GB 4789.5-2012 食品安全国家标准.食品微生物学检验.志贺氏菌检验.pdf

1、喧嚣中华人民共和国国家标准GB 4789.5-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验2012-05-17发布2012-07-17实施:;:g:，吃午五f.， 苗、.抽 数E马防伪中华人民共和国卫生部发布目lJ1=1 本标准代替GBjT4789.5-2003(食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验。本标准与GBjT4789.5-2003相比，主要变化如下:一一修改了标准名称;一一修改了培养基和试剂;一一修改了操作步骤中增菌部分和生化试验及附加生化试验部分;一一修改了表2;一一修改了表40GB 4789.5-2012 I 食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验1 范围本标准规定了食

2、品中志贺氏菌CShigella)的检验方法。本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下za) 恒温培养箱:36oC士1oC; b) 冰箱:2oC5 oC; c) 膜过滤系统;d) 厌氧培养装置:41.5 oC士1oC; e) 电子天平:感量0.1g; f) 显微镜:10X100X; g) 均质器;h) 振荡器;GB 4789.5-2012 i) 元菌吸管:1mLC具0.01mL刻度)、10mLC具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头:j) 元菌均质杯或无菌均质袋:容量500mL; k) 元菌培养皿z直径90mm; 1) pH计或pH比色

3、管或精密pH试纸;m)全自动微生物生化鉴定系统。3 培养基和试剂3. 1 志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素:见附录A中A.1。3.2 麦康凯CMAC)琼脂:见附录A中A.203.3 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐CXLD)琼脂z见附录A中A.303.4 志贺氏菌显色培养基。3.5 三糖铁CTSD琼脂:见附录A中A.4。3.6 营养琼脂斜面:见附录A中A.503. 7 半固体琼脂:见附录A中A.603.8 葡萄糖镀培养基:见附录A中A.7。3.9 尿素琼脂:见附录A中A.8。3. 10 -半乳糖昔酶培养基:见附录A中A.9。3. 11 氨基酸脱竣酶试验培养基:见附录A中A.1003. 12 糖发酵管:见附录A中

4、A.llo1 GB 4789.5-2012 3.13 西蒙氏拧攘酸盐培养基:见附录A中A.1203.14 粘液酸盐培养基t见附录A中A.1303.15 蛋白陈水、蘸基质试剂:见附录A中A.14。3.16 志贺氏菌属诊断血清。3.17 生化鉴定试剂盒。4 检验程序志贺氏菌检验程序见图10检样2且g或25mL)样品+志贺氏菌增菌肉汤225mL2 41. 5 c士1C, 16 h - 20 h厌氧培养TSI，半固体，营养琼脂斜面志贺氏菌属分群及分型结果MAC或志贺氏菌显色培养基图1志贺氏茵检验程序GB 4789.5-2012 5 操作步骤5.1 增菌以元菌操作取检样25g( mL)，加入装有灭菌22

5、5mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000 r/min10 000 r/min均质;或加入装有225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min2 min，液体样品振荡混匀即可。于41.5 .C士1.C，厌氧培养16h20 h。5.2 分离取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36.C士1.C培养20h24 h，观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1.

6、表1志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板志贺氏菌的菌落特征MAC琼脂无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐XLD琼脂粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐志贺氏菌显色培养基按照显色培养基的说明进行判定5.3 初步生化试验5.3.1 自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一管，置36.C士1.C培养20h24 h，分别观察结果。5.3.2 凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸(发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蕉糖)、不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取其5.3

7、.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。5.4 生化试验及附加生化试验5.4.1 生化试验用5.3.1中己培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验，即伊半乳糖昔酶、尿素、赖氨酸脱竣酶、鸟氨酸脱竣酶以及水杨昔和七叶昔的分解试验。除宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳性;宋内氏菌和躏疾志贺氏菌1型，鲍氏志贺氏菌13型的伊半乳糖昔酶为阳性以外，其余生化试验志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。另外由于福氏志贺氏菌6型的生化特性和荆疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做蘸基质、甘露醇、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆

