DB34 T 1363-2022 饲料中喹烯酮的测定 高效液相色谱法.pdf

1、 ICS 65.120 CCS B 46 34 安徽省地方标准 DB34/T 1363 2022 代替DB34/T 1363-2011 饲料中喹 烯酮的测 定 高效 液相色谱 法 Determination of quinocetone in feed content High performance liquid chromatography method 2022-06-29 发布 2022-07-29 实施 安徽省市 场监督 管 理局 发 布 DB34/T 1363 2022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和

2、起草 规则 的 规 定起草。本文件 代替 DB34/T 1363-2011 饲料 中喹 烯酮 的测 定-高 效液 相色 谱法，除 编辑性 修改 外主 要技术变化 如下：a)增加方 法检 出限、定 量限；b)修改了 原理（见 第4 章）；c)修改了 试剂 和材 料内 容（见第 5 章）；d)增加了 仪器 设备（见 第 6 章）；e)更改了 样品 制备（见 第 7 章）；f)修改“色谱 条件”（见 第 8 章）；g)修改了 结果 计算 与表 述（见第 8.4 章）。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本 文件 由安 徽省 兽药 饲料

3、 监察所 提出。本文件 由安 徽省 农业 农村 厅归口。本文件 起草 单位：安徽 省 兽药饲 料监 察所、安徽 华 测检测 技术 有限 公司、阜 阳市农 业综 合行 政执 法监督支 队、萧县 畜牧 兽医 水产服 务中 心、岳西 县农 业 农村 局、淮北 市畜 牧中 心，安 徽农 业大 学、安 徽 省农业科 学院 畜牧 兽医 研究 所。本文件 起草 人：刘发 全、谢军池、纵 丰学、朱 明齐、王文 风、袁琪、束 玲玲、许晓 靖、李佳 庆、吴敏、吴 昊、许世 富、邵颖、潘孝 成、宋亚 伟。2011 年首 次发 布为 DB34/T 1363-2011，2022 年第 一次修 订。DB34/T 1363

4、 2022 1 饲料中喹 烯酮的 测定 高效液相 色谱法 1 范围 本文件 规定 了饲 料中 喹烯 酮含量 的高 效液 相色 谱测 定 方法。本文件 适用 于配 合饲 料、浓缩饲 料和 预混 合饲 料中 喹烯酮 含量 的测 定。本方法 检出 限为 0.5 mg/kg，定 量限 为 1.0 mg/kg。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 6682 分

5、 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GB/T 20195 动 物饲 料 试 样的制 备 3 术语和 定义 本文件 没有 需要 界定 的术 语和定 义。4 原理 试样中 的喹 烯酮 用 乙 腈甲 醇磷酸 溶液 超声 提取，经 离心、过滤 后，高效 液相 色谱分 离，紫外 检测 器测定，外标 法定 量。5 试剂和 材料 除特殊 说明 外，本方 法所 用试剂 均为 分析 纯，水为 符合 GB/T 6682 规 定的 一 级水。甲醇：色谱 纯。乙腈：色谱 纯。二甲基 甲酰 胺。磷酸。0.025 mol/L 磷 酸溶 液：称取 85 的磷 酸（5.5）2.88 g，加水 稀释 至 1000 mL。

6、流动相：乙 腈-甲醇-（0.025 mol/L）磷酸 溶液，按 体积比 25：20：55（v/v）。标准品：喹 烯酮 标准 品（CAS 号：81810-66-4），纯度 98.0。喹烯酮 标准 溶液 的制 备 如 下：a)标准溶 液储备液（0.5 mg/mL）：取喹 烯酮 标准 品 50 mg，精 密称定，用 10 mL 二甲基 甲酰 胺溶解后，加 入甲 醇定 容至 100 mL 棕色 容量 瓶，配制 成浓度 为 0.5 mg/mL 的标 准储备 液，于4冰 箱中 保存，有 效期 二个 月。DB34/T 1363 2022 2 b)标准工 作溶 液：分别 吸取 储备液（5.9-a）1 mL、2

7、 mL、5 mL、10 mL、20 mL 于 100 mL 棕色容量 瓶，用流 动相 溶液（5.7）定 容，标准 工作 溶 液系列 浓度 分别 为 5 g/mL、10 g/mL、25 g/mL、50 g/mL、100 g/mL。6 仪器和 设备 高效液 相色 谱 仪：配 紫外 检测器。分析天 平：感量 0.1 g、0.1 mg、0.01 mg。离心机：8000 r/min。超声波 仪。分析筛：孔 径 0.42 mm。粉碎机。微孔滤 膜：孔径 0.45 m 有机滤 膜。7 试样的 制备 按GB/T 20195 的 规定 制备，磨碎，全 部通 过分 析筛（6.5），混匀，装 入磨 口 瓶中备 用。

8、8 分析步 骤 试样的 提取 称取试 样适 量（配合 饲料 5.0 g、浓 缩饲 料 3.0 g、预混 合饲 料 1.0 g），精确至 0.1 g，置 于100 mL 具塞 锥形 瓶中，准 确加入 流动 相 50 mL，超 声提取 30 min，移取 10 mL 至离 心管，以 8000 r/min 离心 10 min，取 离心上 清液 过 0.45 m 有机滤 膜，滤液 供高 效液 相色谱 仪测 定，同时 进行 平行试验。参考色 谱条 件 色谱柱：色 谱柱：C18 柱（250 mm 4.6 mm，5 m）或相当 者；检测波 长：260 nm；流动相：乙 腈-甲醇-（0.025 mol/L）磷

9、酸 溶液，按 体积比 25：20：55（v/v）；流速：1.0 mL/min；柱温：25；进样体 积：10 L。测定 喹烯酮 标准 工作 溶液 和试 样溶 液 分别 进样，得到 色谱 峰面积 响应 值，在 线性 范围 内，用外 标法 测定，以保留 时间 定性，峰 面积 定量。喹烯 酮标 准工 作溶 液色谱 图 参 见附 录A 中图A.1。结果的 计算 与表 述 8.4.1 计算公 式 结果按 式（1）计算：式中：DB34/T 1363 2022 3=1000 1000(1)式中：X 试 样中 喹烯 酮含 量，单位 为毫 克每 千克（mg/kg）；C 试 液色 谱峰 对应 的 喹烯酮 浓度，单 位为 微克 每毫升（g/mL）；m 试 样质 量，单位 为 克（g）；f 稀 释倍 数。8.4.2 结果表 示 测定结 果用 两次 平行 测定 的算术 平均 值表 示，测定 结果保 留三 位有 效数 字。9 精密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的 10。DB34/T 1363 2022 4 附录A（资料 性）喹烯酮 标准 溶液 的图 谱 图谱见图A.1。图A.1 喹 烯酮 标准 溶液（10 g/mL）色 谱图 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 mAU 0 10 20 30 40 50 60 70 4.815-QXT