1、GB/T 17999.6 1999 前 E二禽脑脊髓炎病毒(AEV)感染常用的监视l方法有琼脂扩散试验(AGP)和胚敏感试验CES).二者均可对AEV感染做出确诊。ES已在我国SPF鸡场的AE监测中得到应用和验证，本标准在此基础上，规定r SPF鸡胚敏感试验。SPF鸿滋生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和19种SPF鸡敝生物学检测厅法。本标准为(SPF鸡胚敏感试验。SPF鸡做做物学检测方法还包括以下部分.Gll/T 17999. 1- 1999 SPF鸡红细胞凝集抑制试验tGB/T 17999.2 -1999 SPF鸡血清中和试验;c;巳jT17999.3- 1999 S
2、PF鸡血清平板凝集试验，G8jT 17999.4 -1999 SPF鸡琼脂扩散试验，GB/T 17999.5- 1999 SPF鸡酶联免疫吸附试验;GlljT 17999. 7 - 1999 SPF鸡鸡向摘抄门氏菌检验;Ir 17999. 8- -1999 SPF鸣试管凝集试验;(;8/T 17999.9 -1999 SPF鸡|间接免疫荧光试验。本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准坦1;单位农业部实验动物研究中心、山东省农科院家禽研究所。本标准t要起草人赵立红、陈德威、张秀美、张冰、李军。S:-: 中华人民共和国国家标准SPF鸡胚敏感试验SPF
3、 chicken-Embryo su.ceptibility te.t 1 范围本标准规定了胚敏感试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。本标准适用于SPF鸡感染禽脑脊髓炎病毒后的抗体监测。2 原理GB/T 17999. 6 -1999 Van Roekel毒株是禽脑脊髓炎病毒的一株胚适应毒株，具有高度嗜神经性。对非免疫鸡群的鸡胚有致病性，引起肌肉营养不良、运动性降低、足趾卷曲等特征性病变。免疫鸡群的鸡胚对经卵黄囊接种的病毒有抵抗力。3 试剂和器材3. 1 试作l3- 1.1 AE-Van Roekel病毒(0.2mL含100E1D50)。3. 1. 2 SPF击。3- 1. 3 被中电蛋。
4、3- 2 器材J 2. 1 1 mL注射器。3.2.2 7针头。3.2.3 恒温培养箱。3- 2. 4 超净工作台。3-2.5/J、型孵化器。4 操作程序4. 1 取被检茧放SPF蛋孵至6日龄。4.2 取6日龄被检鸡胚，每胚经卵黄囊接种0.2mL含100EID的AE-Van Roekel病毒液，接种完毕用蜡封孔，同时取6日龄SPF鸡胚接种与不接种病毒作为对照。4. 3 接种后的鸡胚，连3TC-37. 5C孵化器中孵化，每天照蛋一次，取出死亡鸡胚，接种后第12d取出全部鸡胚待检。4.4 观察病变z非免疫鸡的鸡胚感染VanRoekel后出现特征性病变，早期为胸腹部肌肉、皮下水肿.当接种后1od-1Zd解剖活胚时，见腿肌萎缩、足趾卷曲，注意与接种、不接种SPF对照鸡胚对比观察。5 结果判定51 当接种SPF对照鸡胚均呈禽脑脊髓炎病毒所致的特异病变，不接种SPF对照鸡胚无特异病变时，国家质量技术监督局1999-11-10批准2000 -04一01实施8 试验结果可靠。5.2 判定GB/T 17999.6-1999 阴性100%鸡胚有特征性病变，表明此鸡群无禽脑脊髓炎病毒抗体，属非感染鸡群。阴性50%以下的鸡胚有特征性病变，表明此鸡群有禽脑脊髓炎病毒抗体，属感染鸡群。R:)
