DB34 T 4205-2022 禽蛋中9种禁用药物的残留量检测 高效液相色谱-串联质谱法.pdf

1、 ICS 67.120.20 CCS X 18 34 安徽省地方标准 DB34/T 4205 2022 禽蛋中 9 种禁用药 物的残留 量检测 高效液相 色谱-串联 质谱法 Determination of 9 banned drugs residues in poultry eggs by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method 2022-06-29 发布 2022-07-29 实施 安徽省市场 监督 管 理局 发 布 DB34/T 4205 2022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.

2、1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由 安 徽省 兽药 饲料 监察所 提出。本文件 由 安 徽省 农业 农村 厅 归口。本文件 起草 单位：安徽 省 兽药饲 料监 察所、安徽 华 测检测 技术 有限 公司、安 徽省公 众检 验研 究院 有限公司、望 江县 畜牧 兽医 技术推 广中 心、安徽 省畜 牧兽医 技术 推广 总站、安 徽农业 大学、安 徽省 农 业 科学院畜 牧兽 医研 究所、宣 城市宣 州区 市场 监督 管理

3、局、安徽 银源 禽业 发展 有 限公司、望江 县农 产品 质 量安全中 心。本文件 主要 起草 人：汤春 莲、李 珲、李伟、李 平松、蔡一 杰、张莉、王 雨霜、陈文 帮、王希 春、吴昊、许 世富、詹凯、吴敏、李佳 庆、操 军、吴蕾、刘红云、宋亚 伟、刘舜舜、冯成、郝金 华、宋祥军、赵瑞宏、刘 发全。DB34/T 4205 2022 1 禽蛋中9 种禁用 药物的残 留量检 测 高效液相 色谱-串 联质谱法 1 范围 本 文件 规定了 禽蛋 中甲硝 唑、金 刚烷胺、诺 氟沙星、氧氟 沙星、培氟 沙星、恩诺沙 星、强 力霉 素、氟苯尼 考、氯霉 素残 留量的 高效 液相 色谱-串 联质 谱 法检测

4、方法。本 文件 适用于 禽蛋 中 甲硝 唑、金 刚烷胺、诺 氟沙星、氧氟 沙星、培氟 沙星、恩诺沙 星、强 力霉 素、氟苯尼 考、氯霉 素 残 留量 的 检测。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 3 术语和 定义 本文件 没有 需要 界定 的术 语和定 义。4 原理 试样经 80%乙 腈水 溶液

5、 提 取，固 相萃 取净 化、洗脱，高效液 相色 谱-串联 质谱 法 进行分 析，外标 法定量。5 试剂和 材料 试剂 除 非另 有说 明，本法 所用试 剂均 为分 析纯，水 为符合 GB/T 6682 规定 的 一级水 的要求。甲醇，色谱 纯。乙腈，色谱 纯。乙酸铵，色 谱纯。溶液配 制如下：10%甲 醇溶 液：取甲 醇 100 mL，加水 定容 至 1000 mL，混 匀；80%乙 腈溶 液：取乙腈 800 mL，加水 定容 至 1000 mL，混 匀；流动相 由A、B 两种 溶液 按 比例随 时间 梯度 混合 而成：A：5 mmol/L 乙酸 铵溶 液（称取 0.385 g乙 酸铵，用

6、水 溶解后 定容 至 1000 mL 混 匀，过 滤）；B：乙 腈。标准物 质如下：甲硝唑 标准 品（CAS 号：443-48-1），纯度 99.9%；金刚烷 胺 标 准品（CAS 号：768-94-5），纯度 97.5%；DB34/T 4205 2022 2 诺氟沙 星 标 准品（CAS 号：70458-96-7），纯度 97.2%；氧氟沙 星 标 准品（CAS 号：82419-36-1），纯度 95.7%；培氟沙 星 标 准品（CAS 号：70458-96-6），纯度 92.1%；恩诺沙 星 标 准品（CAS 号：93106-60-6），纯度 99.9%；强力霉 素 标 准品（CAS 号：

7、24390-14-5），纯度 98.7%；氟苯尼 考 标 准品（CAS 号：73231-34-2），纯度 99.9%；氯霉素 标准 品（CAS 号：56-75-7），纯度 99.2%。标准储 备液：准 确称 取 25 mg 甲硝 唑、金刚 烷胺、强力霉 素、诺氟 沙星、氧 氟沙星、培 氟沙 星、恩诺沙 星、氟苯 尼考、氯 霉素标 准品，分 别置 于 25 mL 容量 瓶中，用 甲醇溶 解并定 容，充分 摇匀，制得 1 mg/mL 的 标准 储备 溶液，密 封，-18 保 存，有效期 6 个月。混合标 准液（10 g/mL）：精确 量取 9 种标 准储 备 液，各 0.1 mL 于 10 mL

