多质量 /样品 体积或质量 ）为横坐标， 对应浓度的 两 次峰面积均值为纵坐标建立回归方程 Y=Wb+a，当 r 0.998 时可以用回归方程来定量检材 含量（

12、 参 见附录 A） 。 如果不在线性范围内，则 应 对定容液进行稀释或对检材取样量进 行调整。 按 公式 （ 1） 计算 含量 ： . (1) 式中： W 检材 样品 中 五氟利 多的含量，单位为纳克每克或纳克每毫升 (ng/g 或 ng/mL)； Y 检材 样品 提取液 中 五氟利多 峰面积 平均值 ； a 线性方程的截距； b 线性方程的斜率。 7.2.3.2 计算相对相差 记录 两 份平行操作的 检材 样品中目标物的 含量，按公式（ 2）计算相对相差： %10021 = X XXRD . (2) 式中： RD 相对相差 ， 用百分比（ %）表示 ； X1、 X2 两个检材 样品 平行定量

13、测定的含量数值； X 两个检材 样品 平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 GA/T 5 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 2.5%之内）、目标物的定性离子（至少两对定性离子）与标准溶液一致，且离子丰度比与浓度接近的 标准溶液相比，相对偏差不超过表 3 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。 表 3 离子丰度比的最大允许偏差范围 离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 20 25 30% 50% 8.1.2 阴性结果评价 检材样品未出现与目

14、标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱 峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中 目标物含量的 RD 20%，定量数据不可靠。应按 7.2重新提取检验 。 方法检出限、回归方程及质谱图参 见附录 A，五氟利多性质参见附录 B。 GA/T 6 A A 附 录 A （资料性附录） 方法 检出限、回归方程及谱图 A.1 五氟利多方法检出限及回归方程 生物样品（血液、尿液、肝脏组织）中五氟利多检出限均为 2ng/g（ mL） 。 五氟利多样品在满足

15、 6 次峰面积 RSD 2%、相关系数 r 0.998 时的线性范围为 8.0ng/mL 400ng/mL，求得的回归方程为： 血液样品中： 3608.1 11200yx=+， 2 0.9996r = 尿液样品中： 3 5 5 8 .5 7 0 6 4 .8yx=+， 2 0.9998r = 肝脏组织样品中： 3197.1 12189yx=+， 2 0.9997r = A.2 五氟利多质谱图 五氟利多质谱图见图 A.1。 图 A.1 五氟利多质谱图 GA/T 7 附 录 B （资料性附录） 五氟利多性质 B.1 药理作用 及代谢简介 五氟利多 为口服长效抗精神病药。抗精神病作用与其阻断脑内多巴

16、胺受体有关，还可阻断神经系统 -肾上腺素受体，抗精神病作用强而持久，口服一次可维持数天至一周 。 口服吸收缓慢， 24h 72h血药 浓度达峰值， 7d后仍可自血中检出。吸收后贮存 于脂肪组织，缓慢释放，逐渐透入脑组织。大部分以原 型从粪便中排出，少量经尿排出 。 B.2 理化性质 中文名：五氟利多 ； 英文名称： Penfluridol； 化学名： 1-4,4-双 (4-氟苯基 )丁基 -4-4-氯 -3-(三氟甲基 )苯基 -4-哌啶醇 ； 英文别名： 1-(4,4-Bis(4-fluorophenyl)butyl)-4-hydroxy-4-(3-trifluoromethyl-4-chl

17、orophenyl)piperidine； 1-4,4-Bis(4-fluorophenyl)butyl-4-4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl-4-piperidinol； 1-4,4-Bis(4-fluorophenyl)butyl-4-4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenylpiperidin-4-ol； 1-4,4-Bis(p-fluorophenyl)butyl-4-(4-chloro-a,a,a-trifluoro-m-tolyl)-4-piperidinol； CAS号： 26864-56-2； EINECS号： 248-074-5； 分子式： C28H27ClF5NO； 分子量： 523.9651； 密度： 1.29g/cm3； 熔点： 105 107 ； 沸点： 587.7 （ 760 mmHg） 。 _