1、ICS DB1304 邯郸市地方标准 DB 1304/T4172022 噬菌体防控鸡源沙门菌技术规程 2022-12-29 发布 2022-12-30 实施 邯郸市市场监督管理局 发 布 DB1304/T4172022 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020 给出的规则起草。本文件由河北工程大学提出。本文件起草单位：河北工程大学、峰峰矿区市场监督管理局。本文件主要起草人：钟翠红、马金波、张彦昌、程瑞、杨利、朱阵、宿欣、袁英、吴丽丽、刘金霞、汲如芬、王海忠、支龙彬。DB1304/T4172022 1 噬菌体防控鸡源沙门菌技术规程 1 范围 本文件规定了鸡源沙门菌及其噬菌体分离鉴定、噬菌
2、体悬浮液的制备、防控措施等技术要求。本文件适用于鸡源沙门菌的噬菌体预防和治疗。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4789.4 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 N Y/T 388 畜禽养殖场环境质量标准 NY/T541 动物疫病实验室检验采样方法 NY/T555 动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法 NY/T 1948 兽医实验室生物安全要求通则 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 沙门菌的分离鉴定
3、参照NY/T 541采集样品后，按照GB 4789.4-2016分离鉴定沙门菌。5 噬菌体混悬液的制备 5.1 污水采集与处理。从养鸡场污水管道采集污水样品，8000 r/min 离心 15 min，取上清液，弃沉淀，经 0.22 m 微孔滤器过滤，滤液备用。5.2 噬菌体的分离纯化。将鉴定的沙门菌作为诱导菌，利用双层琼脂平板法培养噬菌体，挑选大小一致噬菌斑，再利用双层琼脂平板法纯化培养噬菌体。吸取噬菌体纯化液，加至电镜专用铜网上，用 2%醋酸铀染色，干燥，通过透射电子显微镜观察噬菌体超微结构。再利用双层琼脂平板法对具有典型形态特征的噬菌体进行纯化。5.3 宽谱噬菌体的筛选。将鉴定的沙门菌菌液
4、接种于双层平板，静置，再取噬菌体悬液滴于双层琼脂平板上，倒置于 37 恒温箱中，过夜培养，观察双层琼脂平板是否形成噬菌斑，根据噬菌体吞噬不同种类病原菌菌株的数量筛选宽谱噬菌体。DB1304/T4172022 2 5.4 噬菌体混悬液的制备。将 0.5 mL 病原菌噬菌体混悬液加到 3 mL LB 液体培养基后，分别加入 100 L 同种病原菌菌液，37 220 r/min 条件下，置于摇床震荡培养 16 h。4 条件下 8000 r/min 离心 10 min，将沉淀再用无菌水悬浮；再用 0.22 m 滤膜过滤悬液。滤液（噬菌体浓度1104 PFU/mL）4 保存。5.5 噬菌体混悬液污染状况
5、检测。取噬菌体混悬液，均匀涂布于普通营养琼脂平板培养基，37 倒置培养 24 h，观察培养平板有无菌落生长。若有细菌菌落生长，应重新过滤或制备噬菌体混悬液。6 防控 6.1 鸡舍环境病原菌的净化。根据鸡源沙门菌的分离鉴定种类制备噬菌体混悬液，按 1%比例向新制备沙门菌噬菌体混悬液加水，混匀，用稀释液喷洒地面及料槽，每周 1 次。6.2 饲养管理。鸡舍内保持清洁，通风良好，符合畜禽养殖场环境质量标准要求；定期进行环境消毒，及时清除病死鸡。7 治疗 7.1 消除病原。参照 6.1 噬菌体混悬液净化鸡舍环境病原菌。严重病例，可同时配合药物治疗。7.2 辅助治疗。加强饲养管理，做好乳房卫生，提高奶牛抗病力；同时参照 6.1.1 用消毒液、噬菌体混悬液喷洒鸡舍地面和料槽。8 生物安全 实验室操作参照 NY/T 1948 兽医实验室生物安全要求通则。_
