GB T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法 第2部分;生物学试验方法.pdf

1、ICS 1 L 040. 20 C 31 中华人民共和国国家标准GB/T 14233.2-2005 代替GB/T14233. 2-1993 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分:生物学试验方法Test methods for infusion. transfusion, injection equipment for medicaI use Part 2: Biological test methods 2005唰门唰17发布2006-05心1实施中华人民共和国国家质量监督检验检班总局崛世中国国家标准化管理委员会。叩GB/T 14233. 2-2005 目次前言引言. II l 范围.2

2、规范性引用文件3 无菌试验.4 细菌内毒素试验.目. 3 5 热原试验. 4 6 急性全身毒性试验. 5 7 溶血试验.6 8 细胞毒性试验.79 致敏鹊验(最大剂量法) 四川皮内反应试验.11 11 植入试验 11 附录A(资料性附录)亚急性(亚慢性)全身毒性试验.14A.1 目的. u A.2 试剂-. . 14 A.3 主要设备和器具.14A.4 试验前准备. . 14 A.5 试验方法. 15 A.6 试验报告. . 16 附录B(资料性附录)与血液(器械)相互作用试验. 18 且1总则. . 18 B.2 体内静脉血栓形成试验. . . . . . . . . . . u B.3 全

3、血凝固时间试验. . . . 19 B.4 部分凝血激活酶时间(PTTl试验.20 B.5 体外自发性血小板聚集试验. 21 B.6 血小板粘附试验. . . 22 B.7 补体激活试验. . . . . . . . . . . . . . 23 附录c(资料性附录)细胞培养常用溶液和培养液制备. . . . . . . . . . 25 巳l平衡盐溶液(BSSl. . . . . . . . . . . . . . . . 25 C.2 消化液 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25 C.3 囚略盐(M

4、TTl染色液. 26 C.4 RPMI 1640细胞培养液. 26 前言GB/T 14233(医用输液、输血、注射器具检验方法分为两部分第l部分化学分析方法$一一第2部分生物学试验方法。GBjT 14233.2-2005 本部分为GB/T14233的第2部分。本部分代替GB/T14233.2-1993(医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分:生物试验方法儿本次修订对元菌、热原、细菌内毒素三项试验直接引用中国药典(二部门中的适用章节，以能与中国药典的最新修订版保持同步;参照GB/T16886(医疗器械生物学评价修改了细胞毒性试验方法$致敏、皮内反应和植入试验直接引用GB/T16886(医疗器械

5、生物学评价h增加了亚急性(亚慢性)全身毒性和血液(器械)相互作用试验方法，取消了产品合格判定指标。本部分的附录A、附录B和附录C均为资料性附录。本部分由国家食品药品监督管理局提出。本部分由全国医用输液器具标准化技术委员会归口。本部分起草单位:国家食品药品监督管理局济南医疗器械质量监督检验中心、天津医用生物材料监测研究中心。本部分主要起草人:由少华、朱雪涛、刘欣、黄经春、王昕、祝君梅、王科锤、郝树彬。本部分于1993年3月首次发布。GBjT 14233. 2-2005 引-=同本部分给出的生物学试验方法是根据GB/T16886. 1 GB!T 16886.5 应疗费苦械1t物学部价第5部分体外细

6、胞幸事性试尊敬(GB/T16886.5 2003 , ISO 10993: 1999 ,IDT) GB/T 16886. 6 医疗器械1t物学评价第6部分g捕入后局部反Jlli试骏(GB/T16886.6-1997, dt ISO 10993-6,1996) GB/丁16886.10 毯疗器械生物学评价第10部分z剌激与这发型超敏反应试验(GB/T16886. 10 2005. ISO 10993-10: 2002. IDT) GB/T 6886. 11 E!ii疗器械生物学评价第11部分:全身毒性试验(GB/T16886.11 1997. dt IS0 10993-11 ,1993) GB/

7、T 16886.12 医疗器械生物学评价第12部分=样品市!J备与参照样品CGB/T16886. 12 2005 .IS0 10993-12: 2002. IDT 中华人民共和国虽有典二部3 光菌试验3.1 目的丰试验系将医疗器械或其使提液辈辈种子培养基内，以检验供试品是沓有细菌和巢菌污染。3协2试押jE重露是浓度为9g/L的先商雪在化锅溶液、其他符合( 司苦苦典要求的栋栋液和冲洗液3.3 烹裹设备超净工作台、光学Jii.微镜、恒混培养箱、恒混水浴箱、压力蒸汽灭商器、电热干燥箱。3.4 试验前准备3.4.1 .具灾留与共试液接触的所有苦苦Jl，、成采用可穿军方法?毛商.吸压力蒸汽灾商吉普内12