8、菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属。志贺氏菌属生化特性见表2.3 GB 4789.5-2012 表2志贺氏菌属四个群的生化特征生化反应A群z瘸疾志贺氏菌B群:福氏志贺氏菌C群2鲍氏志贺氏菌D群z宋内氏志贺氏菌f半乳糖昔酶_a _a 十尿素赖氨酸脱竣酶鸟氨酸脱竣酶_b + 水杨昔七叶昔- 能基质一/+) 一/十甘露酶+ + + 棉子糖+ 十甘泊十)(十)d 注:+表示阳性s一表示阴性;_/十表示多数阴性;十/表示多数阳性;(十表示迟缓阳性;d表示有不同生化型。a瘸疾志贺1型和鲍氏13型为阳性.b鲍氏13型为鸟氨酸阳性。c福氏4型和6型常见甘露醇

9、阴性变种。5.4.2 附加生化试验由于某些不活泼的大肠埃希民菌Canaeroger山E.coli)、A-DC Alkalescens-Disparbiotypes碱性-异型)菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集;因此前面生化试验符合志贺氏菌属生化特性的培养物还需另加葡萄糖腊、西蒙氏拧棱酸盐、柏液酸盐试验(36.C培养24h 48 h)。志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别见表3。表3志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别生化反应A群z瘸疾B群:福民C群z鲍民D群:宋内氏大肠埃希氏菌A-D菌志贺氏菌志贺氏菌志贺氏菌志贺氏菌葡萄糖镀+

10、 十西蒙氏拧稼酸盐d d 粘液酸盐d 十d 注1:+表示阳性;一表示阴性;d表示有不同生化型。注2:在葡萄糖镀、西蒙氏拧稼酸盐、粘液酸盐试验三项反应中志贺氏菌一般为阴性，而不活泼的大肠埃希民菌、A-D(碱性-异型)菌至少有一项反应为阳性。5.4.3 如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据5.3.2的初步判断结果，用5.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。4 GB 4789.5-2012 5.5 血清学鉴定5.5.1 抗原的准备志贺氏菌属没有动力，所以没有鞭毛抗原。志贺氏菌属主要有菌体(0)抗原。菌体0抗原又可分为型和群

11、的特异性抗原。一般采用1.2%1. 5%琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。注1:一些志贺氏菌如果因为K抗原的存在而不出现凝集反应时，可挑取菌苔于1mL生理盐水做成浓菌液，100c 煮沸15min60 min去除K抗原后再检查。注2:D群志贺氏菌既可能是光滑型茵株也可能是粗糙型菌株，与其他志贺氏茵群抗原不存在交叉反应。与肠杆菌科不同，宋内氏志贺氏菌粗糙型菌株不一定会自凝。宋内氏志贺氏菌没有K抗原。5.5.2 凝集反应在玻片上划出2个约1cmX2 cm的区域，挑取一环待测菌，各放1/2环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加1滴抗血清，在另一区域下部加入1滴生理盐水，作为对照。再用无菌的接

12、种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1min，并对着黑色背景进行观察，如果抗血清中出现凝结成块的颗粒，而且生理盐水中没有发生自凝现象，那么凝集反应为阳性。如果生理盐水中出现凝集，视作自凝。这时，应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验。如果待测菌的生化特征符合志贺氏菌属生化特征，而其血清学试验为阴性，则按5.5.1注1进行试验。5.5.3 血清学分型(选做项目)先用四种志贺氏菌多价血清检查，如果呈现凝集，则再用相应各群多价血清分别试验。先用B群福氏志贺氏菌多价血清进行试验，如呈现凝集，再用其群和型因子血清分别检查。如果B群多价血清不凝集，则用D群宋内氏志贺氏菌血清进行试

13、验，如呈现凝集，则用其I相和E相血清检查;如果B、D群多价血清都不凝集，则用A群躏疾志贺氏菌多价血清及112各型因子血清检查，如果上述三种多价血清都不凝集，可用C群鲍氏志贺氏菌多价检查，并进一步用118各型因子血清检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原鉴别见表4。表4福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原的鉴别表在群因子血清中的凝集型和亚型型抗原群抗原3 , 4 6 7 , 8 1a I 4 + 1b I (4) , 6 (十)+ 2a E 3 ,4 十2b E 7 ,8 十3a E (3 ,4) , 6 , 7 ,8 (+) 十+ 3b E (3 , 4) , 6 (+) + 4a N

