DB43 T 1970-2020 摇蚊实验室饲养技术规程.pdf

1、湖南省地方标准DB43湖南省市场监督管理局 发 布DB43/T170 2020 9ICS 65.020CCS B 162020-12-29发布 2021-03-29实施摇蚊实验室饲养技术规程Guideline for Laboratory feeding technology of ChironomidaeDB43/T 1970 2020 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 环境条件 1 5 培养基 2 6 饲养装置 2 7 饲养方法 2 8 饲养记录 3 附录A（资料性）Elendt M4 培养基配方 4 附录B（资料性）水

2、中饱和溶解氧计算方法 5 附录C（资料性）摇蚊发育不同时期的特征 7 DB43/T 1970 2020 II DB43/T 1970 2020 III 前 言 本文件按照GB/T 1.12020给出的规则起草。本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的起草和发布单位不承担相关责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化委员会归口。本文件起草单位：湖南省植物保护研究所，长沙艾格里生物科技有限公司。本文件主要起草人：刘勇、陈昂、张德咏、张战泓、蒋桂芳、罗杰、罗香文、陈武瑛、熊浩。DB43/T 1970 2020 IV DB43/T 1970 2020 1 摇蚊实验 室饲养 技术规程 1

3、 范围 本文件规定了摇蚊实验室饲养及繁殖的环境条件、培养基、饲养装置、饲养方法等技术要求。本文件适用于湖南省摇蚊的实验室饲养与繁殖。2 规 范性 引用 文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。3 术 语和 定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 卵 摇蚊成虫产的受精卵。3.2 卵块 摇蚊产出的卵团，由卵螺旋规则排列形成的胶质圆柱块体。3.3 蛹 从幼虫变态发育成成虫的过渡形态的摇蚊。3.4 成虫 完成变态发育、已羽化、性成熟的摇蚊。4 环 境条

4、 件 4.1 光照 光照/黑暗时间为14 h/10 h，光照强度800 Lux-1300 Lux。4.2 温度 摇蚊饲养与孵化的水温控制在 20-25。4.3 湿度 DB43/T 1970 2020 2 湿度保持在60以上。5 培 养基 使用存放并曝气处理24 h以上的曝气水或人工培养基（M4，配方见附录A），培养水 pH值为6.58.0，溶解氧含量不低于空气饱和值（附录 B）的 60，水质硬度（以 CaCO3计）范围为 10 mg/L 250 mg/L。6 饲 养装 置 6.1 组成 摇蚊饲养装置由养虫笼、培养容器、喂食盘、照明系统、曝气系统组成。养虫室应密闭，避免外界阳光、蚊虫、天敌进入，

5、并配备加湿器、空调、温湿度计、照度计等。6.2 养虫 笼 可拆式养虫笼，尺寸为 50 cm50 cm50 cm，铝合金管可拆卸框架，80 目涤纶透明纱网笼子，一面具拱形拉链门及袖筒式小门。6.3 培养 容器 直径180 mm的结晶皿，皿内平铺一层约 3 cm厚的粗石英砂（粒径 5 mm），加入培养水至结晶皿上缘。结晶皿上应有标示卡，记录该摇蚊的中文名、拉丁名、卵产出的日期等信息。6.4 喂食 盘 直径为90 mm的培养皿，往培养皿中放置沾满蔗糖水的脱脂棉团，用于饲喂成虫。6.5 照明 系统 由时控开关、灯管组构成，控制光暗周期及光照强度。6.6 充气 系统 由超静气泵以及导管、一次性塑料滴管构

6、成，能在饲养期间持续往培养水中温和曝气。7 饲 养方 法 7.1 卵 用一次性塑料滴管吸取摇蚊卵或用镊子夹住卵块柄状端，转移至结晶皿中静置培养，受精卵即开始发育。7.2 幼虫 7.2.1 一般 2 天左右，受精卵就能发育成幼虫，但初孵化出的幼虫仍旧被卵块中的胶状物黏结成团，需要一段时间，幼虫才能完全分散，自由游动、觅食。幼虫期需分三次投入鱼饲料粉末（如Tetramin），投饵量为 0.2 1 mg/天/虫。饲喂量应严格监控，充分满足需求的同时亦不宜过多，以免污染水质，影DB43/T 1970 2020 3 响其生长。7.2.2 饲养期间，如果培养液浑浊，可以用虹吸法吸出浑浊的培养液，再加入新鲜