8、1C30 min，或直童电热干燥箱内160(:2 h , GB/T 14233.2 2005 3.4.2 元首自窒哥哥求3.4.2. 1 无商在操作台或超净工作台局部应符合洁净度100级单向流气区域要求句无菌室在消毒处现究生萨j函，院梭激发气中的阁楼数.方法如下z耿直径约90mmJ费苦苦肌，元的操作泼人融化的修养草草脂摘养慕约20mL.在30C35C培养48h证明元菌厉，取3只培养皿在无商烹操作台或超净工作台平均佼烧m千上涨，然筋30min I没放虫子般30C-35飞;t古学各48h的取出峻王军3只t帝派肌上:Et边的首自落数平均应不超过1个。3.4.2.2商议段走过稳中吕立枪击盘空空气巾的冒

9、商悠然.方法网上。在E试验汗始泼行时才丁汗培养脱施，必试验结束后盖好照上法培养，应符合上述要求。3.5 饿养鹅用于培养常(厌)气菌和真菌的培养基的制备、培养基灵敏度检查及其他各项要求应符合中国药典二苦苦l附录中沉商检王军法的规定Q3.6 供试晶抑菌性验证试验对王长知就可疑的供i戏品，夜泼行元前曾试在最前.El J:I(照巾因药典(工工部门附条1无留校吉普法的规定进行方法验证试验，以确认供试品在i在试验条件下光抑菌i!i性或其抑商活性可以忽略不计。3. 7 试验为?我3.7. 1 供试晶数量网一批辛苦3个11个正在l.1决议品。注其他类型医疗器械可根搅具体情况参照采用。3.7.2 漫媲介质质量浓

10、度为9g/L的:t商氧化纳恪液或其他符合中国药典要求的稀释模和冲洗液。3.7.3 供试液制衡优先采用将供试品或具有代农性的各部分宣接投放入培养基内培养。如共试品不适宜直接投放，可按下功j方法制备供试液，成假设提介质充分洗提供试品的设提表丽。供试液制备Jl按无首自操作法进行，在制备局2h内俊用。根据首供试品具体特性选择下列i且用方法:a) 管类苦苦3这2按管内表附和1络10cm流过管内腔1mL 盖挺介质，流篮约为10mL!min , b) 容器类器具.容器内已装有液体的面I直接抽取容器内液体为供试液.穷苦容器按容器内表丽积每10cm加人普查提介版lmL，依据数次bc) 实体类器具:实体类器具按表

11、面积每10cm 1川人浸提介质1mL，振擦数次。3.7.4 接种、培养和观察根据供试品具体特性选择中网药典(二部门附录中元商检夜法规定的适宜接种方式.以无菌操作法进行。f共试品的场养和观察按中国药典(二部)附录中无菌校1是法的规定。3.7.5 络巢判定按中国药舆(二部门附录中无荫被查法的规定。3.7.6 试险报偿试验报告中宜绘出下列信息.a) 供议以名称sb) 生产批号和(或)灭菌批号;c) 供试割草制备方法:d) 接种方式，已)怨日观察然娘:1) 结果判定。2 GB/T 14233. 2-2005 4 细菌内毒素试验4. 1 目的本试验为中国药典(二部门附录细菌内毒素检查法中规定的凝胶法，系

12、利用锺试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判定供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。如经检验证实供试品对细菌内毒素试验有不能排除的干扰作用则不适宜采用本试验。4.2 试剂细菌内毒素国家标准品、细菌内毒素工作标准品、堂试剂、细菌内毒素检查用水。注:细菌内毒素检查用水系指符合中国药典(二部川附录中细菌内毒素检查法规定的灭菌注射用水。4.3 主要设备超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、电热干燥箱、旋涡混合器。4. 4 试验前准备4.4. 1 器具处理试验所用器皿需经处理除去可能存在的外源性内毒素。玻璃器皿置电热干燥箱内180C干烤至少2 h.或250C干烤至少30min。塑料器皿置30%双氧水中浸

