GB T 6432-1994 饲料中粗蛋白测定方法.pdf

1、GBT 643294 本标准参照采用ISO 59831979 动物饲料氮含量的测定和粗蛋白含量计算。 1 主题内容与适用范围 本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。 2 引用标准 GB 601 化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备 3 原理 凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。 4 试剂 4.1 硫酸（GB 625）：化学纯，含量为98，无氮。 4.2 混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个

2、结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3920）或硫酸钠（HG 3908），均为化学纯，磨碎混匀。 4.3 氢氧化钠（GB 629）：化学纯，40水溶液（ m V）。 4.4 硼酸（GB 628）：化学纯，2水溶液（ m V）。 4.5 混合指示剂：甲基红（HG 3958）0.1乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 31220）0.5乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。 4.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。 4.6.1 盐酸标准溶液：c（HCl）0.1molL。8.3mL盐酸（GB 622，分析纯），注入 1000mL蒸馏水中。 4.6.2 盐酸标准溶液：c

3、HCl）0.02molL。1.67mL盐酸（GB 622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。 4.7 蔗糖（HG 31001）：分析纯。 4.8 硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥。 4.9 硼酸吸收液：1硼酸水溶液1000mL，加入0.1溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1甲基红乙醇溶液7mL， 4氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。 5 仪器设备 页码，1/4GB/T 6432942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB643200j.htm5.1 实验室用样品粉碎机或研钵。 5.2 分样筛：孔径0.45mm（4

4、0目）。 5.3 分析天平：感量0.0001g。 5.4 消煮炉或电炉。 5.5 滴定管：酸式，10、25mL。 5.6 凯氏烧瓶：250mL。 5.7 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。 5.8 锥形瓶：150、250mL。 5.9 容量瓶：100mL。 5.10 消煮管：250mL。 5.11 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。 6 试样的选取和制备 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。 7 分析步骤 7.1 仲裁法 7.1.1 试样的消煮 称取试样0.51g（含氮量580mg）准确

5、至0.0002g，放入凯氏烧瓶（5.6）中，加入6.4g混合催化剂（4.2），与试样混合均匀，再加入12mL硫酸（4.1）和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶（5.6）置于电炉（5.4）上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360410）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。 7.1.2 氨的蒸馏（蒸馏步骤的检验见附录A） 7.1.2.1 常量蒸馏法 将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入60100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶（5.6）中加入50mL氢氧化钠溶液（

6、4.3），轻轻摇动凯氏 烧瓶（5.6），使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏12min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。 7.1.2.2 半微量蒸馏法 将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置（5.7） 的冷凝管末端浸入装有20mL硼页码，2/4GB/T 6432942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB643200j.htm酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥

7、形瓶（5.8）内。蒸汽发生器 （5.7）的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液1020mL注入蒸馏装置（5.7）的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液（4.3），小心提起 玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶（5.8）使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。 注：7.1.2.1和7.1.2.2蒸馏法测定结果相近，可任选一种。 7.1.2.3 蒸馏步骤的检验 精确称取0.2g硫酸铵

8、4.8），代替试样，按7.1.2或7.2.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.190.2，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。 7.1.3 滴定 用7.1.2.1或7.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1molL（ 4. 6. 1）或0 .02molL（4.6.2）盐酸标 准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 7.2 推荐法 7.2.1 试样的消煮 称取0.51g试样（含氮量580mg）准确至0.0002g，放入消化管中，加2片消化片（仪器自备）或 6.4g混合催化剂（4.2），12mL硫酸（4.1），于420下在消煮炉上 消化1h。取出放凉后加入30mL蒸馏水。 7.2.

9、2 氨的蒸馏 采用全自动定氮仪（5.11）时，按仪器本身常量程序进行测定。 采用半自动定氮仪（5.11）时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以25mL硼酸（4.4）为吸收液，加入2滴混合指示剂（4.5），蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3）进行蒸馏。蒸 馏时间以吸收液体积达到100mL时为宜。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。 7.2.3 滴定 用0.1molL的标准盐酸溶液（4.6.1）滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 8 空白测定 称取蔗糖0.5g，代替试样，按第7章进行空白测定，消耗0

10、1molL盐酸标准溶液（4.6.1）的体积不得超过0.2mL。消耗0.02molL盐酸标准溶液（4.6.2）体积不得超过0.3mL。 9 分析结果的表述 页码，3/4GB/T 6432942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB643200j.htm9.1 计算见下式： 9.2 重复性 每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗蛋白质含量在25以上时，允许相对偏差为1。 当粗蛋白含量在1025之间时，允许相对偏差为2。 当粗蛋白质含量在10以下时，允许相对偏差为3。 粗蛋白质（）（ V2 V1）c0.01406.25（m V V） 式中： V2 滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；V1 滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；C 盐酸标准溶液浓度，molL；m 试样质量，g；V 试样分解液总体积，mL；V 试样分解液蒸馏用体积，mL；0.0140 与1.00mL盐酸标准溶液c（HCl）1.000molL相当的、以克表示的氮的 质6.25 氮换算成蛋白质的平均系数。页码，4/4GB/T 6432942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB643200j.htm