GA T 1916-2021 法庭科学 生物检材中氟乙酸根离子检验 液相色谱-质谱法.pdf

1、 HHP ICS 13.310 CCS A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材 中氟乙酸 根离子检 验 液 相色 谱- 质 谱法 Forensic sciences Examination methods for fluoroacetate ions in biological samples LC-MS - 发布 - - 实施 中华人民 共和国 公安部 发 布 GA/T I 前 言 本文件 按 照 GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第 1 部分： 标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定 起草。 请 注

2、意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本文件 由全 国刑 事技 术标 准化技 术委 员会 毒物 分析 分技术 委员 会 （SAC/TC 179/SC 1 ） 提 出并 归口 。 本文件 起草 单位： 广东 省公 安厅刑 事技 术中 心、 公 安部 物证鉴 定中 心、 福 建省 公安 厅刑事 技术 总队 、 黑龙江 省公 安厅 刑事 技术 总队 、 广 州市 公安 局刑 事 技术所 、 济南 市公 安局 刑 警支队 刑科 所 、 济 宁市 公 安 局刑事 科学 技术 研究 所、 中国刑 事警 察学 院 。 本文件 主要 起草 人：

3、 张亮 、 裴茂 清、 冷泠 、 施 文兵 、 胡浩 浪、 王宾 、 徐 若沦 、 黄健 、 李 航麒 、 叶 树 海、王 涛、 孙立 敏、 赵绪 龙、杨 崇俊 、朱 昱 。 GA/T 1 法庭科学 生 物检 材中氟乙 酸根离 子检验 液相 色谱- 质谱法 1 范围 本文件 规定 了法 庭科 学生 物检材 （ 血 液、 尿液、 肝脏 ） 中氟 乙酸 根离 子 的 液相 色谱- 质 谱 （LC-MS ） 定性定 量分 析方 法 。 本文件 适用 于 法 庭科 学生 物检材 （血 液、 尿液 、 肝 脏 ） 中 氟乙 酸根 离子 的定 性定量 分析 。 其 他检材 可参照 使用 。 2 规范 性引

4、 用文 件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 GB/T 6682 分析 实验室 用 水规格 和试 验方 法 GA/T 122 毒 物分 析名 词术 语 3 术语 和定 义 GA/T 122 界 定的 术语 和定 义适用 于本 文件 。 4 原理 以空白 样品 和添 加样 品作 对照， 按平 行操 作的 要求 ， 对生 物检 材进 行提 取、 净化及 浓

5、缩 ， 采 用液 相 色谱- 三 重四 极杆 串联 质谱 或液相 色谱- 高分 辨质 谱检 测 ，用 外标 法进 行定 量。 5 试剂 和材 料 5.1 试剂 实验用 水应 符 合 GB/T 6682 中规 定的 一级 水。 除 非另 有说明 ， 在 分析 中使 用的 试剂均 色谱 纯， 试剂 包括： a) 乙腈； b) 甲醇； c) 浓氨水 ； d) 乙酸铵 ； e) 10mmol/L 乙 酸铵 溶液 ：称 取 乙酸铵 0.77g ，加 水溶 解 稀释 至 1000mL ，用 氨水 调 pH 至 8 ； f) 标准溶 液 ： 1) 1.0mg/mL 标准 物质 储备 溶 液：根 据氟 乙酸

6、钠标 准物 质的纯 度和 盐型 换算 后， 称 取适 量 ， 用甲醇 配制 成氟 乙酸 根离 子标准 物质 储备 溶液 ， 密 封，-18 以下 保存 ，有 效期 12 个月； 2) 标准物 质工作 溶 液： 移 取 1.0mg/mL 标准 物质 储备 溶 液，用 乙腈 配制 成浓 度 为 1.0g/mL 的标准 物质 工作 溶液 ，密 封，0 4 保存 ，有效期 3 个月 。 实验 中所 用其 他浓度 的标 准 物质工 作溶 液均 由 1.0mg/mL 标 准物 质储 备溶 液配 制 得到。 GA/T 2 5.2 材料 材料包 括 ： a) 具盖离 心管 ； b) 微孔滤 膜：0.22 m

7、或 0.45m 。 6 仪器 和设 备 仪器和 设备 包括 ： a) 液相色 谱- 三重 四极 杆串 联 质谱仪 ：配 有电 喷雾 离子 源 ； b) 液相色 谱- 高分 辨 质 谱仪 ： 配有电 喷雾 离子 源 ； c) 离心机 ； d) 涡旋混 合器 ； e) 移液器 ； f) 电子天 平 ： 定性 检验 实际 分度 值 d0.1mg ， 定量 检 验实际 分度 值 d0.01mg 。 7 操作 方法 7.1 定 性分 析 7.1.1 样品 前处 理 7.1.1.1 蛋 白沉 淀 移取血 液等 液体 检材 样 品 0.2mL ，或 称取 铰碎 的肝 脏 等固体 检材 样 品 0.2g 于

