DB43 T 2704-2023 饲料脱霉剂霉菌毒素吸附率测定 液相色谱串联质谱法.pdf

1、DB43/T 27042023 43湖南省地方标准ICS CCS 65.120B 46发 布湖南省市场监督管理局饲料脱霉剂霉菌毒素吸附率测定液相色谱串联质谱法2023-08发布-222023-11实施-22Determination of mycotoxin adsorption rate of feed mycotoxinadsorbents by liquid chromatography-tandem massspectrometry(LC-MS)methodDB43/T 27042023 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 原理 1 5 试剂

2、与材料 1 6 仪器设备 2 7 试验步骤 2 7.1 取样 2 7.2 混合吸附 2 7.3 提取 2 7.4 霉菌毒素标准溶液净化液制备 3 7.5 测定 3 8 结果计算 3 9 重复性 4 附录 A（规范性）霉菌毒素相关名称、分子式等信息对照表 5 附录 B（资料性）霉菌毒素相关检测指标信息 6 DB43/T 27042023II DB43/T 27042023 III 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本

3、文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南农业大学、江苏神力特生物科技有限公司、湖南生物机电职业技术学院、普洱天澜农牧科技有限公司、湖南百宜科技集团有限公司。本文件主要起草人：唐圣果、宋泽和、康萌、黄珂、黄正君、尹鑫、袁旭鹏、钱伟锋、罗文锋。DB43/T 27042023IV DB43/T 27042023 1 饲料脱霉剂霉菌毒素吸附率测定 液相色谱串联质谱法 1 范围 本文件规定了液相色谱串联质谱法测定饲料脱霉剂霉菌毒素吸附率的原理、试剂与材料、仪器设备、试验步骤、结果计算和重复性。本文件适用于饲料脱霉剂对黄曲霉毒素（AFB）B1、B2、G1 和 G2，玉米赤霉烯酮（ZEA）

4、，伏马毒素 B1、B2、B3，脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON），赭曲霉毒素 A、B 和 T-2 毒素吸附率的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料采样 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 霉菌毒素吸附率 mycotoxin adsorption rate 在 pH=3 的缓冲溶液中饲料脱霉剂对霉菌毒素的吸附比率，以吸附前后标准溶液中霉

5、菌毒素浓度的差值与吸附前霉菌毒素标准溶液浓度的比值表示。4 原理 在 pH=3 模拟胃内环境的缓冲溶液中饲料脱霉剂与毒素标准液混合 1 小时后，离心取上清液，测定毒素的浓度，通过吸附前后标准溶液毒素浓度之差与吸附前标准溶液毒素浓度的比值计算。5 试剂与材料 所用试剂除另有规定外，均使用分析纯试剂：a）水：GB/T 6682，一级；b）浓盐酸；c）氯化钾；d）磷酸二氢钾；DB43/T 270420232 e）十二水磷酸氢钠；f）氯化钠；g）甲酸：质谱纯；h）乙腈：质谱纯；i）甲醇：质谱纯；j）霉菌毒素标准品：纯度及相关信息见附录 A；k）盐酸溶液（2 mol/L）：移取 16.8 mL 盐酸于

6、1 L 容量瓶中，加水定容至刻度，混匀后备用；l）磷酸缓冲液（pH=3）：称取 0.2 g 氯化钾，0.2 g 磷酸二氢钾，2.92 g 十二水磷酸氢二钠，8 g氯化钠，加 950 mL 水溶解，使用 2 mol/L 盐酸溶液调整至 pH=3，最后用纯水定容到 1000 mL；m）提取液：量取 159 mL 水、840 mL 乙腈和 1 mL 甲酸，混匀；n）霉菌毒素储备液：按照附录 A 称取黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2 的标准品约 0.0003 g，称取赭曲霉毒素 A、B，T-2 毒素，玉米赤霉烯酮，脱氧雪腐镰刀菌烯醇，伏马霉素 B1、B2、B3 的标准品约 0.003，置于 10 m

7、L 容量瓶中，用乙腈溶解、定容，配制成混合霉菌毒素储备液；储备液中黄曲霉毒素的浓度约为 30 g/mL，其余霉菌毒素浓度约为 300 g/mL；o）霉菌毒素标准溶液：准确移取 100 L 霉菌毒素储备液于 10 mL 容量瓶中，用磷酸缓冲液（pH=3）定容，配制成混合霉菌毒素标准溶液，其中黄曲霉毒素的浓度约为 30 ng/mL，其余霉菌毒素浓度约为 300 ng/mL。6 仪器设备 测试仪器设备有：a）超高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）；b）涡旋混合器；c）振荡器；d）离心机：转速不低于 8000 转/分钟；e）真空浓缩仪或氮吹仪；f）分析天平：感量 0.0001 g 和

8、0.00001 g；g）天平：感量 0.01 g。7 试验步骤 7.1 取样 按 GB/T 14699.1 的规定均匀取样。7.2 混合吸附 称取 1 g（精确至 0.0001 g）样品于 10 ml 的离心管中，加入 5 ml 霉菌毒素标准溶液，涡旋混匀，置于恒温摇床中 37，200 转/分钟条件下，混合 1 小时；于 8000 转/分钟离心 5 分钟，取上清液，于 60 真空浓缩或氮吹至近干，备用。7.3 提取 准确加入 20 mL 提取液，涡旋混匀，振荡提取 20 分钟，于 8000 转/分钟离心 5 分钟，立即移取上DB43/T 27042023 3 清液，备用。7.4 霉菌毒素标准溶