13、泡4h.再用细菌内毒素检查用水充分冲洗后置60C烘干备用。4.4.2 重试剂灵敏度复核试验4.4.2.1 当使用新批号的盆试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行董试剂灵敏度复核i式验。4.4.2.2 试验步骤按中国药典(二部门附录中细菌内毒素检查法规定进行。4.4.3 供试晶干扰试验4.4.3. 1 对未知或可疑的供试品初次进行细菌内毒素试验之前应先进行干扰试验，以检验供试品对细菌内毒素试验是否有抑制或增强作用，以及其他影响细菌内毒素试验准确性和敏感性的干扰作用。当主量试剂、供试品来源、供试品配方或生产工艺有变化或其他任何可能影响细菌内毒素试验结果的试验条件改变时，应重新进行

14、干扰试验。4.4.3.2 每种医疗器械产品应取3批并分别使用不少于两个制造商生产的堂试剂进行干扰试验。供试液制备按4. 3规定进行。4.4.3.3 试验步骤按中国药典(二部门附录细菌内毒素检查法中凝胶法规定进行。4.4.3.4 供试品如对细菌内毒素试验有干扰作用.可选用下列适宜方法排除干扰:a) 使用更灵敏的堂试剂对供试液进行更大倍数稀释，b) 采用无热原氨基甲烧缓冲液稀释供试液gc) 采用无热原氢氧化锁戎盐酸溶液调节供试液pH值在6.O8. 0范围内;d) 采用阳离子缓冲液(MgSO.或MgCl，)稀释供试液以调节离子浓度。4.5 试验方法4.5. 1 供试晶数量同一批号至少3个单位供试品。

15、4.5.2 漫提介质细菌内毒素检查用水。4.5.3 供试液和j备根据产品标准规定的细菌内毒素限值确定浸提介质体积，选用下列适宜方法制备供试液a) 管类和容器类器具用细菌内毒素检查用水授泡器具内腔，在(37士l)C恒温箱中浸提不少于1 h; b) 小型配件或实体类器具置元热原玻璃器皿内，加人细菌内毒素检查用水振摇数次，在3 GB/T 14233.2-2005 (37士1)C恒温箱中浸泡不少于1h 供试液贮存应不超过2h 注I.浸提介质体积计算公式VL/ 式中zV 浸提介质体积，单位为毫升(mL); L 产品细菌内毒素限值，单位为细菌内毒素单位每件(EU/件h 所用道试剂灵敏度标示值，单位为细菌内

16、毒素单位每毫升(EU/mL)。注2.输液、输血、注射器具细菌内毒素限值在产品标准中规定，宜尽可能低。推荐输液、输血、注射器具细菌内毒素限量每件不超过20EU.与脑脊液接触和胸内应用医疗器械每件不超过2.15EUo 4.5.4 试验步骤和结果判定按中国药典(二部门附录细菌内毒素检查法中凝胶法规定进行。4.5.5 试验报告试验报告中宜给出下列信息:a) 供试品名称pb) 生产批号;c) 供试液制备方法;d) 细菌内毒素限量;e) 结果判定。5 热原试验5. 1 目的本试验系将医疗器械浸提液注人家兔静脉，在规定的时间内观察家兔体温升高的情况，以判定供试品是否具有潜在的材料致热作用。5.2 试剂质量浓

17、度为9g/L的无菌无热原氯化纳注射液。5. 3 主要设备超净工作台、电热干燥箱、电热恒温水浴箱、压力蒸汽灭菌器、热原测试仪。5.4 试验前准备5.4. 1 器具除热原与供试液接触的所有玻璃器皿置电热干燥箱内180C干烤至少2h.或250C干烤至少30min。也可采用其他适宜的方法除热原。5.4.2 测温器具家兔体温测试应使用精密度为士O.IC的热原测温仪或脏门体温计。5. 4. 3 实验室环境在试验前1d2 d.供试用家兔应处于同一温度环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于5C.实验室温度应为17C28C。在试验全过程中，室温变化不大于3C.避免噪音干扰。5.4.4试验用家兔按中国药典(二部

18、门附录热原检查法中规定挑选试验用兔。每一家兔的使用次数应不超过10次。5.5 试验方法5.5. 1 供试液制备按GB/T16886.12规定选择适宜的浸提条件。4 GB/T 14233. 2-2005 5.5.2 试验步骤按中国药典(三部1)附录热原检查法中规定选行，家兔注射剂量为10mL/kg, 5.5.3 结果判定供试品经初试或复试后符合中国药典(二部门附录热原检查法中规定时，均判定元材料致热作用。5.6 试验报告试验报告中宜给出下列信息:al 供试品名称;bl 生产批号，c) 供试液制备方法sdl 注射剂量;e) 家兔体温记录;f) 结果判定。6 急性全身毒性试验6. 1 目的本试验系将

