GA T 1904-2021 法庭科学 生物检材中乌头碱等21种生物碱筛选 液相色谱-质谱法.pdf

1、 HHP ICS 13.310 CCS A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材 中乌头碱 等 21 种 生物碱筛 选 液相色 谱- 质谱法 Forensic sciences Screening methods for 21 alkaloids including aconitine in biological samples LC-MS - 发布 - - 实施 中 华 人 民 共 和 国 公 安 部 发布 GA/T I 前 言 本文件 按 照 GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第 1 部分： 标准 化文 件的

2、结构 和起草 规则 的 规定 起草。 请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利 。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本文件 由全 国刑 事技 术标 准化技 术委 员会 毒物 分析 分技术 委员 会 （SAC/TC 179/SC 1 ） 提 出并归口。 本文件 起草 单 位： 重 庆市公安局 物证 鉴 定中 心 、公安 部 物 证鉴 定 中心 、 广西壮 族 自 治区 公 安厅 、 广州市 公安 局 、 广东 省公 安厅 、 贵州 省公 安厅 、济 南 市公 安局 、杭 州市 公安 局 。 本文件 主要 起草 人： 王俊 伟、石 银涛 、郑 经、 李恒 、郭璟 琦

3、 刘文 文、 任昕 昕、 张 云峰 、 王 爱华 、 黄克建 、孙 立敏 、张 亮、 王立雄 、 武 继锋 、 汪 旭峰 、应剑 波 。 GA/T 1 法庭科学 生 物检 材中 乌头 碱等21 种生物碱 筛选 液 相色谱- 质谱 法 1 范围 本文件 规定了法庭科学 生 物检材 （血液、尿液 、肝脏 ）中乌头碱等21种 生物 碱 的液相色谱- 质谱 检 验方法 。 本文件 适用 于 法 庭科 学 生 物检材 （血 液、尿 液 、 肝脏 ） 中 乌头 碱 等21 种 生物 碱 的定 性分 析。 其他 检 材可参 照使 用。 2 规 范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性

4、 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用于 本 文件。 GB/T 6682 分析 实验室 用 水规格 和试 验方 法 GA/T 122 毒 物分 析名 词术 语 3 术 语和 定义 GA/T 122 界 定的 术语 和定 义适用 于本 文件 。 4 原理 以空白 样品和 添加 样品 作 对照， 按平行 操作 的要求 ， 对生 物检材 样品 中21 种 生物碱 （详见 附录A ） 进行提 取、 净化 及浓 缩， 采用液 相

5、色 谱- 三 重四 极杆 串联质谱 或 液相 色 谱- 高分 辨质谱 检测 。 5 试 剂和 材料 5.1 试剂 实验用 水应 符合GB/T 6682 中规定 的 一 级水 。 除 非另 有说明 ，在 分析 中使 用的 试剂均 为色谱 纯 ，试 剂包括 ： a ） 甲醇； b） 乙腈； c ） 甲酸： d） 乙酸乙 酯 ； e ） pH 值 6 的磷 酸盐 缓冲 液 （ 以配 制 100mL 为 例） ：称 取磷酸 氢二 钠（Na 2HPO 4 12H 2O ）0.88g， 磷酸二 氢钠 （NaH 2PO 4 2H 2O ）2.74g ，加 水溶 解定 容 至 100mL ， 摇匀 备用 ；

6、f ） 含 5 10 -3 mol/L 甲 酸铵 和 0.1 甲 酸的 水溶 液 （ 以配 制 100mL 为例 ） ：取 0.032g 甲 酸铵 和 100 L 甲酸， 加水 溶解 定容 至 100mL ， 摇匀 备用 ； g） 流动相 ：含 5 10 -3 moL/L 甲酸铵 和 0.1 甲酸 的水 溶 液 为流动相 A ，乙 腈为 流 动相 B ； h） 初始流 动相 ： 分 别量 取流 动相 A 900mL ， 流 动相 B 100mL ，混 合均 匀； i ） 标准溶 液： GA/T 2 1) 1.0mg/mL 标准 储备 溶液 ： 根据 21 种生 物碱 的 纯 度和 盐型换 算后