9、液净化液制备 取霉菌毒素标准液 5 ml，于 60 真空浓缩或氮吹至近干，按 7.3 提取，得到霉菌毒素标准溶液净化液，待测。7.5 测定 7.5.1 超高效液相色谱参考条件：色谱柱：C18 柱，柱长 100 mm，内径 2.1 mm，粒径 1.7 m1.9 m，或性能相当者；柱温：40；流速：0.3 ml/mL；进样量：1 L；流动相：A 相：准确吸取 1 mL 甲酸（质谱纯），用超纯水稀释并定容至 1000 mL，混匀；B 相：乙腈（质谱纯），梯度洗脱程序见下表 1。表 1 梯度洗脱程序 时间min A B 0 95 5 2 80 20 4 65 35 6 30 70 8 0 100 10

10、 0 100 7.5.2 质谱参考条件：电离方式：电喷雾电离，正离子模式（ESI+），负离子模式（ESI-）；检测方式：平行反应监测（PRM）；毛细管电压：3.5kV；离子源温度：300；辅助气温度：350；7.5.3 在仪器的最佳条件下，分别取霉菌毒素标准溶液净化液（7.5）或吸附后上清液（7.4）上机测定，霉菌毒素相关检测指标信息见附录 B。8 结果计算 8.1 吸附后上清液中霉菌毒素浓度，按式（1）计算：（1）C1=Ai C0AsiDB43/T 27042023 4 式中：Ai吸附后上清液中霉菌毒素的峰面积；Asi标准溶液净化液中霉菌毒素的峰面积；C0标准溶液中霉菌毒素浓度（ng/mL）

11、。8.2 饲料脱霉剂霉菌毒素吸附率，按式（2）计算：（2）式中：X饲料脱霉剂毒素吸附率；C0标准溶液中毒素浓度（ng/mL）；C1吸附后上清液中毒素浓度（ng/mL）。9 重复性 在重复条件下，获得的 2 次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算数平均值的 10。X=C0C1C0DB43/T 27042023 5 附 录 A（规范性）霉菌毒素相关名称、分子式等信息对照表 表 A.1 霉菌毒素中文名称、英文名称、分子式、分子量和标准品纯度 序号 中文名称 英文名称 分子式 分子量 CAS 号 纯度 1 黄曲霉毒素 B1 Aflatoxin B1 C17H12O6 312.3 1162-6

12、5-8 99 2 黄曲霉毒素 B2 Aflatoxin B2 C17H14O6 314.3 7720-81-7 99 3 黄曲霉毒素 G1 Aflatoxin G1 C17H12O7 328.3 1165-39-5 99 4 黄曲霉毒素 G2 Aflatoxin G2 C17H14O7 330.3 7241-98-7 99 5 玉米赤霉烯酮 Zearalenone C18H22O5 318.4 17924-92-4 99 6 赭曲霉毒素 A OchratoxinA C20H18ClNO6 403.8 303-47-9 99 7 赭曲霉毒素 B OchratoxinB C20H19NO6 369

13、.4 4825-86-9 98 8 T-2 毒素 T-2 toxin C24H34O9 466.5 21259-20-1 99 9 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 Deoxynivalenol C15H20O6 296.3 51481-10-8 99 12 伏马霉素 B1 Fumonisin B1 C34H59NO15 721.8 116355-83-0 99 13 伏马霉素 B2 Fumonisin B2 C34H59NO14 705.8 116355-84-1 99 14 伏马霉素 B3 Fumonisin B3 C34H59NO14 705.8 136379-59-4 95 DB43/T 27042

14、0236 附 录 B（资料性）霉菌毒素相关检测指标信息 表 B.1 霉菌毒素扫描时间、保留时间、电离方式、监测离子对、锥孔电压和碰撞能量信息 序号 中文名称 扫描时间 min 保留时间 min 电离方式 监测离子对 m/z 锥孔电压 V 碎裂能量eV 1 黄曲霉毒素 B1 8.08.6 8.25 M+H+313.1284；313.1241.0 46 26；40 2 黄曲霉毒素 B2 7.68.4 7.92 M+H+312.2287.1；315.2259.0 46 30；32 3 黄曲霉毒素 G1 7.48.2 7.73 M+H+329.1242.9；329.1200.0 42 28；42 4

15、黄曲霉毒素 G2 7.17.8 7.89 M+H+331.1189.0；331.1245.0 48 43；34 5 玉米赤霉烯酮 10.611.2 10.83 M+H+317.2131.0；317.2175.1 48 35；30 6 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 4.04.7 4.38 M+H+296.9249.1；296.9203.0 15 10；15 7 伏马霉素 B1 8.47.2 8.69 M+H+722.2352.3；722.2334.3 50 36；40 8 伏马霉素 B2 9.410.0 9.49 M+H+706.4336.5；706.4354.5 40 40；35 9 伏马霉素 B3 8.89.4 9.14 M+H+706.4336.5；706.4354.5 40 40；35