GA T 1910-2021 法庭科学 生物检材中百草枯检验 液相色谱-质谱法.pdf

1、 ICS 13.310 A 92 法庭科学 生物检材 中 百草枯 检验 液相色谱- 质谱法 Forensic sciences Examination methods for paraquat in biological samples LC-MS ICS 13.310 CCS A 92 GA 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA/T - - 实施 - 发布 中 华 人 民 共 和 国 公 安 部 发布 GA/T 前 言 本文件 按 照 GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第 1 部分： 标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规定 起草。 请注意

2、本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本 文件 由全 国刑 事技 术标 准化技 术委 员会 毒物 分析 分技术 委员 会 （SAC/TC 179/SC 1 ） 提 出并归口。 本 文件 起草 单位 ： 滨 州市 公安局 、 公 安部 物证 鉴定 中心、 广东 省公 安厅 刑事 技术中 心、 广州 市公 安 局刑事 技术 所、 郑州 市公 安局物 证鉴 定所 、 山 西省 公安厅 、 大 连市 公安 局刑 侦支队 刑事 科学 技术 室、 浙 江省公 安厅 刑侦 总队 、广 西壮族 自治 区公 安厅 刑侦 总队、 中国 刑事 警察 学院

3、 、湖北 省司 法鉴 定中 心。 本 文件 主要 起草 人： 吴洪 振、 王 玮、 王秉 晨、 王秀 娟、 高 颖、 王文 卓、 郝伟 、 于忠 山、 张亮 、 孙 立 敏、孔 维刚 、张 高勤 、王 彬、宣 宇、 乔文 涛、 朱昱 、孙杰 燕。 GA/T 1 法庭科学 生 物检 材中百草 枯 检验 液相色谱- 质谱 法 1 范围 本 文件规定了法庭科学 生 物检材（ 血液、胃组织 、 肝脏）中百草枯的液相 色 谱- 质谱（LC-MS）定 性定量 分析 方法 。 本 文件 适用 于法 庭科 学生 物检材 （血 液、 胃组 织、肝 脏） 中百 草枯 的定 性定 量分析 。 其 他检材 可参 照使

4、用 。 2 规范 性引 用文 件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用于 本 文件。 GB/T 6682 分析 实验 室用 水规格 和试 验方 法 GA/T 122 毒物 分析 名词 术语 3 术语 和定 义 界 定的 术语和 定 义适用 于本 文件 。 4 原理 以空白 样品 和添 加样 品作 对照 ， 按 平行 操作 的要 求 ， 对生物 检材 中的 百草 枯 进 行提

5、取 、 净化 及浓 缩， 采用液相色谱- 质谱法定性定量，以保留时间、质谱 特征离子作为定性判断依 据；以峰面积为依据，采 用外标 法进 行定 量。 5 试剂 和材 料 5.1 试剂 实验用 水应 符合 中规定 的一 级水 。分 析中 使用的 试剂 均为 色谱 纯， 试剂包 括： a) 乙腈； b) 甲酸； c) 甲酸铵 ； d) 含 （ ） 甲酸 的 甲酸 铵溶 液： 称取 甲酸 铵 和 甲酸 ， 置 于 容量瓶 中， 加水 至刻 度， 摇匀超 声后 备用 ； e) 值 的 氨水 ：移 取 浓氨 水加 水定 容至 ； f) 标准溶 液： 1) 标准 物质 储备 溶 液：根 据 百 草枯 标准

6、 物质 的纯度 和盐 型换 算后 ，取 适量， 用 水 配制成 百 草枯 标准物 质储 备溶 液， 密封 ， 以下 保存 ，有 效期 12 个月 。或 采用市 售标 准溶 液； GA/T 2 2) 标准物 质工作 溶 液： 移取 标 准物 质储 备溶 液，用 水配 制成 浓度 为 100n 的 标准工 作 溶 液， 密封 ， 保存 ， 有 效期 3 个月 。实验 中所 用其 他浓 度的 标准工 作溶 液均 由 标 准物 质 储备溶 液配 制得到 。 5.2 材料 材料包 括： a) 具盖离 心管 ； b) 有机微 孔滤 膜：0.22 m ； c) 固相萃 取柱 ：Waters Oasis WC