7、 ，分 别用 乙腈 配制 21 种 生物 碱 1.0mg/mL 标准 储备溶液 ， 密 封， 置于 冰箱 中 冷藏保 存 ， 有 效期 6 个月 。 或 采用 市 售标准 溶液 ； 2) 单一标 准工 作溶 液： 准确 移取 21 种 生物 碱 1.0mg/mL 标准 储备 溶 液各 10 L ， 用乙腈 定容 至 1.0mL ， 混 匀， 密封， 配制 成 0.01mg/mL 的 单一 标准工 作溶 液， 置于 冰箱 中冷藏 保存 ， 有效 期 3 个 月；实 验中 所 用 其他 浓度 的单 一标 准工 作溶液 均 由 0.01mg/mL 的 单一标 准工 作溶液 稀释 得到 ； 3) 混合

8、标 准 工 作溶 液 ： 根 据实 验需要 配制 成相 应浓 度 （5ng/mL 、 10ng/mL 、 20ng/mL 、 50ng/mL 、 100ng/mL 、200ng/mL 、500ng/mL 、1000ng/mL ）的 混合标 准工 作溶 液， 现用 现配； 4) 质控标 准工 作溶 液 ： 根 据 实验需 要配 制成 相应 浓度 的 新乌 头碱 、 雷公 藤吉 碱 、 青 藤碱 混合 标准工 作溶 液， 现用 现配 。 注：根据实际情况， 可以适当调整质控标准工作 溶液中生物碱的种类。 5.2 材料 材料包 括： a ） 具 盖离 心管 ； b） 两相 微 孔滤 膜：0.22 m

9、 ； c ） 固 相萃 取柱 ：Oasis HLB 柱（60mg, 3mL ） 或 等效固 相萃 取柱 。 注：Oasis HLB 柱是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对 该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 6 仪 器和 设备 仪器和 设备 包括 ： a ） 液 相色 谱- 三重 四 极 杆 串联质 谱仪 ： 配 有电 喷雾 离子源 （ESI）； b） 液 相色 谱- 高 分辨 质谱 仪：配 有电 喷雾 离子 源（ESI ）和 高分 辨质 量分 析器 ； c ）电 子天 平： 实际 分度 值d 0.1mg ；

10、 d）振 荡器 ； e ）超 声波 清洗 器； f ）浓缩 器； g） 均 质器 ； h） 离 心机 ； i ） 移液 器 。 7 操 作方 法 7.1 样品 前处 理 7.1.1 蛋白 沉淀 移取血 液等 液体 检材 样品 0.5mL 或 称取 铰碎 或匀 浆 的肝脏 等固 体检 材样 品 0.5g 于具 盖离 心管 中。 加入 1.5mL 乙腈 ，用 振荡 器振 荡 10min ，用 离心 机 以不低 于 8000r/min 离心 10min ，取 上清 液 经 微孔 滤 膜过滤 ， 作 为检 材样 品提 取液 ， 供仪 器检 测。 注： 检材样品取样量和乙腈体积可根据实际情况调整。 GA

11、/T 3 7.1.2 液 液萃 取 移取血 液等 液体 检材 样 品 1.0mL ， 或称 取铰 碎 或 匀浆 的肝脏 等固 体检 材样 品 1.0g 于具 盖离 心管 中。 加入乙 酸乙 酯 5.0mL ，用 振荡器 振 荡 10min ，用 离 心机 以 不低 于 8000r/min 离心 10min ， 分离 有机 相 ； 上清液 于 40 吹 至近 干， 用 300L 初始 流动 相定 容 ，涡旋 ，离 心， 经微 孔滤 膜过滤 ， 作 为检 材样 品提 取液， 供仪 器检 测。 注： 检材样品取样量、 乙酸乙酯体积及定容体积可根据实际情况调整。 7.1.3 固相 萃取 移取血 液等