7、的培养液。开始出现摇蚊蛹时，就需要将结晶皿转移至养虫笼中。7.3 蛹 摇蚊蛹栖息在水层，蛹期不足 1d 即能羽化成成虫。摇蚊蛹期仍旧能够游动、取食，需每天投喂鱼饲料粉末，投饵量为0.2 1 mg/天/虫。7.4 成虫 7.4.1 成虫期间，笼具中置一培养皿，培养皿中放入一团沾有 2蔗糖水的脱脂棉，供成虫取食。7.4.2 摇蚊成虫寿命约 4 天，多数在羽化后的第一天婚飞、交配。每天在笼具内放置装有新鲜培养水的结晶皿供摇蚊产卵，即能获得摇蚊卵。获得后再转移培养，回至 7.1再开始培养。8 饲 养记 录 饲养期间的环境条件记录、喂食量、产卵量、产出时间等数据需详细记录。DB43/T 1970 202

8、0 4 附 录 A（资料 性）Elendt M4 培养 基配 方 A.1 Elendt M4 培 养基 配 方 Elendt M4培养基组分应符合表 A.1的要求。表A.1 Elendt M4 培养 基 组分 储备液 化合物 浓度mg/L 加到 10 L 培养基中的量（mL）1 氯化钙溶液 CaCl2 2 H2O 73 450 40 2 硫酸镁溶液 MgSO4 7 H2O 123 300 10 3 碳酸氢钠溶液 NaHCO3 64 800 10 4 氯化钾溶液 KCl 5 800 10 5 阳离子溶液 MnCl2 4 H2O 3 605 1 LiCl 3 060 RbCl 710 SrCl2

9、6 H2O 1 520 CuCl2 6 H2O 168 ZnCl2 130 CoCl2 6 H2O 100 6 阴离子溶液 NaNO3 548 2 H3BO3 5 719 NaBr 320 Na2MoO4 2 H2O 126 KI 6.5 Na2SeO3 4.38 NH4VO3 1.15 7 硅酸盐溶液 Na2 SiO3 9 H2O 50 000 2 8 铁-EDTA 溶液 Na2EDTA 2 H2O 5 000 5 FeSO4 7 H2O 1 991 9 磷酸盐溶液 KH2PO4 286 5 K2HPO4 368 10 维生素溶液 Thiamindi hydrochlorid（VB1）750

10、 1 Cyanocobalamin（VB12）10 Biotin（VH）7.5 DB43/T 1970 2020 5 附 录 B（资料 性）水中饱 和溶 解氧 计算 方法 B.1 计算 公式 不同大气压和不同水温下饱和溶解氧（DO，mg/L）的计算公式如下：26.328.4770 T poD 式中：当地实测大气压，hPa；po标准大气压，hPa；T 水温，取值范围为（040）。B.2 饱和 溶解 氧浓 度 不同大气压和不同水温下饱和溶解氧浓度见表B.1 表B.1 不 同大 气压、温 度下水 中饱 和溶 解氧 浓度（mg/L）压力（MPa）温度（）0.09 0.095 0.100 0.101 0

11、.105 0 12.93 13.65 14.37 14.64 15.10 1 12.58 13.29 13.99 14.23 14.69 2 12.24 12.93 13.61 13.83 14.30 3 11.92 12.58 13.25 13.45 13.92 4 11.61 12.26 12.91 13.09 13.56 5 11.31 11.94 12.57 12.75 13.21 6 11.02 11.64 12.25 12.42 12.87 7 10.75 11.35 11.95 12.11 12.56 8 10.48 11.07 11.65 11.81 12.24 9 10.23

12、 10.80 11.38 11.53 11.95 10 9.99 10.55 11.11 11.25 11.67 11 9.75 10.29 10.84 10.99 11.39 12 9.52 10.06 10.59 10.75 11.13 13 9.31 9.81 10.36 10.51 10.88 14 9.11 9.62 10.13 10.28 10.65 15 8.91 9.41 9.91 10.06 10.41 16 8.71 9.20 9.70 9.85 10.19 17 8.53 9.01 9.49 9.64 9.97 DB43/T 1970 2020 6 表B.1 不 同大 气