14、 3, 4 十4b N 6 + 4c N 7 ,8 + 5 GB 4789.5-2012 表4(续)在群因子血清中的凝集型和亚型型抗原群抗原3 ,4 6 7,8 5a V (3 ,4) (十)5b V 7,8 十6 币44 + X 7,8 + Y 3 ,4 + 注:+表示凝集;一表示不凝集;0表示有或元。5.6 结果报告综合以上生化试验和血清学鉴定的结果，报告25g( mL)样品中检出或未检出志贺氏菌。6 , 附录A培养基和试剂A.1 志贺氏菌增菌肉汤新生霉素(Shigellabroth) A. 1. 1 志贺氏菌增菌肉汤A. 1. 1. 1 成分A. 1. 1.2 制法膜蛋白豚葡萄糖磷酸氢二

15、饵磷酸二氢饵氯化铀吐温80(Tween 80) 蒸馆水20.0 g 1. 0g 2.0 g 2.0 g 5.0 g 1. 5 mL 1 000.0 mL GB 4789.5-2012 将以上成分混合加热溶解，冷却至25.C左右校正pH至7.0士0.2，分装适当的容器，121.C灭菌15 min.取出后冷却至50.C-55 .C，加入除菌过滤的新生霉素溶液(0.5g/mL)，分装225mL备用。注z如不立即使用，在2C -8 c条件下可储存一个月。A.1.2 新生霉素溶液A. 1. 2.1 成分A. 1. 2. 2 制法新生霉素蒸馆水25.0 mg 1 000.0 mL 将新生霉素溶解于蒸锢水中

16、，用o.22m过滤膜除菌，如不立即使用，在2.C-8.C条件下可储存一个月。A. 1.3 临用时每225mL志贺氏菌增菌肉汤(A.1. 1)加入5mL新生霉素溶液(A.1. 2)，混匀。A.2 麦康凯(MAC)琼脂A. 2.1 成分蛋白陈20.0 g 乳糖10.0 g 3号胆盐1. 5g 氯化铀5.0 g 中性红0.03 g 结晶紫0.001 g 琼脂15.0 g 蒸馆水1 000.0 mL A. 2. 2 制法将以上成分混合加热溶解，冷却至2汩5.C左右校正pH至7.2土0.2，分装，121.C高压灭菌1臼5m旧ln冷却至4钊5.C-5o.C，倾注平板。注:如不立即使用，在2C -8 c条件

17、下可储存两周。7 GB 4789.5-2012 A.3 木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂A. 3.1 成分酵母膏3.0 g L-赖氨酸5.0 g 木糖3.75 g 乳糖7.5 g 萧糖7.5 g 脱氧胆酸铀1. 0g 氯化铀5.0 g 硫代硫酸铀6.8 g 拧朦酸铁镀0.8 g 酣红0.08 g 琼脂15.0 g 蒸馆水1 000.0 mL A.3.2 制法除酣红和琼脂外，将其他成分加人400mL蒸锢水中，煮沸溶解，校正pH至7.4士0.2。另将琼脂加入600mL蒸懦水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加人指示剂，待冷至50.C 55 .C倾注平皿。注:本培养基不需要高压灭菌，在制备过程

18、中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处。本培养基宜于当天制备，第二天使用。使用前必须去除平板表面上的水珠，在37.C-55 c温度下，琼脂面向下、平板盖亦向下烘干。另外如配制好的培养基不立即使用，在2C -8 c条件下可储存两周。A.4 三糖铁(TSI)琼脂A. 4.1 成分A.4.2 制法蛋白陈牛肉浸膏乳糖萧糖葡萄糖硫酸亚铁锻(NH4)zFe(S04)Z.6HzO 氯化铀硫代硫酸铀酣红琼脂蒸锢水20.0 g 5.0 g 10.0 g 10.0 g 1. 0g 0.2 g 5.0 g 0.2 g 0.025 g 12.0 g 1 000.0 mL 除酣红和琼脂外，将其他成分加于400m

19、L蒸馆水中，搅拌均匀，静置约10min，加热使完全溶化，冷却至25.C左右校正pH至7.4士0.2。另将琼脂加于600mL蒸锢水中，静置约10min，加热使完全. GB 4789.5-2012 溶化。将两溶液混合均匀，加入5%酣红水溶液5mL，混匀，分装小号试管，每管约3mL。于121.C灭菌15min，制成高层斜面。冷却后呈桔红色。如不立即使用，在2.C8.C条件下可储存一个月。A.5 营养琼脂斜面A. 5.1 成分A.5.2 制法蛋白陈牛肉膏氧化铀琼脂蒸馆水10.0 g 3.0 g 5.0 g 15.0 g 1000.0 mL 将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馆水内，加入15%氢氧化铀溶液约2