12、液体 检材 样 品 1.0mL ， 或称 取铰 碎 或 匀浆 的肝脏 等固 体检 材样 品 1.0g 于具 盖离 心管 中。 加入磷 酸盐 缓冲 液 3mL ， 用振荡 器振 荡 10min ，用 离心机 以不 低于 8000r/min 离心 10min ，取 上清 液 待 过柱。 取 3mL HLB 固 相萃 取柱依次以 3mL 甲醇 、3mL 水 活化 ，将 离心 后的 上 清液过 柱 ， 再以 3mL 水 和 3mL0.5% 甲醇 水先 后 淋 洗， 用 2mL 甲醇 洗 脱 ， 收 集洗脱 液并于 40 吹 至近 干， 用 300 L 初始 流动 相 定容， 涡旋 ，离 心 ， 经微

13、孔滤膜 过滤 ， 作 为检 材样 品提取 液 ， 供仪 器检 测。 注：检材 样品取样量、缓冲液体积及定容体积可根 据实际情况调整。 7.1.4 质控 样 品制 备 取等量 相似 基质 的空 白样 品 （ 若无 相似 基质 空白 样 品可用 血液 替代） 两份 于 具盖离 心管 中 ， 一 份作 为空白 样品 ，一份 添加 质 控标准 工作 溶液 ，使 新乌 头碱含 量 为 20ng/mL ， 雷 公藤吉 碱含量为 30ng/mL ， 青藤碱 含量 为 200ng/mL ， 作为添 加样 品， 与检 材样 品平行 操作 ，得 到空 白样 品提取 液和 添加 样品 提取 液，供 仪器 检测 。

14、7.2 仪器 检测 7.2.1 仪 器条 件 7.2.1.1 液 相色 谱- 三 重四 极 杆串 联质 谱 仪 条件 以下为 参考 条件 ，可 根据 不同品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 ： a) 色谱 柱：ACQUITY UPLCBEH C 18 (100mm 2.1mm ，1.7m) 或其他 等 效 柱； 注：ACQUITY UPLCBEH C18 是 Waters 公司产品的商品名 称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不 是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱 温： 3 5 ； d) 流 速：0.3mL/min

15、 e) 洗脱 ： 梯 度洗 脱， 梯 度洗脱 条件 见 表 1； f) 进样 量：2 L ； g) 扫 描方 式： 正离 子扫 描； h) 检 测方 式： 多反 应监 测（MRM）； i) 电喷 雾电 压：5500V ； j) 离子 源雾 化气 ： 氮气 ，60psi ； k) 离 子源 加热 辅助 气 ： 氮气 ，55psi ； l) 加热 器温 度 ：55 0 ； m) 碰撞 气： 高纯 氮 ； n) 各 生物 碱的 离子 对、 去簇电 压和 碰撞 能量 参见 附录 B 中 表 B.1 。 GA/T 4 表1 梯 度洗 脱条 件 时间 min 流动相 A 流动相 B 0.0 90% 10

16、 0.5 90% 10% 7.0 30% 70% 7.1 10% 90% 8.9 10% 90% 9.0 90% 10% 12.0 90% 10% 7.2.1.2 液相 色谱- 高分 辨 质谱 仪条件 以下为 参考 条件 ，可 根据 不同品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 ： a) 色谱 柱：ACQUITY UPLCBEH C 18 (100mm 2.1mm ，1.7m) 或其 他等 效 柱 ； 注 ：ACQUITY UPLCBEH C18 是 Waters 公司产品的商品名 称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不 是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效

17、果，则可使用这些等效产品。 b) 柱 温： 3 5 ； c) 流速 ：0.3mL/min ； d) 梯 度： 梯度 洗脱 ，梯 度洗 脱 条件 见 表 1； e) 进样 量：2 L ； f) 扫描 方式 ：全 扫描/ 数 据依赖 二级 质谱 （Full MS/dd-MS 2 ） 扫描 ； g) 喷雾 电 压：3.5 kV ； h) 毛 细管 温度 ： 325 ； i) 喷雾 温度 ：300 ； j) 透镜 电压 ：60V ； k) 鞘 气（ 氮气 ）压 力 ：40arb ； l) 辅助 气（ 氮气） 压力 ：18arb ； m) 采集 范围 ： （50 1000 ）Da ； n) 各 生物 碱