13、压、温 度下水 中饱 和溶 解氧 浓度（mg/L）（续）压力（MPa）温度（）0.09 0.095 0.100 0.101 0.105 18 8.36 8.83 9.30 9.45 9.77 19 8.18 8.65 9.11 9.26 9.57 20 8.03 8.48 8.94 9.02 9.37 21 7.86 8.31 8.76 8.90 9.20 22 7.72 8.16 8.60 8.73 9.03 23 7.56 7.99 8.42 8.57 8.85 24 7.43 7.85 8.27 8.41 8.70 25 7.29 7.71 8.13 8.25 8.54 26 7.16

14、7.57 7.98 8.11 8.39 27 7.03 7.43 7.84 7.96 8.24 28 6.91 7.30 7.70 7.82 8.10 29 6.79 7.18 7.57 7.69 7.96 30 6.67 7.06 7.44 7.55 7.83 31 6.56 6.94 7.32 7.42 7.69 32 6.45 6.83 7.20 7.30 7.57 33 6.34 6.70 7.07 7.18 7.44 34 6.24 6.60 6.96 7.06 7.33 35 6.13 6.49 6.84 6.94 7.20 36 6.04 6.39 6.74 6.83 7.09

15、37 5.94 6.29 6.63 6.72 6.98 38 5.84 6.19 6.53 6.61 6.87 39 5.74 6.08 6.42 6.51 6.76 40 5.66 5.99 6.33 6.41 6.66 DB43/T 1970 2020 7 附 录 C（资料 性）摇蚊发 育不 同时 期的 特征 C.1 特征 描述 摇蚊发育不同时期的特征描述见表 C.1 表C.1 摇 蚊发 育不 同时 期的特 征描 述 发育阶段 持续时间（d）特征 图片 卵期 一般约2d 摇蚊卵块刚产出时，长度约3 mm，遇水膨胀，为胶质圆柱状，卵块内卵粒螺旋形规则排列，每个卵块月300-650 枚卵粒。卵

16、粒长约250 m，宽约100 m。一龄 1d3d 摇蚊幼虫由头、胸、腹三部分组成，胸部第一体节具一对原足，腹部最后一体节具有一对后原足、两队肛管和为毛若干，部分种、属幼虫还具有腹管、侧腹管。刚孵化出的一龄幼虫体长不足1 mm，体色浅，透明度高，显微镜下能清晰观察其身体结构（见图3）。二龄 2d3d 各龄期幼虫身体结构无明显差异，但尺寸和体色上的变化明显。从低龄期到高龄期，体色逐渐变深，由最初的无色逐步变为浅红、鲜红、深红。摇蚊幼虫一般分为4个龄期，但部分种仅分为3个龄期，也有部分种分为5个龄期。龄期的划分一般以头部骨质化的结构的尺寸作为测量指标，如头壳长、头壳宽以及触角长等。其中头壳宽是比较广

17、泛使用的测量指标。三龄 3d11d，不同种、不同饲养条件，持续时间不同。DB43/T 1970 2020 8 表C.1 摇 蚊发 育不 同时 期的特 征描 述（续）发育阶段 持续时间（d）特征 图片 四龄 11d16d，不同种、不同饲养条件持续时间不同。各龄期幼虫身体结构无明显差异，但尺寸和体色上的变化明显。从低龄期到高龄期，体色逐渐变深，由最初的无色逐步变为浅红、鲜红、深红。摇蚊幼虫一般分为4个龄期，但部分种仅分为3个龄期，也有部分种分为5个龄期。龄期的划分一般以头部骨质化的结构的尺寸作为测量指标，如头壳长、头壳宽以及触角长等。其中头壳宽是比较广泛使用的测量指标。蛹期 一般少于1d 摇蚊蛹胸节膨大，体长明显缩短，头部会出现羽毛状、棒状、丝状或者叶状的呼吸器官，即呼吸角。雄性蛹身体相对雌性较短小。成虫期 约4d，交配产卵后，很快就会死亡。雄性成虫和雄性成虫具有明显的形态差异，雌性触角为丝状，并较短小；雄性触角则为羽状。注：表中图片均为伸展摇蚊（chironomus tentans）