1、ICS 65.020.20CCS B 05DB1308承德市地方标准DB1308/T 315 2022珊瑚状猴头菌谷粒菌种生产技术规程2022-10-31 发布2022-11-01 实施承德市市场监督管理局发 布DB1308/T 3152022I前 言本文件按照 GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由承德市农业农村局归口。本文件起草单位：平泉市希才应用菌科技发展有限公司。本文件主要起草人：梁希才、罗民、柳凤玉、张晨光、刘海军、刘绍苍、梁宏丽、张会超、孟凡飞、王彦玲、王帅。DB1308/T 3152022珊瑚状猴头菌谷粒菌种生产技术规
2、程1范围本文件规定了珊瑚状猴头菌谷粒菌种生产的前期准备、操作流程以及各步骤的操作方法指示。本文件适用于珊瑚状猴头菌谷粒菌种生产过程管理。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。本文件没有规范性引用文件。3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4前期准备4.1材料谷粒、石膏、玉米粉、消毒品等。4.2仪器设备750 ml塑料原种瓶、接种工具、超净工作台、生化培养箱等。5操作流程谷粒选择谷粒浸泡滤水添加石膏装瓶灭菌接菌菌丝培养摇瓶后续养菌
3、保存备用。6操作方法6.1谷粒选择选择带皮小米谷粒，籽粒饱满、无杂质、直径为0.1 cm0.15 cm，破碎率控制在2%以内。6.2谷粒浸泡使用塑料桶或箱作为容器，将谷粒倒入容器中，加水浸泡，水与谷粒的体积比为2:1。环境温度20左右，浸泡4 h；环境温度15左右，浸泡10 h；环境温度10左右，浸泡24 h。以谷粒浸透无白心为宜。DB1308/T 31520226.3滤水浸泡完成后进行滤水，将谷粒置于50目筛子上进行滤水，以筛底没有水滴滴下且手抓谷粒不粘手为宜。6.4添加石膏按照谷粒干重的1%比例添加石膏，搅拌均匀。6.5装瓶选择750 ml塑料原种瓶，采用机械或手工装瓶，装料高度至瓶肩，装
4、瓶后的重量在1.3 kg1.4 kg，使用无棉盖体扣盖封口，作为培养基。6.6灭菌装瓶后4 h内进行灭菌，防止培养基变酸。采用高压灭菌方式灭菌，温度达到121时保持4 h，确保灭菌彻底。6.7接菌灭菌完成后，待培养基温度降到25左右时在超净工作台无菌的条件下进行接菌，每支20 mm200mm的斜面试管PDA培养基母种转接4瓶培养基。6.8菌丝培养接菌完成后，在培养温度为22，空气相对湿度为60%，二氧化碳浓度不超过0.2%的条件下进行培养。6.9摇瓶当菌丝长到培养基1/4左右时进行摇瓶，使得长有菌丝部分的培养基与没长菌丝的培养基再次混合，以加快菌种的生长速度。6.10后续养菌待培养基中长满菌丝后，继续培养6 d8d，令菌丝充分长入培养基（谷粒）的内部，保证菌丝充分分解谷粒培养基，使谷粒菌种菌丝健壮。6.11保存发好的菌种宜尽快使用，如较长时间不用，须在04条件下进行保存，保存期不得超过90 h。6.12备用在使用前用4的高锰酸钾溶液清洗整个菌种瓶，然后用菌钩扒去菌种瓶表面的老化层，并用菌钩将瓶内结块的菌种搅碎，使得培养基中的谷粒都成为单个的个体。即可备用。_