8、容量瓶 中，用甲 醇定容，制得 10 g/mL 的 混合标 准溶液，密封，-18 保 存，有效 期 3 个月。混合标 准工 作液：取 混合 标准储 备液（10 g/mL）适量，用 10%的 甲醇 水溶 液稀释，得 到浓 度为 1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL 的系 列 混合标 准工 作液，4 保存，有效 期 1 周。6 仪器和 设备 如下：高效液 相色 谱-串联 质谱 仪（配电 喷雾 离子 源）；高速冷 冻离 心机：16000 r/min；氮 吹仪；涡旋混 合仪；PRiME HLB 固相 萃取 柱：60 mg，3 mL，或

9、相 当 者；分析天 平：感量 0.1 g、0.1 mg、0.01 mg；微孔滤 膜：0.22 m 无机 滤膜。7 试样的 制备 将禽蛋 去壳 后混 合均 匀，-18 保存 备用，3 个月 内进行 分析 测试。8 测定步骤 提取 称取试 料 2 g（精 确至 0.1 g）置于 50 mL 离 心管 内，加入 80%乙腈 水溶 液 8.0 mL，涡旋 1 min，高速振 荡提 取 5 min，10000 r/min离心 10 min，取上 清液 用于 固相 萃取 柱净化。取 4.0 mL 上清 液到PRiME HLB 固 相萃 取柱 中，保持 一秒 一滴 的流 速，收集全 部流 出液。于 45 水

10、浴 中用 氮气 吹干，用 10%甲醇 水溶 液 1.0 mL 溶解，涡旋 混匀，经 0.22 m微 孔滤 膜过 滤后 供 高 效 液相色 谱-串联 质谱 仪测定。色谱条 件 如下：DB34/T 4205 2022 3 色谱柱：C18 色谱 柱（2.1 mm 50 mm，1.8 m），或相当 者；流动相：A（5 mmol/L 乙 酸铵溶 液）、B（乙腈），采用梯 度洗 脱见 表1；流速：0.3 mL/min；进样量：5 L；柱温：30。表1 梯度洗脱程序 时间（min）流动 相A（%）流动 相B（%）0 90 10 2 90 10 8 30 70 8.01 90 10 10 90 10 质谱系

11、统条 件 如下：离子源：电 喷雾 离子 源（ESI）；电喷雾 电压（IS）：5500 V；扫描模 式：ESI+和ESI-同 时扫描；检测模 式：多反 应监 测（MRM）；雾化气 温度（Gas Temp）：300；雾化气 流量（Gas Flow）：17 L/min；鞘气温 度（Shealth Gas Temp）：300；鞘气气 流量（Shealth Gas Flow）：11 L/min；定性离 子对、定 量离 子对、裂解 电压（Fragmentor potential）和 碰撞 气能 量（CE）见 表2。表2 定性、定量离子对及 其他 参数条件 药物名称 定性、定量离子对（m/z）扫描模式 裂解

12、电压（E/V）碰撞能量（E/V）甲硝唑 172.2/127.9*ESI+380 20 172.2/82 37 金刚烷胺 152.1/135*ESI+380 25 152.1/93 38 诺氟沙星 320.1/276.1*ESI+380 26 320.1/233.1 35 氧氟沙星 362.2/318.1*ESI+380 26 362.2/261.1 38 培氟沙星 334.1/316.1*ESI+380 27 334.1/290.2 25 恩诺沙星 360.1/316.1*ESI+380 25 360.1/245.1 35 DB34/T 4205 2022 4 定性测 定 8.4.1 保留时

13、间 待测样 品中 化合 物色 谱峰 的保留 时间 与标 准溶 液相 比变化 范围 应在 2.5%之内。8.4.2 定量离 子、定性 离子 及离 子丰度 比 每种化 合物 的质 谱定 性必 须出现，至少 应包 含一 个 母离子 和两 个子 离子，而 且同一 检测 批次，对同一化合 物，样品 中目 标化 合物的 两个 子离 子的 相对 丰度比 与浓 度相 当的 标准 溶液相 比，其允 许偏 差 不 超过 表 3 规 定的 范围。表3 定性时相当离子丰度 的最 大允许偏差 相当离子丰度 50%20%50%10%20%10%允许的相对偏差 20%25%30%50%定量测 定 取试料 溶液 和空 白添