19、医疗器械浸提液注入小白鼠静脉和腹腔内，在规定时间内观察小白鼠有无毒性反应和死亡情况，以判定供试品是否具有潜在的急性全身毒性作用。6.2 试剂质量浓度为9g/L的氯化纳注射液、新鲜精制植物油。注=本部分各试验中所用新鲜精制植物油推荐采用符合美国药典)24版规定的棉籽油或芝麻油，也可使用其他经验证证实无生物学毒性反应的植物油。6.3 主要设备和器具压力蒸汽灭菌器、动物天平、皮下注射器。6.4 试验前准备6.4. 1 器具灭菌与供试液接触的所有器具置压力蒸汽灭菌器内121C30 min , 6.4.2 试验动物准备6.4.2. 1 试验采用健康、初成年小白鼠，同一品系并同来源，雌鼠无孕，体质量17g

20、23 g。在试验前使小白鼠适应实验室环境。做过本试验的小白鼠不得重复使用。6.4.2.2 每种浸提液用小臼鼠10只，随机分为供试品和浸提介质对照两组，每组5只。复试时每组取18 g19 g的小臼鼠10只。6.5 试验方法6.5. 1 供试液制备按GB/T16886. 12规定选择适宜的浸提条件，每种供试品制备质量浓度为9g/L的氯化销注射液和植物油两种浸提液。同条件制备浸提介质对照液。6.5.2 供试液注射6.5.2.1 自尾静脉分别注入氯化纳注射液浸提液和介质对照液，以不超过0.1mL/s的恒定速度注射，注射剂量为50mL/kg, 6.5.2.2 由腹腔分别注入植物油浸提液和介质对照液，注射

21、剂量为50mL/kg。6.5.3 注射后动物反应观察注射完毕后，观察小白鼠即时反应，并于4人24h、48h和72h观察和记录试验组和对照组动物的一般状态、毒性表现和死亡动物数，在72h时称量动物体质量。动物反应观察判定按表I规定。5 GB/T 14233. 2-2005 表1毒性反应观察反应程度症状正常，无症状注射后元毒性症状。轻微注射后有轻擞症状但无运动减少、呼股困难或腹部刺激症。中度注射后出现明显的腹部刺激症状、呼吸困难、运动减少、眼险下垂或腹泻(体质量下降至15g-17g之间)。重度注射后出现虚脱、发吉甘、震颤或严重腹部剌激症状、腹泻、眼险下垂或呼吸困难(体质量急剧下降，一般低于15。死

22、亡注射后死亡。6.5.4 结果判定6.5.4.1 在72h观察期内，试验组动物的反应不大于对照组动物.则判定供试品无急性全身毒性反应。6.5.4.2 如试验组动物有2只或2只以上出现中度毒性症状或死亡，则判定供试品有急性全身毒性反应。6.5.4, 3 如试验组动物出现轻微毒性症状，或不超过l只动物出现中度毒性症状或死亡，或虽无毒性症状但组内动物体质量普遍下降，则另取小白鼠10只为1组进行复试，复试结果符合6.5.1.1要求，判定供试品无急性全身毒性反应。6.6 试验报告试验报告中宜给出下列信息:a) 供试品名称;b) 生产批号;c) 供试液制备方法gd) 注射剂量;e) 动物反应情况;f) 结

23、果判定。7 溶血试验7.1 目的本试验系将医疗器械与血液直接接触，通过测定红细胞释放的血红蛋白量以判定供试品的体外溶血程度。本试验不适用于评价带药剂的器械。7.2试剂草酸仰、质量浓度为9g/L的氯化纳注射液、新鲜抗凝兔血。注.采集时间不超过24h的新鲜拘橄酸俐抗凝人体全血如经验证确认远月1时可替代兔血用于本试验。7.3 主要设备电热恒温水浴、分光光度计、离心机。7.4 供试晶制备7.4. 1 由器械各组成部件称取15g，管类器具切成约。.5cm长小段;其他类型器具切成约0.5cmX 2 cm条状或相应大小块状。7.4.2 器械如为低密度材料或其他不适宜采用7.4.1规定的样品质量的情况下，可按

24、GB/T16886. 12 规定的浸提比例制备供试品，切成7.4.1规定的尺寸。7.5 新鲜稀释抗混兔血和j备根据试验用血量由健康家兔心脏采血。如采血10mL，加质量浓度20g/L草酸饵溶液0.5mL.制GBjT 14233.2-2005 备成新鲜抗凝兔血。取新鲜抗凝兔血8mL，j日质量浓度9g/L的氯化锵注射液10时，稀释。7.6 试验方法供试品组每管加入供试品5g，或是在7.4.2的情况下按GB/T16886. 12规定的浸提比例加入供试品，再加入氯化纳注射液10mL;阴性对照组每管加入氯化纳注射液10mL;阳性对照组每管加入蒸馆水10mL。每组平行操作3管。全部试管放入恒温水浴中(37土