18、的 精确 质量 和归一 化碰 撞能 量 参 见附 录 B 中表 B.2 。 7.2.2 进样 分别吸 取 空 白溶 剂、 添加 样 品提 取液 、 空 白样 品提取 液、 检材 样品 提取 液 、 质控 标 准工 作溶 液 ， 按 7.2.1 仪器条 件 进行 检测 。 进样顺 序和进 样次 数 应确 保结果 有效。 若质 控标准 工作溶 液不包 含检 材中检 出的目 标物 ，需 吸取 相应 目标物 的标 准工 作溶 液 ， 按 7.2.1 仪 器条 件进 行分析 。 8 定性 结 果评 价 8.1 液相 色谱- 三重 四极 杆串联 质谱 法 8.1.1 阳 性结 果评 价 在相同 条件 下进

19、 行样品 测 定时 ， 检材 样 品中 目标 物 的色谱 峰保 留时 间与 标准 工作溶 液 一 致 （相 对误 差在 2.5% 之 内 ） 、 目 标物 的定性 离子 对 与 标准 工作 溶液 一 致 ， 且 离子 对丰 度 比与浓 度接 近的 标准 工作GA/T 5 溶液相比 ，相 对偏 差不超 过表 2 规定 的范围 ，空 白 样品无 干扰， 则可 判断检 材样品 中检出 目标 物。21 种生物 碱的 质谱 图参 见附 录 C 。 表2 离子 对丰 度比 的最 大 允许相 对偏 差范 围 离子对丰度比 50% 20% 50% 10% 20% 1 0 % 最大允许相对偏差 20% 25%

20、30% 50% 8.1.2 阴 性结 果评 价 检材样 品未 出现 目标 物 色 谱峰 ， 且 添加 样品 中出 现 与 质控 标准 工作 溶液 一致 的色谱 峰 ， 空 白样 品无 干扰 ， 则 可判 断检 材样 品 中未检 出目 标物 。 本方 法 21 种生 物碱 液相 色谱- 三重 四极 杆 质谱 检测 的保 留时 间及检 出限 参见附录 D 。 8.2 液相 色 谱- 高分 辨质 谱 法 8.2.1 阳 性结 果评 价 在相同 条件 下进 行样品 测 定时 ， 检材 样 品中 目标 物 的色谱 峰保 留时 间与 标准 工作溶 液 一 致 （相对 误 差在 2.5% 之 内） ， 且

21、检材 样品中 目标 物前 体离 子的 质荷比 与理 论质 荷比 一致 （质 荷比 大于等 于 200 时 ， 质量精 度 小 于等 于 5 10 -6 ；质 荷比 小于 200 时 ，质 量精度 小于 1mDa ）， 同时 至少 1 个二 级质 谱特 征离 子与标准 物质 工 作溶 液一致 （质 荷比 大于 等 于 200 时 ，质 量精 度 小 于等 于 5 10 -6 ；质荷 比小于 200 时 ， 质量精 度小于 1mDa ）， 空 白样品 无干 扰， 则可 判断 检材样 品中 检 出 目标 物。 8.2.2 阴 性结 果评 价 检材样 品未 出现 目标 物色 谱峰 ， 且 添加 样品

22、中出 现 与 质控 标准 工作 溶液 一致 的色谱 峰 ， 空 白样 品无 干扰， 则可 判断 检材 样品 中未检 出目 标物 。 本 方法 21 种生 物碱 液相 色谱-高 分 辨质谱 的保 留时 间及 检出 限参见附录 D 。 GA/T 6 附 录 A （资料 性） 21 种 生物 碱 的 相关 信息 21 种 生物 碱的 相关 信 息见表 A.1 。 表A.1 21 种生 物碱 的相 关 信息 编号 中文 名 英文名 CAS 编号 分子式 1 乌头碱 aconitine 302-27-2 C34H47NO11 2 新（中）乌头碱 mesaconitine 2752-64-9 C33H45

23、NO11 3 次乌头碱 hypaconitine 6900-87-4 C33H45NO10 4 滇乌头碱 yunaconitine 70578-24-4 C35H49NO11 5 马钱子碱 brucine 357-57-3 C23H26N2O4 6 士的宁 strychnine 1421-86-9 C21H22N2O2 7 雪上一枝蒿甲素 bullatine A 1354-84-3 C22H33NO2 8 雪上一枝蒿乙素 bullatine B 466-26-2 C24H39NO6 9 山莨菪碱 anisodamine 55869-99-3 C17H23NO4 10 东莨菪碱 scopolam