7、X 柱或 等效 柱 。 注 ： 柱是 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品 。 6 仪器 和设 备 仪器和 设备 包括 ： a) 液相色 谱-串联 质 谱仪 ：配 有电喷 雾离 子源 （ESI ） ； b) 振荡器 ； c) 电子天 平 ： 分度 值 d ； d) 离心机 ； e) 移液器 ； f) 超声波 清洗 器 。 7 操作 方法 7.1 定 性分 析 7.1.1 样品 前处 理 7.1.1.1 蛋 白沉 淀 移取血 液等 液 体 检材 样 品 1.0mL ，或 称取 铰碎 的肝 脏 等

8、固体 检材 样 品 1.0g 于 具 盖离心 管中 ，加 入 乙腈 3.0mL ， 振 荡 5min ， 不低 于 8000r/min 离心 10min，取 上 清液 ， 经有 机微 孔滤膜 过滤 ， 作为 检材 样 品提取 液， 供仪 器检 测 。 注： 检材样品取样量和乙腈体积可根据实际情况调整。 7.1.1.2 固 相萃 取 移取血 液等 液体 检材 样 品 ， 或称 取铰 碎的 肝脏 等固体 检材 样 品 于 具 盖离心 管中 。 加入 值 的氨 水稀 释 ，振荡 ， 不低 于 离心 ，取上 清 液转移 至已 活化 好的 固相 萃取柱 中（ 使用 前依 次用 甲醇 、 水进 行活 化）

9、 ，用 水、 甲 醇淋洗 ，用 甲酸 乙腈 水 （体积 比为 ） 洗脱， 收集 洗脱 液， 过 的有 机系 微孔 滤膜 ， 作为检 材样 品提 取液 ， 供仪器 检测 。 注： 检材样品取样量、缓冲液体积及定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.3 质 控样 品制 备 取等量 相似 基质 的空 白样 品 （ 若无 相似 基质 空白 样 品可用 血液 替代 ） 两份 于 具盖离 心管 中 ， 一 份作 为空白 样品 ， 一 份添 加标 准物质 工作 溶液 ， 使 百草 枯 浓度为 ， 作 为添加 样品 ， 与 检材 样品 平GA/T 3 行操作 ，得 到空 白样 品提 取液和 添加 样品 提取

10、 液 ， 供仪器 检测 。 7.1.2 仪器 检测 7.1.2.1 液 相色 谱- 串联 质 谱仪条 件 以下为 参考 条件 ，可 根据 不同品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 ： a ） 色谱柱 ： 柱（ ， ）或其 他等 效柱 ； 注：HILIC 为 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认 可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b） 柱温： ； c ） 流动 相 ：含 （ ）甲酸 的 甲 酸 铵溶液 ； d） 流动 相 ：乙 腈； e ） 流速： ； f ） 洗脱： 梯度 洗脱 ，梯 度洗 脱条

11、件 见 表 ； 表 1 梯度 洗脱 条件 时间 min 流动相A 流动相B 0 20% 80% 0.3 60% 40% 4.0 60% 40% 5.0 20% 80% 6.5 20% 80% g） 扫描方 式： 正离 子扫 描； h） 检测方 式： 多反 应检 测（ ）； i ） 电喷雾 电压 ： ； j ） 离子源 温度 ： ； k） 碰撞气 ：氮 气； l ） 定性、 定量 离子 对和 锥孔 电压、 碰撞 能量 条件 见 表 。 表 2 定性 、定 量离 子对 和锥孔 电压 、碰 撞能 量条 件 目标物 定量离子对 m/z 定性离子对 m/z 锥孔电压 V 碰撞能量 eV 百草枯 186.