25、1)C保温30min后，每支试管加入0.2mL稀释兔血，轻轻混匀，置(37士1)C水浴中继续保温60mino 倒出管内液体以800g离心5mino 吸取上清液移人比色皿内，用分光光度计在545nm波长处测定吸光度。7.7 结果计算供试品组和对照组吸光度均取3管的平均值。阴性对照管的吸光度应不大于0.03，阳性对照管的吸光度应为0.8土。.3，否则应重新试验。供试品溶血率按式(1)计算式中A一一-供试品组吸光度;B-一阴性对照组吸光度pC 阳性对照组吸光度。7.8 结果判定A-B.，.， 溶血率=一-x100% C-B川根据医疗器械预期临床用途和器械材料特性确定适宜的合格判定指标。注:按丰试验检

26、验医疗器械时，合格判定指标一般规定为溶血率应小于5%。7.9 试验报告试验报告中宜给出下列信息:a) 供试品名称;b) 生产批号;c) 试验方法;d) 各组吸光度;e) 供试品溶血率;f) 结果分析和判定。8 细胞毒性试验8. 1 目的( 1 ) 本试验系将医疗器械浸提液接触培养细胞，通过对细胞形态、增殖和抑制影响的观察，评价供试品对体外细胞的毒性作用。8.2试JliJ氯化纳、氯化钢、氯化钙、硫酸镜、磷酸氢工纳、磷酸二氢仰、氢氧化纳、葡萄糖、盼红、台阶蓝、乙二胶囚乙酸二纳(EDTA)、膜蛋白酶、Eagle培养基、RPMI1640培养基、胎(小)牛血清、青霉素(;C纳盐)、硫酸链霉素、乙醇、苯盼

27、、二甲基亚枫(DM5OJ。8.3 主要设备和用具超净工作台、工氧化碳(CO，)培养箱、恒温水浴箱、电冰箱、倒置显微镜、光学显微镜、压力蒸汽灭菌器、抽滤瓶、磁力搅拌器、培养板(皿)。8.4 试验前准备7 GB/T 14233.2-2005 8.4.1 榻具灭商与供试液接触的所有器反应采用可靠方法灭荫，室主压力蒸汽灭商器内121C 30盯lln，碗里景电热干燥箱内160C2 h , 8.4.2 细胞培养液、细胞消化液、平衡盐溶液制备恢附录C绘出的方法统其他经确认送3立的方法制备。8.5 试骏方法8.5.1 细胞株试验用细胞株巧采用ATCCCCLlNCTC clone 929(小鼠成纤维细胞)J或其

28、他适宜细胞。试验采m传it48 h72 h 1:长;旺盛的细胞。8.5. 2 童提介质食nIl青元肌i肯细胞精养液、烦:缀浓it为9日!L的叙化纳注射液。8.5.3 对然样品8.5.3.1 阴性对照样品可采用经确认过的不产生细胞毒性反成的材料，例如高密度乙烯。8.5.3.2 阴性对照样品可采府经确认过的i牙n重况细胞毒草性反应的材料，例如府有机锡作稳定剂的童在幸在乙烯、股篮浓度为5g/L的全在附带5派成体积分被为5%的二昭著器lI.iJi (DMSOl溶液。8.5.4 供试液制备8.5.4.1 元前供试品庭接取样制备供试液。来灭商供试品1主采用与成品相同的灭荫i:t和或其他i古i:j法火商。8

29、.5.4.2 1:共i式;在1#IJ备方讼按G/丁16886.，5的规定。8.5.5 细胞悬液制衡4夺已培养48h.-72 h生长旺燎的细胞用消化液消化后加入细胞煽养液，吸管吹打i昆匀后用ll在计数极夜显微镜F计数，拨到(2)计算细胞窃it，CR?x l04 主运中:C一细胞密度.单佼为个每毫升(个/mL)! n一一计数板阴角四大格内细胞总数，单位为个。根据实测细胞密度，加人i垂直立细胞培养挺直配制成试验婆求密度的细胞忿液备用。注:也可来1131虫Jl(仪测定细脱节百I.8.5.6 试骏吉普骤口I选择下列之一方法进行试骏i.) 囚瞠盐(M丁f)比色法. ( 2 ) 将自己制虫子的lXl0!mL