20、mL，冷却至25.C左右校正pH至7.0士0.2。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装小号试管，每管约3mL。于121.C灭菌15 min，制成斜面。注:如不立即使用，在2C8 c条件下可储存两周。A.6 半固体琼脂A.6.1 成分A.6.2 制法蛋白陈牛肉膏氯化铀琼脂蒸锚水l. Og 0.3 g 0.5 g O. 3 gO. 7 g 100.0 mL 按以上成分配好，加热溶解，并校正pH至7.4士0.2，分装小试管.121.C灭菌15min，直立凝固备用。A.7 葡萄糖镇培养基A. 7.1 成分氧化铀硫酸镜(MgS04 7Hz 0) 磷酸二氢镜磷酸氢二饵葡萄糖琼脂0.2%澳靡香草酣蓝水溶液蒸

21、锢水5.0 g 0.2 g 1. 0g 1. 0g 2.0 g 20.0 g 40.0 mL 1 000.0 mL 9 GB 4789.5-2012 A. 7. 2 制法先将盐类和糖溶解于水内，校正pH至6.8土0.2，再加琼脂加热溶解，然后加入指示剂。混合均匀后分装试管，121oc高压灭菌15min。制成斜面备用。A.7.3 试验方法用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不到混浊，以每一接种环内含菌数在20100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于36oc士1oc培养24h。阳性者葡萄糖镀斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不

22、生长，但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖镀斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。注z容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馆水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭茵后使用。如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。A.8 尿素琼脂A. 8.1 成分A.8.2 制法蛋白陈氯化铀葡萄糖磷酸二氢饵0.4%酣红溶液琼脂20%尿素溶液蒸锢水1. 0g 5.0 g 1. 0g 2.0 g 3.0 mL 20.0 g 100.0 mL 900.0 mL 除酣红和尿素外的其他成分加热溶解，冷却至25oc左右校正pH至7.2士0.2，加入酣红指示剂，混匀，于121c灭菌15min。冷至约55c ，加入

23、用0.22m过滤膜除菌后的20%尿素水溶液100mL，混匀，以元菌操作分装灭菌试管，每管约3mL4 mL，制成斜面后放冰箱备用。A.8.3 试验方法挑取琼脂培养物接种，在36oc士1oc培养24h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。A.9 仕半乳糖昔酶培养基A. 9.1 波体法(ONPG法)A.9. 1. 1 成分10 邻硝基苯-D-半乳糖昔(ONPG)0.01 mol/L磷酸铀缓冲液(pH7.5士O.2) 1%蛋白陈水(pH7.5士0.2)60.0 mg 10.0 mL 30.0 mL GB 4789.5-2012 A. 9. 1. 2 制法将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白陈

24、水，以过滤法除菌，分装于10mmX 75 mm试管内，每管0.5 mL，用橡皮塞塞紧。A. 9. 1. 3 试验方法自琼脂斜面挑取培养物一满环接种，于36C士1c培养1h3 h和24h观察结果。如果自-D-半乳糖昔酶产生，则于1h3 h变黄色，如无此酶则24h不变色。A. 9. 2 平板法CX-Gal法)A.9.2.1 成分蛋白脏20.0 g 氧化铀3.0 g $-澳-4-氯-3-51喋-D-半乳糖昔CX-Gal)200.0 mg 琼脂15.0 g 蒸锢水1 000.0 mL A. 9. 2. 2 制法将各成分CA.9. 2. 1)加热煮沸于lL水中，降却至25.C左右校正pH至7.2士0.2

25、，115.C高压灭菌10 min。倾注平板避光冷藏备用。A. 9. 2. 3 试验方法挑取琼脂斜面培养物接种于平板，划线和点种均可，于36.C T 1 .C培养18h24 h观察结果。如果-D-半乳糖昔酶产生，则平板上培养物颜色变蓝色，如无此酶则培养物为无色或不透明色，培养48 h72 h后有部分转为淡粉红色。A.10 氨基酸脱竣酶试验培养基A. 10. 1 成分A.10.2 制法蛋白陈酵母浸音葡萄糖1.6%澳甲酣紫-乙醇溶液L型或DL型赖氨酸和鸟氨酸蒸馆水5.0 g 3.0 g 1. 0g 1. 0 mL 0.5 g/100 mL或1.0 g/100 mL 1 000.0 mL 除氨基酸以外