24、ine 51-34-3 C17H21NO4 11 钩吻素子 koumine 1358-76-5 C20H22N2O 12 钩吻素已 gelsenicine 6887-28-1 C19H22N2O3 13 钩吻素甲 gelsemine 509-15-9 C20H22N2O2 14 雷公藤吉碱 wilforgine 37329-47-7 C41H47NO19 GA/T 7 表A.1 21 种生 物碱 的相 关 信息 （ 续） 编号 中文 名 英文名 CAS 编号 分子式 15 雷公藤定碱 wilfordine 37238-51-3 C43H49NO19 16 毒扁豆碱 physostigmine

25、57-47-6 C15H21N3O2 17 阿托品 atropine 51-55-8 C17H23NO3 18 秋水仙碱 colchicine 64-86-8 C22H25NO6 19 青藤碱 sinomenine 115-53-7 C19H23NO4 20 罂粟碱 papaverine 58-74-2 C20H21NO4 21 蒂巴因 thebaine 115-37-7 C19H21NO3 GA/T 8 附 录 B （资料 性 ） 21 种 生物 碱的 相关 质谱 参 数 B.1 21 种 生物 碱 液 相色 谱-三 重四 极 杆 串联 质谱 的 监测离 子对 、去 簇电 压和 碰撞能 量见

26、 表 B.1。 表B.1 21 种生 物碱 液相 色谱- 三重 四极 杆串 联 质 谱 的监测 离子 对、 去簇 电压 和碰撞 能量 编号 名称 母离子 m/z 子离子 m/z 去簇电压 V 碰撞能量 eV 1 乌头碱 646.4 586.1 526.2 100 100 51 45 2 新（中）乌头碱 632.3 572.2 354.2 130 130 47 47 3 次乌头碱 616.4 556.2 524.2 100 100 49 44 4 滇乌头碱 660.3 600.3 568.3 60 60 46 51 5 马钱子碱 395.1 324.0 244.0 80 80 50 42 6 士

27、的宁 335.1 156.0 184.0 80 80 60 50 7 雪上一枝蒿甲素 344.2 58.1 235.2 80 80 69 49 8 雪上一枝蒿乙素 438.3 388.3 420.3 110 110 40 45 9 山莨菪碱 306.2 140.1 122.1 50 100 34 38 10 东莨菪碱 304.2 138.1 156.1 60 100 30 23 11 钩吻素子 307.3 167.1 180.1 48 48 61 55 12 钩吻素已 327.0 296.2 265.2 24 24 25 38 13 钩吻素甲 323.2 236.1 70.1 45 45 37

28、 58 14 雷公藤 吉碱 858.2 206.0 178.1 50 50 60 51 GA/T 9 表B.1 21 种生 物碱 串联 质谱的 监测 离子 对、 去簇 电压和 碰撞 能量 （续 ） 编号 名称 母离子 m/z 子离子 m/z 去簇电压 V 碰撞能量 eV 15 雷公藤定碱 884.2 856.2 176.0 44 44 50 31 16 毒扁豆碱 276.3 162.1 219.1 24 24 15 30 17 阿托品 290.1 124.1 93.1 70 90 32 45 18 秋水仙碱 400.2 358.2 310.2 37 100 28 37 19 青藤碱 330.1

29、 239.0 181.1 70 70 45 36 20 罂粟碱 340.2 202.2 171.0 97 100 38 52 21 蒂巴因 312.2 58.2 251.1 70 100 38 38 B.2 21 种 生物 碱高 分辨 质谱的 精确 质量 和归 一化 碰撞能 量见 表 B.2。 表 B.2 21 种生 物碱 高分 辨 质谱的 精确 质量 和归 一化 碰撞能 量 编号 名称 分子式 归一化 碰撞能量 一级精确质量 m/z 二级精确质量 m/z 1 乌头碱 C34H47NO11 40 646.3222 586.3011 、368.1856 2 新（中）乌头碱 C33H45NO11