8、具 盖离心 管中 ，加入 乙腈 0.4mL ， 振荡 1min ， 不低于 3000r/min 离心 3min ，取上 清液 ， 经 微孔 滤 膜过滤 ，作 为检 材样 品提 取液， 供仪 器检 测。 必要 时可将 滤液 用初 始流 动相 稀释或 挥干 后用 初始 流动 相溶解 。 注： 检材样品取样量和乙腈体积可根据实际情况调整。 7.1.1.2 质控 样 品制 备 取等量 相似 基质 的空 白样 品 （ 若无 相似 基质 空白 样 品可用 血液 替代 ） 两份 于 具盖离 心管 中 ， 一 份作 为空白 样品 ， 一份 添加 标 准物质 工作 溶液 ， 使氟 乙 酸根离 子浓度为 35.0

9、ng/mL(g) ， 作 为添 加样 品 ， 与检 材样品 平行 操作 ，得 到空 白样品 提取 液和 添加 样品 提取液 ，供 仪器 检测 。 7.1.2 仪器 检测 7.1.2.1 仪 器条 件 以下为 参考 条件 ，可 根据 不同品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 ： a) 色谱柱 ：PFP （3.0mm 100mm ，2.7m ） 色谱 柱 或 其 他等效 柱； 注：PFP 色谱柱是安捷伦 公司 产品的商品名称， 给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不是表示对该产品的 认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱温：40 ； c) 流动

10、 相 A ：10mmol/L 乙酸铵 溶液 （pH 值 8） ； d) 流动 相 B ：乙 腈 ； e) 流速：0.3mL/min ； f) 洗脱： 梯度 洗脱 ，梯 度洗 脱条件 见 表 1； GA/T 3 表1 梯 度洗 脱条 件 时间 min 流动相A 流动相B 0 2% 98% 2 2% 98% 2.1 5% 95% 6 5% 95% 6.1 50% 50% 8 90% 10% 8.1 2% 98% 11 2% 98% g) 流速：0.3mL/min ； h) 离子源 ：电 喷雾 离子 源； i) 检测模 式： 负离 子模 式； j) 四极杆 串接 飞行 时间 质谱 （高分 辨） 参数

11、 ： 1) 干燥气 温度 ：200 ； 2) 干燥气 流速 ：8L/min ； 3) 雾化气 压力 ：35psi ； 4) 鞘气温 度：300 ； 5) 鞘气流 速：8L/min ； 6) 毛细管 电压 ：3000V ； 7) 喷嘴电 压：500V ； 8) 毛细管 出口 电压 ：100V ； 9) 锥孔电 压：65V ； 10) 八极杆 射频 电压 ：750V ； 11) 二级碰 撞电 压 ：5V ； 12) 一级质 谱特 征离 子 ：m/z 77.0044 * ；二 级 质 谱特 征离 子 ：m/z 33.0146 、m/z 56.9982 ； 注：* 表示定量离子 。 k) 三重四 极杆

12、 质谱 （低 分辨 ）参数 ： 1) 喷雾电 压：3000V ； 2) 鞘气：45Arb ； 3) 辅助气 ：10Arb ； 4) 离子传 输管 温度 ：250 ； 5) 雾化器 温度 ：250 ； 6) 扫描模 式：MRM ； 7) 二级碰 撞电 压 ：5V ； 8）一 级 质 谱特 征离 子 ：m/z 77； 二级 质谱 特征 离子 ：m/z 33、m/z 57 * ； 注：* 表示定量离子 。 7.1.2.2 进样 分别吸 取 空 白溶 剂、 添加 样品 提 取液 、 空 白样 品 提 取液 、 检材 样品 提取 液 、 标准物 质工 作溶 液， 按 7.1.2.1 仪器 条件 进行 检

13、测 。进样 顺序 和进 样次 数应 确保结 果有 效。 GA/T 4 7.2 定 量分 析 7.2.1 样品 前处 理 移取血液等液体 检材样 品0.2mL 两份，或称取铰 碎的 肝脏等固体 检材样品0.2g 两份 ，按7.1.1进行 操 作，得到 检材 样 品提 取液 ，供仪 器检 测 。 取与检 材样 品等 量的 相似 基质空 白样 品， 与 检材 样品 平行操 作， 得 到空 白样 品提 取液 ， 供 仪器 检测 。 取与检 材样 品等 量的 相似 基质空 白样 品 两 份， 添加 氟 乙酸根 离子 标准 物质 工作 溶液 ， 作为 添加 样品 ， 与检材 样品 平行 操作 ， 得 到添