26、的成分加热榕解后，分装每瓶100mL，分别加入赖氨酸和鸟氨酸。L-氨基酸按0.5%加入，DL-氨基酸按1%加入，再校正pH至6.8土0.2。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内，每管0.5mL，上面滴加一层石蜡油，115.C高压灭菌10min. A.10.3 试验方法从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36.C士1c培养18h24 h，观察结果。氨基酸脱竣酶阳性者GB 4789.5-2012 由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者元碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。阴性对照管应为黄色，空白对照管为紫色。A.11 糖发酵管A. 11. 1 成分A. 11. 2 制法牛肉膏蛋白陈氯化铀磷酸氢二

27、铀(Na2HPO. 12H20) 0.2%澳靡香草酣蓝溶液蒸馆水5.0 g 10.0 g 3.0 g 2.0 g 12.0 mL 1000.0 mL A. 11. 2. 1 葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，25.C左右校正pH至7.4士0.2，分装于有一个倒置小管的小试管内，121.C高压灭菌15min。A. 11. 2. 2 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL, 121 .C高压灭菌15mino另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。注:蔚糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。

28、A. 11. 3 试验方法从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36c土1c培养，一般观察2d-3 d。迟缓反应需观察14 d-30 d。A.12 西蒙氏拧棒酸盐培养基A. 12. 1 成分A. 12.2 制法氯化铀硫酸镜(MgSO.7H20) 磷酸二氢镀磷酸氢二饵拧棱酸铀琼脂0.2%澳爵香草酣蓝溶液蒸锢水5.0 g 0.2 g 1. 0g 1. 0g 5.0 g 究og 40.0 mL 1 000.0 mL 先将盐类溶解于水内，调至pH6.8士0.2，加入琼脂，加热溶化。然后加人指示剂，混合均匀后分装试管，121.C灭菌15min。制成斜面备用。A. 12.3 试验方法挑取少量琼脂培养物接种，于

29、36oC士1.C培养4d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。.13 粘液酸盐培养基. 13. 1 测试肉汤. 13. 1. 1 成分.13. 1. 2 制法酷蛋白陈澳靡香草酣蓝溶液蒸锢水粘液酸慢慢加入5mol/L氢氧化铀以溶解粘液酸，混匀。10.0 g 0.024 g 1 000.0 mL 10.0 g GB 4789.5-2012 其余成分加热榕解，加入上述粘液酸，冷却至25oC左右校正pH至7.4士0.2，分装试管，每管约5 mL，于121oC高压灭菌10mino . 13.2 质控肉汤. 13.2.1 成分. 13.2.2 制法酷蛋白陈澳靡香草酷蓝溶液蒸锢水10

30、.0 g 0.024 g 1 000.0 mL 所有成分加热溶解，冷却至25oC左右校正pH至7.4土0.2，分装试管，每管约5mL，于121oC高压灭菌10min。.13.3 试验方法将待测新鲜培养物接种测试肉汤(A.13. 1)和质控肉汤(A.13. 2) ，于36oC士1oC培养48h观察结果，肉汤颜色蓝色不变则为阴性结果，黄色或稻草黄色为阳性结果。.14 蛋白陈水、蘸基质试剂. 14. 1 成分.14.2 制法蛋白陈(或膜蛋白陈)氧化铀蒸锢水pH7.4 按上述成分配制，分装小试管，121oC高压灭菌15min。注2此试剂在20C-8C条件下可储存一个月。20.0 g 5.0 g 1 0

31、00.0 mL 13 GB 4789.5-2012 A.14.3 盖基质试剂A.14.3.1 柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醒溶解于75mL戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸25 mL。A.14.3.2 欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醒溶解于95mL 95%乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸20 mL。A. 14.4 试验方法挑取少量培养物接种，在36.C士1.C培养1d2 d，必要时可培养4d5 d。加人柯凡克试剂约0.5 mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注:蛋白脏、中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白陈买来后，

32、应先用己知菌种鉴定后方可使用，此试剂在2C -8 c条件下可储存一个月。14 N-ON-mm守国。国华人民共和国家标准食品安全国家标准中食品微生物学检验志贺氏菌检验GB 4789. 5-2012 * 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张1.25 字数28千字2012年7月第一次印刷开本880X12301/16 2012年7月第一版* 书号:155066. 1-45323定价21. 00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107GB 4789.5-2012 打印H期:2012年7月31日F002