14、加溶 液，做 单点 或多 点校 准，外标法 计算，即 得。9 种 药物标 准溶 液的MRM 色谱 图见 附录A。结果的 计算 与表 述 8.6.1 结果计算 试样中 9 种药 物的 含量 利 用数据 处理 系统 计算 或按 式（1）计 算：=1 31000 2 1000(1)式中：X i 试样 中药 物含 量，单 位为微 克每 千克（g/kg）；C i 试 样色 谱峰 对应 的药 物浓度，单 位为 纳克 每毫 升（ng/mL）；M 试样 质量，单 位为 克（g）；V 1 提 取液 体积，单 位 为毫升（mL）。V 2 过 柱上 清液 体积，单位为 毫升（mL）；V 3 溶 解液 体积，单 位

15、为毫升（mL）。8.6.2 结果表 示 强力霉素 445.1/428.1*ESI+380 24 445.1/154.1 35 氟苯尼考 356.1/119*ESI-380 23 356.1/184.9 12 氯霉素 321/152.1*ESI-380 24 321/256.9 17 注：*为定量离子对。DB34/T 4205 2022 5 测定结 果保 留至 小数 点后 1 位有 效数 字。9 灵敏度、准 确度 和精 密度 灵敏度 本方法 9 种药 物的 检测 限 均为 0.1 g/kg，9 种药 物 的定量 限 均 为 0.2 g/kg。准确度 本方法 在禽 蛋中 2.0 g/kg 添加 浓

16、度 水平 上，9 种 药 物的回 收率 结果 见表 4。表4 9 种药物的 回收率 结果 化合物 加标水平/（g/kg）回收率范围/%甲硝唑 2 88.9%95.6%金刚烷胺 2 88.6%93.5%诺氟沙星 2 85.6%91.8%氧氟沙星 2 81.5%86.7%培氟沙星 2 80.3%83.8%恩诺沙星 2 81.9%85.1%强力霉素 2 77.2%81.6%氟苯尼考 2 89.6%94.6%氯霉素 2 79.5%82.4%精密度 本方法 的批 内、批间 相对 标准偏 差均 10%。DB34/T 4205 2022 6 附录A（资料 性）9 种药 物标 准溶 液的MRM 色谱图 9 种

17、药 物标 准溶 液的MRM 色谱 图见 图A.1 图A.18。图A.1 甲硝唑 定性 离子 对 标 准溶 液（20 ng/mL）的MRM 色 谱图 图A.2 甲硝唑 定量 离子 对标 准溶 液（20 ng/mL）的MRM 色 谱图 图A.3 强力霉 素 定 性离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）的MRM 色谱图 DB34/T 4205 2022 7 图A.4 强力霉 素 定 量离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）的MRM 色谱图 图A.5 氧氟沙 星 定 性离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）的MRM 色谱图 图A.6 氧氟沙 星 定 量离 子对 标准 溶 液（20 ng/mL）的

18、MRM 色谱图 DB34/T 4205 2022 8 图A.7 恩诺沙 星 定 性离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）的MRM 色谱图 图A.8 恩诺沙 星 定 量离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）的MRM 色谱图 图A.9 培氟沙 星 定 性离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）的MRM 色谱图 DB34/T 4205 2022 9 图A.10 培氟沙 星 定 量离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）的 MRM 色谱图 图A.11 诺氟沙 星 定 性离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）的 MRM 色谱图 图A.12 诺氟沙 星 定 量离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）

19、的 MRM 色谱图 DB34/T 4205 2022 10 图A.13 金刚烷 胺 定 性离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）的 MRM 色谱图 图A.14 金刚烷 胺 定 性离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）的 MRM 色谱图 图A.15 氟苯尼 考 定 性离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）的 MRM 色谱图 DB34/T 4205 2022 11 图A.16 氟苯尼 考 定 量离 子对 标准 溶液（20 ng/mL）的 MRM 色谱图 图A.17 氯霉素 定性 离子 对标 准溶 液（20 ng/mL）的MRM 色 谱图 图A.18 氯霉素 定量 离子 对标 准溶 液（20 ng/mL）的MRM 色 谱图