14、加 样品 提取 液 ， 供 仪 器检测 。 添加 样品 中目 标 物含量 应 在 检材 样品 中目 标 物含量 的（100 50 ）% 范 围内 。 7.2.2 仪器 检测 7.2.2.1 仪 器条 件 同 7.1.2.1 。 7.2.2.2 进样 分别吸 取检 材样 品提 取液 、 空白 样品提 取液 、 添加 样品提 取液，按7.1.2.1 仪 器条件 进样 分析 。 每份 检材样 品提 取液 和添 加样 品提取 液各 进样 分析23 次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计 算含 量 记录检 材样 品提 取液 和添 加样品 提取 液中 目标 物的 保留时 间和 峰面 积值 ，按 公式（

15、1） 计算 检材 样 品中目 标物 的含量 。 = A A . (1) 式中： 检 材样 品中 目标 物的 含量； A 检材 样品 提取液 中目 标 物的峰 面积 的平 均值 ； A 添 加样 品 提 取液 中目 标物的 峰面 积 的 平均 值 ； 添 加样 品中 目标 物的 含量。 7.2.3.2 计 算相 对相 差 记录 7.2.3.1 中 计算 得到 的 检材样 品中 目标 物的 含量 ， 按公 式(2) 计 算相 对相 差 ： 12 100% - RD = . (2) 式中： RD相 对相 差， 用百 分比 （% ） 表示 ； 1 、 2 两 份检 材样 品中 目标物 的含 量； 两份

16、 检材 样品 中目 标物 含量的 平均 值。 8 结果 评价 8.1 定 性结 果评 价 8.1.1 阳性 结果 评价 X GA/T 5 8.1.1.1 液 相色 谱- 高分 辨 质谱 在相同 条件 下进 行样 品测 定时， 检材 样品 中目 标物 的色谱 峰保 留时 间与 标准 物质工 作溶 液一 致 （ 相 对误差 在 2.5% 之 内） ， 且 样品中 目标 物前 体离 子的 质荷比 与理 论质 荷比 一致 （质 量精 度小于 1mDa）， 同时至 少 1 个二 级质 谱特 征离子 与标 准物 质工 作溶 液一致 （ 质量 精度 小于 1mDa ） ， 空 白对 照样 品无 干 扰，则

17、可判 断检 材样 品中 检出目 标物 。 8.1.1.2 液 相色 谱- 三重 四 极 杆串 联质谱 在相同 条件 下进 行样 品测 定时， 检材 样品 中目 标物 的色谱 峰保 留时 间与 标准 物质工 作溶 液一 致 （ 相 对误差 在 2.5% 之 内） ， 目 标物的 定性 离子 对与 标准 物质工 作溶 液一 致， 且 离 子对丰 度比 与浓 度接 近 的 标准物 质工 作溶 液相比， 相对偏 差不 超过 表 2 规定 的范围 ， 空白 样品 无干 扰 ， 则可判 断检 材样 品中 检出 目标物 。 表 2 离 子对 丰度 比的 最大 允许相对 偏 差范 围 离子对丰度比 50% 2

18、050 1020 10% 最大允许相对偏差 20 25 30% 50% 8.1.2 阴性 结果 评价 检材样 品未 出现 与目 标物 标准物 质工 作溶 液一 致的 色谱峰 ， 且 添加 样品 中出 现 与目标 物标 准物 质 工 作溶液 一致 的色 谱峰 ，空 白样品 无干 扰， 则可 判断 检材样 品中 未检 出目 标物 。 8.2 定 量结 果评 价 检材样 品中 目标 物含 量 的 RD20% ， 定 量数 据可 靠， 其含量 按 两 份检 材的 平均 值计算 。 检材 样品 中 目标物 含量 的 RD 20% ， 定量数 据不 可靠 ，应按 7.2 重新 提取 检验 。 相关实 验数

19、 据及 谱图 参见 附录 A 。 GA/T 6 附录 A （资料 性 ） 氟乙酸 根离 子相 关资 料及 相关谱 图 A.1 氟 乙酸 根离 子的 相关 资料 氟乙酰 胺类 杀鼠 药主 要包 括氟乙 酰胺 、 氟 乙酸 钠、 氟乙酸 等， 这类 鼠药 被代 谢后， 在体 内以 氟乙 酸 根离子 的形 式存 在， 因此 在检验 此类 鼠药 时， 主要 检验氟 乙酸 根阴 离子 。 A.2 氟 乙酸 根离 子的 相关 谱图 氟乙酸 根 的 Q-TOF 离 子流 图见 图 A.1 ， 质谱 图见 图 A.2 。 图A.1 氟乙 酸 根 的 Q-TOF 离子流 图 图A.2 氟乙 酸 根 的 Q-TOF 质谱图 氟乙酸 根的 三重 四极 杆 离 子流图 见图 A.3 ， 质谱 图 见图 A.4 。 图 A.3 氟乙 酸根 的三 重四 极杆离 子流 图 GA/T 7 图A.4 氟乙 酸根 的 三 重四 极 杆质 谱图 A.3 检 出限 LC-MS 分 析， 血液 、尿 液 、肝脏 中氟 乙酸 根离 子的 检出限 为 35.0ng/g （mL）。 _