30、40 632.3065 572.2854 、 354.1700 3 次乌头碱 C33H45NO10 35 616.3116 524.2643 、556.2905 4 滇乌头碱 C35H49NO11 36 660.3378 600.3167 、568.2905 5 马钱子碱 C23H26N2O4 55 395.1965 324.1230 、244.0968 6 士的宁 C21H22N2O2 70 335.1754 184.0757 、156.0808 7 雪上一枝蒿甲素 C22H33NO2 70 344.2584 235.1481 、 58.0651 8 雪上一枝蒿乙素 C24H39NO6 50

31、 438.2850 420.2745 、388.2482 9 山莨菪碱 C17H23NO4 40 306.1700 140.1070 、122.0964 10 东莨菪碱 C17H21NO4 35 304.1543 138.0913 、156.1019 GA/T 10 图 B.2 21 种生 物碱 高分 辨质谱 的精 确质 量和 归一 化碰撞 能量 （续 ） 编号 名称 分子式 归一化 碰撞能 量 一级精确质量 m/z 二级精确质量 m/z 11 钩吻素子 C20H22N2O 65 307.1805 180.0808 、167.0730 12 钩吻素已 C19H22N2O3 30 327.170

32、3 296.1519 、265.1335 13 钩吻素甲 C20H22N2O2 50 323.1754 236.1070 、70.0651 14 雷公藤吉碱 C41H47NO19 22 858.2815 206.0812 、686.2435 15 雷公藤定碱 C43H49NO19 17 884.2972 856.3022 、194.0812 674.2413 16 毒扁豆碱 C15H21N3O2 10 276.1707 219.1128 、162.0913 17 阿托品 C17H23NO3 45 290.1751 93.0699 、124.1121 18 秋水仙碱 C22H25NO6 40 4

33、00.1755 358.1649 、310.1200 19 青藤碱 C19H23NO4 50 330.1700 239.0703 、181.0648 20 罂粟碱 C20H21NO4 42 340.1543 202.0863 、324.1230 21 蒂巴因 C19H21NO3 20 312.1594 249.0910 、266.0938 GA/T 11 附 录 C （资料 性 ） 21 种 生物 碱 的 液相 色谱- 三重四 极杆 串联 质谱 提取 离子色 谱图 21 种 生物 碱 的 液相 色谱- 三 重四极 杆 串 联质 谱提 取离 子色谱 图见图 C.1 图 C.21 。 图 C.1

34、乌 头碱 的提 取离 子 色谱图 图 C.2 新 乌头 碱 的 提取 离 子色谱 图 图 C.3 次 新乌 头碱 的提 取 离子色 谱 图 GA/T 12 图 C.4 滇 新乌 头碱 的提 取 离子色 谱图 图 C.5 马 钱子 碱 的 提取 离 子色谱 图 图 C.6 士 的宁 的提 取离 子 色谱图 图 C.7 雪 上一 支蒿 甲素 的 提取离 子色 谱图 GA/T 13 图 C.8 雪 上一 支蒿 乙 素 的 提取离 子色 谱图 图 C.9 山 莨菪 碱 的 提取 离 子色谱 图 图 C.10 东莨 菪碱 的提 取离 子色谱 图 图 C.11 钩吻 素子 的提 取离 子 色谱 图 GA/

35、T 14 图 C.12 钩吻 素乙 的提 取离 子色谱 图 图 C.13 钩吻 素甲 的提 取离 子色谱 图 图 C.14 雷公 藤吉 碱 的 提取 离子色 谱图 图 C.15 雷公 藤定 碱 的 提取 离子色 谱图 GA/T 15 图 C.16 毒扁 豆碱 的提 取离 子色谱 图 图 C.17 阿托 品 的 提取 离子 色谱图 图 C.18 秋水 仙碱 的提 取离 子色谱 图 图 C.19 青藤 碱 的 提取 离子 色谱图 GA/T 16 图C.20 罂 粟碱 的提 取离 子色谱 图 图 C.21 蒂巴 因 的 提取 离子 色谱图 GA/T 17 附 录 D （资料 性 ） 保留时 间 和