12、2/171.0 186.2/171.0 65 30 186.2/155.1 50 40 7.1.2.2 进样 分别吸 取 空 白溶 剂 、 添加 样品 提 取液 、 空 白样 品 提 取液 、 检材 样品 提取 液 、 标准物 质工 作溶 液， 进 样量为 ， 按7.1.2.1 仪 器条件 进行 检测 。进 样顺 序和进 样次 数应 确保 结果 有效。 7.2 定 量分 析 7.2.1 样品 前处 理 GA/T 4 移取血 液等 液体 检材 样品 两份 ，或 称取 铰碎 的肝脏 等固 体检 材样 品 两份 ，按 进 行操作 ，上 清液 经有 机微 孔滤膜 过滤 后， 置于 浓缩 器上 60 浓

13、缩 至干 ，残 留 物用 水 0.2mL 溶 解， 得到 检材样 品提 取液 ，供 仪器 检测。 取与检 材样 品等 量的 相似 基质空 白样 品 ， 与检 材样 品平行 操作 ，得 到空 白样 品提取 液， 供仪 器检 测。 外标- 单点 校正 法 ： 取与 检 材样品 等量 的相 似基 质空 白样品 两 份 ，添 加 百 草枯 标准物 质工 作溶 液， 作为添 加样 品, 与检 材样 品 平行操 作， 得到 添加 样品 提取液 ，供 仪器 检测 。添 加样品 中目 标物 含量 应在 检材样 品中 目标 物含 量的 （ ） 范 围内 。 外标- 校准 曲线 法 ： 取与 检 材样品 等量 的

14、相 似基 质空 白样品 ，添 加 百 草枯 标准 物质工 作溶 液， 配制 成浓度 在 L 范 围内 的添 加 样 品， 与 检材样 品平 行操 作， 得到 添加样 品提 取液 ，供 仪器 检测。 校准 曲线 应不 少 于 6 个浓 度点 （包 括空 白样 品）。 检材 样品 中目 标物 的 含量 应在 校准 曲线 的线 性范围 内。 7.2.2 仪器 检测 7.2.2.1 液 相色 谱- 串联 质 谱仪条 件 同 。 7.2.2.2 进样 分别吸 取检 材样 品提 取液 、 空 白样 品提 取液 、 添 加 样品提 取液 进样 分析 。 每 份检材 样品 提取 液和 添 加样品 提取 液各

15、进样 分析2 3次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计 算含 量 7.2.3.1.1 外标-单 点校 正 法 记录检 材样 品提 取液 和添 加样品 提取 液中 目标 物的 保留时 间和 峰面 积值 ，按 公式（1） 计算 检材 样 品中目 标物 的含量 。 = A A . （1） 式中： 检 材样 品中 目标 物的 含量； A 检材 样品 提取液 中目 标 物 的峰 面积 的平 均值 ； A 添加 样品 提取 液中 目 标物的 峰面 积的 平均 值； 添加 样品 中目 标物 的含 量 。 7.2.3.1.2 外标-校 准曲 线 法 记 录 检 材样 品 提取 液 和添加 样 品 提取 液

16、 中目 标 物的保 留 时 间和 峰 面积 值 ，以 添 加 样 品提 取 液中 目 标物的 峰面 积的 平均 值为 纵坐标 、 添 加样 品提 取液 中 目标 物的 含量 为横 坐标 进行线 性回 归， 得到 线性 方 程。根 据检 材样 品提 取液 中目标 物的 峰面 积值 ，按 公式 （2） 计算 出检 材样 品 中目标 物的 含量 。 = y-b a （ ） 式中： 检 材样 品中 目标 物的 含量 ； y 检 材样 品提 取液 中目 标 物的峰 面积 的平 均值 ； GA/T 5 a 线 性方 程的 斜率 ； b 线 性方 程的 截距 。 7.2.3.2 计 算相 对相 差 记录 中