30、细胞悬液攘种子96于L培养板，设空白对照、阴性对照、阳性对照和供试品级，每组各设及少6孔.在等孔然科100L细胞量最液E壁CO，声字字箱(含体积分数5%二氧化碳气本)37C土寄养24h后，弃么原t音养液。2自对照统加入新鲜细胞培养霄，阴性对照生日加入阴性对照JH登极液，阳性对照级加入阳做对照溶液或阳性对照品浸报液，供试品主且加入i式骏样品设提液，每孔100L，j景Cl培养箱继续培养72h。予更换培养液后的72h.查显微镜下观若要细胞形态。每子L力口人20LE在釜浓度为5g/L的MTT溶液，继续然养4h放弃岔子L内液体，仙人150fLDMSO，遥帐号毒者曾上除荡10min，在国替你仪570nrn

31、利630 nrn波长下测运i吸光度，然:it(3)讨算相对增E董事情GR)。RGR fxM . ( 3 ) 戏中8 GB/T 14233. 2-2005 RGR一中日对增殖巢，%;A 供试品生且(阴1虫、阳攸i!jl吸Jt度;Ac-空白对照全且吸光度。根据RGR按表2分级标准1日l定。阴J除对照级的反1.i!lJ;且不大于1级.阳性对照生且奈少为3级反应。如阴性H理组和限性Xi照组反应不成立时应重新试验。表2细胞毒性反应分级级别相对增确率/%。工活1001 80-99 2 5079 3 .3049 4 。-29b) 显微镜观察法将配制虫子的lXlO!mL细胞悬液接种于直径35mm培养皿内，符皿

32、2mL，置COz培养箱(含体积分数5%二二氧化碳气体)37C培养孩J!i1C食岛生底细胞形成。弃去原培养液。阴性对照组加入阴性对照品浸提液，阳性对!ffi组加入阳性对，l!液或阳性对照品浸报液，供试01栩如日人试在盘中丰，l，设提液，每1IU.辛辛加2mL，每貌平行操作3肌，景是CO，J青养幸自却遭续场养72 h 望t.1Il微镜F观察，拨号是3分级你F在判定。阳做对照绷I.i!l沟。级反1点，阴性对照规王军:p为3级反肢。如阴性对照组和阳性对照级反应不成立时成重新试验。表3细胞嘟怯反应分级级别反成程度反应观察。无相18包形恋正常.贴量丧生长良好.I!浆内街离散颗粒，先细胞溶解l 极轻至多20

33、%的细腻蛊厕形，疏松贴壁无胞来内颗粒g偶见细胞梅解2 轻嗷至多50%的细胞最圆形，无胞浆内颗粒a明显可见细胞溶解和细胞问穷民3 中度至多70%的细胞垒圆形或榕解4 百Ii:!l!:划H也E在凡事究余破坏注其他适宜的方法见GBjT16886. 5. 8.6 结果如rJ:i:在阴性对照和阳性对照产生预期反庶的情况下，分析判定供试品细胞毒性反应税度。泼1，本i式骏f佳桦的供lt液检验浓1为100%，滔附于自豆!II输割草、输Jtn和校射梯具。j;:fm统观I2lff器械亦盯粮搅临床应用情况调整供试液检验浓度，如100%、75%、50%、25%等。l 2，按中试验检验ff普普械时，一般认为可攒受的细胞

34、襟悦rUl为不太子2级。8. 7 试验报告试验报价1交给tfjT列f商息:a) 供试品名称2b) 生产才比平安sc) 供试液制备方法;9 GB斤.14233.22005 d) 式验用培养基、细胞株和阴性、阳性及其他对照品;e) 试验方法g1) 细胞反!波和其他情况;g) 观察结果;h) 结巢判定。9 致敬试验(最大知.法)9.1 目的本试验系采用医疗锵械没提液与豚鼠皮肤接触，以评价供试品在试验条件下引发迟发型超敏反应的据毒草巨性9.2 试剂质最浓度为9日!L的氯化纳注射液、新鲜精制模物油、-硝秦王氯苯(dinitrochlorobenzene.DNCB)、十二;院基硫酸纳、弗氏完全佐剂。9.3