36、检出 限 D.1 采用 液相 色谱- 三重 四极 杆 串联 质谱 法时 ，21 种生物 碱的 保留 时间 和检 出限见 表 D.1 。 表D.1 21 种生 物碱 的 液 相 色谱- 三重 四极 杆串 联质 谱 法保留 时间 和检 出限 编号 名称 保留 时间 min 液液萃取（ng/mL ） 蛋白沉淀（ng/mL ） 固相萃取（ng/mL ） 血 尿 肝 血 尿 肝 血 尿 肝 1 乌头碱 5.21 1 1 2 10 10 10 2 2 2 2 新（中）乌头碱 4.83 1 1 2 5 5 10 5 5 5 3 次乌头碱 5.21 1 1 1 5 5 5 1 1 2 4 滇乌头碱 5.19

37、1 1 2 2 2 5 1 1 1 5 马钱子碱 2.65 2 20 20 5 20 20 5 10 50 6 士的宁 2.67 1 5 20 2 10 20 5 10 20 7 雪上一枝蒿甲素 2.21 5 50 20 20 50 50 5 20 50 8 雪上一枝蒿乙素 2.59 5 50 10 10 20 20 5 10 50 9 山莨菪碱 2.25 2.45 10 50 50 20 100 100 5 50 50 10 东莨菪碱 2.39 1 10 10 5 10 20 2 5 50 11 钩吻素子 2.82 1 10 10 2 10 20 2 10 10 12 钩吻素已 3.21 1

38、 2 5 5 5 10 2 2 5 13 钩吻素甲 2.42 1 5 10 2 10 20 1 5 20 14 雷公藤吉碱 6.80 1 1 5 5 5 10 2 2 5 15 雷公藤定碱 6.72 1 2 2 2 2 5 2 2 10 16 毒扁豆碱 2.54 1 1 5 2 5 10 5 10 10 17 阿托品 2.85 2 5 20 5 5 10 1 5 5 18 秋水仙碱 4.01 1 2 10 2 10 20 2 5 20 19 青藤碱 2.24 10 50 50 50 100 100 5 50 50 20 罂粟碱 3.73 1 2 5 2 5 10 1 5 50 21 蒂巴因 3

39、36 1 5 10 5 10 10 5 20 50 GA/T 18 D.2 采用 液相 色谱- 高分 辨质谱 法时 ，21 种 生物 碱 的保留 时间 和检 出限 见 表 D.2 。 表D.2 21 种生 物碱 的液 相 色谱- 高分 辨质 谱 法 保留 时 间 和检 出限 编号 名称 保留 时间 min 液液萃取（ng/mL ） 蛋白沉淀（ng/mL ） 固相萃取（ng/mL ） 血 尿 肝 血 尿 肝 血 尿 肝 1 乌头碱 7.14 2 2 5 5 10 10 2 10 20 2 新（中）乌头碱 6.66 2 10 5 5 10 10 5 5 10 3 次乌头碱 7.19 2 5 5

40、5 10 10 2 5 10 4 滇乌头碱 7.08 2 2 5 5 10 5 2 5 10 5 马钱子碱 3.84 2 5 5 5 10 10 2 10 20 6 士的宁 3.82 2 5 5 5 10 10 2 5 20 7 雪上一枝蒿甲素 3.13 10 50 10 20 50 50 5 20 20 8 雪上一枝蒿乙素 3.79 2 20 5 5 20 20 10 20 50 9 山莨菪碱 3.13 3.46 20 50 20 20 20 20 5 20 20 10 东莨菪碱 3.37 2 5 5 5 10 10 2 5 20 11 钩吻素子 4.04 5 5 5 5 10 10 2 5

41、 10 12 钩吻素已 4.59 1 1 1 1 2 2 2 2 2 13 钩吻素甲 3.43 5 2 2 5 10 5 2 2 2 14 雷公藤吉碱 8.02 5 2 2 5 10 5 2 2 5 15 雷公藤定碱 7.95 10 5 20 20 50 50 5 5 50 16 毒扁豆碱 3.66 5 2 10 5 10 5 2 5 50 17 阿托品 4.07 2 5 10 5 5 5 2 5 20 18 秋水仙碱 5.20 5 10 10 10 20 20 5 20 20 19 青藤碱 3.15 5 10 10 10 20 20 10 10 20 20 罂粟碱 5.25 1 1 5 5 5 5 1 2 5 21 蒂巴因 4.76 2 20 20 10 50 50 5 20 20 _