17、 计算 得到 的 检材样 品中 目标 物的 含量 ， 按公 式 （ ） 计算 相对 相 差： 12 100% - RD = （ ） 式中 ： RD 相 对相 差， 用百 分比 （ ） 表示 ； 、 两 份检 材样 品中 目标物 的含 量； 两份检 材样 品中 目标 物 含量的 平均 值。 8 结果 评价 8.1 定性 结果 评价 8.1.1 阳 性结 果评 价 在相同 条件 下进 行样 品测 定时， 检材 样品 中目 标物 的色谱 峰保 留时 间与 标准 物质工 作溶 液 一 致 （ 相 对误差在 之 内） 、 目 标物的 两对 定 性 离子 与 标 准物质 工作 溶液 一致， 且 离子 对

18、丰度 比与 浓度 接近 的 标准物 质工 作溶 液 相 比 ， 相对偏 差不 超过 表 规定 的范围 ， 空白 样品 无干 扰 ， 则 可判 断检 材样 品中 检 出 目标物 。 表 3 离子 对丰 度比 的最 大允许 相对 偏差 范围 离子对丰度比 50% 20% 50% 10% 20% 最大允许相对偏差 20% 25% 30% 50% 8.1.2 阴 性结 果评 价 检 材 样 品未 出 现与 目 标物标 准 物 质工 作 溶液 一 致的色 谱 峰 ，且 添 加样 品 中出现 与 目 标物 标 准 物质 工作溶 液一 致的 色谱 峰， 空白样 品无 干扰 ，则 可判 断检材 样品 中未 检

19、出 目标 物。 8.2 定量 结果 评价 检材样 品中 目标 物含 量的RD 20% ， 定量 数据 可靠 ， 其含量 按 两 份检 材的 平均 值计算 。 检材样 品中 目标物 含量 的RD 20% ， 定量数 据不 可靠 ，应按7.2 重新提 取检 验。 百草枯 相关 资料 及谱图 参见 附录A 。 GA/T 6 附录 A （资料 性） 百草枯 的相 关 资 料及 谱图 A.1 百草 枯 的 相关 资料 中文名： 百草枯 ， 又 称对 草快 ， 克芜踪；英 文名： ；化学 名： 二甲基 联 吡啶阳离子 ； 编号： ；分子式： ；分子量： ； 化学结 构式 ： 见图 。 百 草枯为 有机 杂

20、环 类触 杀型 灭生除 草剂 ， 其二 氯化 物 为白色 晶体 ， 在 时 分 解。 易 溶于 水， 微 溶于 乙 醇、 丙 酮 ， 不 溶于 碳氢 化 合物。 在酸 性介 质中 稳定 ， 在碱 性介 质中 不稳 定。 大 鼠急性 口服 为 毫克 公斤， 家兔 急性 经皮 为 毫克 公斤 ， 对 家禽 、 鱼、 蜜蜂 低毒。 对眼 睛 有刺激 作用 ， 可 引起 指甲 、 皮肤 溃烂 等； 百草 枯可 经皮肤 、 呼 吸道 及消 化道 吸收， 通过 血液 循环 几乎 分 布于所 有组织 和器 官，肺 中浓度 较高， 口服 克即 可 导致系 统性中 毒， 并 导致 肝、肾 等多器 官衰 竭，肺 部纤维 化（ 不可 逆） 和 呼 吸衰竭 。因 中毒 前期 治疗 黄金期 内症 状不 明显 ，容 易误诊 或忽 视病 情。 图A.1 百 草枯 化学 结构 式 .2 百 草枯 的相 关谱 图 百草枯 的相 关谱 图见 图 图 。 图A.2百 草枯 色谱图 N + H 3 C N + CH 3 Cl - Cl -GA/T 7 图 A.3 百草 枯质 谱图 A.3 检出 限 本方法 血液 中的 检出 限为1ng/mL ， 定量 限为5ng/mL 。 _