35、 3:.i!设备和路具服力蒸汽灭鼠桥、电剃刀、e，:n主射器、玻璃研钵。9.4 试验前准备9.4.1 器具灾菌占3供i戏?班饺触的所有将具里l)J蒸汽灾巨自然内121C 30 mn , 9.4.2 试骏动物准青青按GI主!T16886.10的规定自9.4.3 弗氏完全佐剂和j备9.4.3.1 光水平毛脑与液体;q踏的体积比沟4: 6(冬珍使用比例为3: 5)。将流水羊毛附加热然解后取40mL宽研钵巾，稍冷却1百.Illi汗R野草组加液体在可麟，60 mL液体石贼加。望更力蒸汽灭自自然内121 C 30 min.即制备成弗氏不完余攸剂.4C保存在专用。9.4.3.2 在弗氏不完全佐剂中按4mg-

36、5 mg!mL加入死的或减诲的分校杆菌(如卡介筒或结核杆2期)，即得热氏%公彼剂。9.5 试验方法9.5.1 漫提介质质量浓度为9g/L的氮化纳法身I液、新鲜精制植物油。9.5.2 阳性对照液质f鼓浓度为1日!L的二二硝3盖章在来海液然其他，能产生栩成网饿反应立的液体。9.5.3 供试液制备按GB/丁16886.10规定选择适宜的浸提条件，每种供试品制备质最浓度为9g!L的氯化饷注射液和/或植物汹汹挠液。9.5.4 试验步骤和结果判定接GB/T16886. 10规定的最大JlJ:l景致敏试验进行操作。9.6 试验报告i式3金报告中发绘出下列f音息za) 供试品:t称;b) 生产批号;c) 供试

37、液#JlJ备方法;10 GB/T 14233.2-2005 d) 试验剂量;e) 试验部位观察记录;f) 结果判定。10 皮肉反应试验10. 1 目的本试验系将医疗器械浸提液注入家兔皮内，以评价供试品在试验条件下对接触组织的潜在刺激性。10.2 试剂质量浓度为9g/L的氯化纳注射液、新鲜精制植物油。10.3 主要设备和器具压力蒸汽灭菌器、皮下注射器。10.4 试验前准备10.4. 1 器具灭菌与供试液接触的所有器具置压力蒸汽灭菌器内1210C30 mino 10.4.2 试验动物准备按GB/T16886.10的规定。10.5 试验方法10.5. 1 浸提介质质量浓度为9g/L的氯化纳注射液、新

38、鲜精制植物汹。10.5.2 供试液制备按GB/T16886.10规定选择适宜的浸提条件，每种供试品制备质量浓度为9g/L的氯化纳注射液和植物油两种浸提液。10.5.3 试验步骤和结果判定按GB/T16886.10规定的皮内反应试验进行操作。10.6 试验报告试验报告中宜给出下列信息zu 供试品名称:b) 生产批号pd 供试液制备方法;dl 试验部位观察记分ge) 结果判定。门植入试验11. 1 目的本试验系将医疗器械材料植入动物肌肉或皮下组织内，通过观察植人后试样周围组织反应程度，以评价供试品的生物相容性。本试验适用于预期与人体内组织接触的、采用非降解聚合物材料制造的医疗器械生物学安全性评价。

39、注:丰试验还可设i十为同时对供试品的亚急性(亚慢性毒性作用进行评价。11. 2 试剂戊巴比妥纳、硫喷妥锅、2%腆町、75%乙醇溶液、质量浓度为9g/L的氯化饷注射液。11 GB/T 14233.2-2005 11.3 =t接设备和用具压力蒸汽灭菌器、电热干燥箱、常规外科手术器械、穿刺针。11. 4 试验前准备11. 4. 1 器具灭菌!:j;民t出占自然触的所有吉普臭虫壁E压力蒸汽只陶器内121C30 mn ili:电热干燥靠自内160C2 h. 11. 4. 2 试验动物准备校GB/丁16886.日的娩J!l;非非适宜的试骏动物。11. 4. 3 供试晶和对照样晶制衡投GB/T16886.

40、6的规定制备相应尺寸的皮下或肌肉植入样品。将植入中丰品清洗干净后说干，告圣人75%乙廓游液内设泡20min成采用其他i草草E方法灭商，植人前用质最浓度为9g/L的氯化纳注射液楼洗。11.5 试验方法11. 5. 1 动物麻醉和消蜷动物麻醉可采用质量生浓度:30日/L!lI;巴比妥制成质簸浓度20日/1.硫喷妥俐，亦可采用其他j泛应麻醉剂。按外科常规子术要求以2%腆自T和75%乙醇溶液消毒试验区域。泼:推荐的功物麻醉方法g家兔用质撤浓庶30g/L戊巴比接椭静脉注射1.0 mL!kg.成质量重浓度20g!L硫喷妥呐静脉注射L3 mL/kg-2.5 mL/kg，火白鼠、Ij、鼠和家兔用质盘浓度20g

