NY T 724-2003 饲料中拉沙洛西钠的测定.高效液相色谱法.pdf

1、 前-= E司NY /T 724-2003 本标准是在参阅了美国全国饲料协会(NFIA)推荐的通用分析J法及国内外大量文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了高效液中目色谱(HPLCl荧光检测法口本标准由中华人民共和国农业部和全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位国家兽药评价中心(中国农业大学动物医学院)。本标准主要起草人沈建忠、张素霞、刘金凤、芮于明。I 1 范围饲料中拉沙洛西铀的测定高效液相色谱法本标准规定了检测动物饲料中拉沙洛西锅含量的高效液相色谱方法。到Y/T724-2003 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲

2、料中技沙洛西纳含量的测定。本方法检测限为5mg/kg, 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有修改单(不包括Jl;tJ误内容)或修改版均不适合本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用本标准。GB/丁6682分析实验室用水规格和试验方法GH/T14699.1 饲料采祥方法3 方法原理用甲醇提取试佯中的拉沙洛西俐，以磷酸盐缓冲液乙脂甲醇作为流动相，用高效液相色i晋-荧光检测法分离测定。4 试剂和溶液除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯哩水为去离子水，符合GB/T6

3、682二级用水的规定。4. 1 乙睛:色谱纯。4.2 甲醇:色谱纯。4.3 磷酸盐缓冲液(pH7)，准确称取:3.121g磷酸二氢铀C咱aH2PO，.2比()和7.164 g磷酸氢二纳(飞2HPO，.12H20)，分别用水溶解，定容至1000mL.得到浓度正(NaHcPO，.2H，O)二0.02mol/L磷酸二氧饷溶液(A液)和浓度c(Na2HPO， 12H2()0. 02 mol/Lo磷酸氢二纳溶液(l液)。将A液与B夜按3.9+6.1的比例混合.配制成磷酸盐缓冲液(调pH7)。4.4 拉沙洛因纳标准液4. 4. 1 拉沙洛因纳标准贮备液z准确称取拉沙洛西锹标准品(纯度二-98%)0.100

4、0且，置于100mL容量瓶中，川j甲醇溶解，定容，其浓度为1000g/mL的储备液，置4c冰箱中保存。4. 4. 2 i1.沙洛西纳标准工作液:分别准确吸取一定量的标准贮备液(1.1.1)，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释、定容.配制成浓度为2.5g/mL.5.0g/mL，7. .)阳/mL.10. 0 fg/mL, 12. 5 fg/mL. 17. 5g 5 仪器和设备实验毛常用仪器、设备。5. 1 高效液轩1色谱仪，配荧光检测器。5.2 离心机。5. 3 振荡LNY /T 724-2003 5.4 玻璃具塞三角瓶(250mL)。5.5 微量进样器。5.6 微孔滤膜(0.45m)。6 试样制

5、备按GB/T14699. 1规定，取有代表性的样品，四分法缩减取约200g，经粉碎，全部过1mm孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。7 测定步骤7. 1 试样提取称取一定量的试样(O. 0 g配合饲料，或5.0 g浓缩饲料，或1.0g添加剂预混合饲料)，置于250 mL玻璃具塞三角瓶中，加入40mL甲辞，往复震荡30min静止10rnin，过滤。再向试样中分别加入30mL甲醇，重复提取两次。合并三次提取液，用甲醇定容至100mL。取10mL置离心管中，3 000 r/min离心5min，取上清液用。.45m微孔有机滤膜过滤作为试样溶液，供高效液相色谱分析。7.2 HPLC色谱条件a) 色谱柱:Cl8柱

6、，长150mm，内径4.6mm，粒径5m，或相当者。b) 柱渥=室温。c) 流动相z磷酸盐缓冲液(4.3) +乙腊十甲醇(25十35十40)。d) 流动相流速，1.0 mL/min。e) 激发波长，310nmo f) 发射波长，420nmo g) 进样体积220L7. 3 HPLC ill定取适量试样溶液(7.1)和相应浓度的标准工作液(4.4.2)，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。B 结果计算与表述8. 1 试样中拉沙洛西纳的含量按式(1)计算:式中=x=空lXnz X 试样中拉tl、洛西铀的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); ml HPLC试样色谱峰对应的拉沙洛西铀的质量，单位为微克(，.，g);m一一一试样质量，单位为克(g);n一一稀释倍数。8.2 测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后一位。9 允许误差两个平行测定的相对偏差不大于10%。2 . ( 1 )