41、/L戊巴比妥销腹腔注射2.3mL/kg , 大白鼠用质最浓度10g/L硫喷泉饷静脉或股股放射5.0mt!kg-l0 o mL/阅。11.5.2 试验步骤根据供试晶具体特性选择下列适用方法:al 皮下组织植入试验按G日/丁16886.6-996中第4意方法进行，常用动物背部榻人。问用手术JJ片切开榄人点皮肤，用止血错分离皮下组织，制备约1cm.2 cm的皮下囊榄人i式样，用医用缝合线缝合皮肤切问。亦可用穿刺针与皮肤成30角刺入皮下，取一探条捅人针头内将试悴般人底下组织内。注.道￥针榄人法对试验部位组织的创伤轻微，可降低由于手术创伤造成的对试验结巢的干扰。bl 肌肉模入试骏按GB/T16886.6

42、-1996中第5尊重方法并参照、al法迸衍。优先采用王若针植入法，可用手术刀片切很小的切口，亦可I支援用穿刺针刺人皮肤内，用探条将试样撒入深度约cm2 cm的肌肉内a采用手术植入法时，111开植入点皮肤后分离皮下组织和筋膜，用止血钳分离肌肉，将试样;在人肌肉内。用B泛用盘壁tE盘盘盘整合肌筋H革初皮肤tn口。精人时如有过屡出现，6s1i在持另位鳖植人。11. 6 铺观察11. 6. 1 临床观察被人月ild，3d和5d观察梳人点皮肤反肢，有无tllJ!i1、红肿初试样排tll等#非常现象11. 6. 2 解剖观察根击居供i式Rt评价有需求确定远H:的极人周期榄入后一般可于1网、4阀、12阅、2

43、6网就更长则期时分别元痛处死试验动物，解剖后肉眼观察植入部位组织有元异常病变。切取包裹试样周围约0.5cm-1. 0 cm的组织，烧烦?量分数为10%的Ijl辈溶液命则吨。注:甲田基溶液用质量浓度为9g!L的氯化销溶液进行10倍稀释。11.6.3 组织病现学检资将阂定组织石蜡包壤后切片，进行HE和VG两种染色，在光学显微镜下观察，比较供试品与对照12 GB/T 14233. 2一2005品周因组织反应，如炎症细胞和其他细胞涛在情况、试中丰阅凶纤维草草院形成和i式样与组织界副处的其他异常情况等。11.6.4 组织反应分级11.6.4.1 撒荐的炎性反应分级见表4，装4炎性反应分级级别炎性反应。试

44、年羊肉副主卡兑炎性细胞I 试桦阅f前仪见极少直是淋巴细胞H 试样周围可见少擞嗜中性较细眠初淋巴细脚.(1具见;核异物院细胞田试样周即可见以嗜中做极细胞浸润为:t的炎t1反底，并可见领织细胞、吞喉细胞、j毛细血管和小血管11. 6. 4. 2 推荐的纤维裳腔形成分级见袋5.亵5纤维曾脸形成分级级 纤报癫胶形成。囊里量较薄，由少最胶原纤维和卜2展纤维细胞组成I 囊壁有变薄而致密趋势，由少量胶原纤维细胞组成.偶见纤维母细胞E i践中非周圈形成.腔结衔，主姿由纤维母细胞、JBi原纤维和少量纤维细胞组成m t式样倒圆形成疏松的集蟹，问且毡!lI血管带口纤维世击细胞拢，如i式骏设计为问时附(tI(试品的l

45、lE1单位m慢性)全身理雄性作用避行评价，成tli照G日!T16886. 1l中相关方法制革;部分附录A的规定增加相ri项目的枪簸，11.7 结果判定分析比较供试占百阴性X;f，奇品之问组织反应的主在外，综合评价供i式品生iir古体组织间的生物相IL泼丰试骏合格勒a指栋的确定可夜验诚的然础上(比如与同类骂自己然临床认町的苦苦械泼行比较规定阪疗吉普械进性反应和囊腔形成等级。11. g 试验报告试导费报告巾主Z纷tf:jf列俄息-a) 供试品名称;b) 生产批号9c) 试验lf1hd) 临床观察情况，e) 解剖观察情况，f) 组织病王理学观察直在艇;自)然疑分析和判定。1, GB/T 14233. 2一2005附录A(资料性附录)亚急