GB 19163-2003 牛蛙.pdf

1、ICS 65. 150 器52中华人民共和国国家标准GB 19163 2003 牛蛙憋在11frog 2003心6心4我布2003-忧心1实施中华人民共和国发布国来服盘监督检验检班总网前窗本标准的第5j宫、第7:1在为强制枝，其余为推荐性。本标准的附录B为规范性附录，附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和阂农业部提出。本标准由中国水产科学研究院长江水产研究所归口白水标准起丑事很位:溯F留农业大学、湖m省咨牧水产阶。2扣在古准二主要草草草人.3:腕i肾、充学、肖克等、tfll且光、IOi;跃、陈立彬、李松宵。GB 19163一2003GB 19163凶03牛盹1 范围本标准给出了牛蜒(Rana

2、catesbeiana Shaw)的发要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特恢，以及检测方法。本标准滋ffl子牛娥的种质检测与鉴定。2 规范性引IJ!I文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否问使用这些文件的簸新版本。凡是不注日期的引用文件，其簸新版本适用于本标准。GB 17716 苦苦鱼3 名称与分类3. 1 学各牛般Rana cat时beianaShaw. 3.2 分类位置量元尾目(Anura)、蜒科(Ranidae)、蛙腐(Rana)。4 术谱和定

3、义4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 下列J;j电话和l定义滔用于本标准。头长head length 吻端至上下锁关节后缘的长度.头head width 左右锁关节问之距离。眼役eye diameter 眼阪葳役。戴膜径drum diameter 鼓膜直径。前曹长forearm length H才关节姿多蒋H曾来端的长度。指踊D序finger(toe)order 各指(趾)由短到长的顺序。GB 19163-2003 4.7 婚垫nuptial pad 雄蛙第一指内侧较发达的肉瘤，与生殖活动有关。4.8 后肢长hindleg length 泄殖孔至第4趾末端的长度。4.9 足长foo

4、t length 自内隙突的近端至第四趾末端的长度。4.10 体长body length 吻端至尾椎末端的长度，5 主要形态构造特征5.1 外部形态特征5.1.1 外形身体粗短，头部宽而扁，略呈兰角形，1对圆形鼓膜位于眼后方，鼓膜颜色与头部背面颜色基本一致，沿眼后到鼓膜上方有明显的皮肤榴。皮肤较光滑，背部略显粗糙，有极微细的肤棱。前肢4指，无牒，指序为日、I、W、皿，雄蛙第一指内侧有发达的婚垫，生殖季节显著增大，雌蛙没有婚垫z后肢特别发达，5趾，全躁，蹊不完全达趾端，趾序为I、E、V、皿、IY.体色随栖息环境、年龄、性别、营养状况而异。通常头部为绿色，背部为绿褐色、黄褐色或黑褐色，有深浅不一的

5、不规则状斑块或斑纹，腹部为灰臼色，有暗灰色斑纹。成熟雄蛙下颁部为金黄色，雌蛙则与腹部颜色一致。牛蛙的外形见图1。a) 背面观b) 腹面观囤1牛蛙外形(告)5. 1.2 可量性状1龄2龄、体长10.3 cm 16. 1 cm、体重175.2 g548. 7 g的牛蛙，实测可贯性状比例值见表1.2 体长/头长3.093士0.2472.981士0.2435.2 内部构造特征5.2.1 声囊头宽/头长L 162土O.61. 168士0.089表1实lliIjiiH毒性状比例值靠在膜极/1Il役质股长/体长o. 94HO. 098 1. 467土0.0781. 338土0.1541. 475 :1: 0

6、.102 雄虫查明都有1对内荫睡，开口子口顺胶;赚般无F旨睡。5.2.2 脊椎I臣J:i:/前臂J:i:1. 609尘。1191. 613 :1: 0. 115 颈椎骨1枚、躯椎骨7枚、荐椎骨l枚、尾杆骨1枚。属前凹后凸的参差型锥体。5.2.3 生殖系统GB 19163 2003 IV趾怔/IV-V 趾睽宽1. 770士0.2421. 708土0.244雄体有一对浅货色卵自由形的精巢，保留有退化状态的缪鞭1fX:1雪。雌丰有一直才囊状纺构的卵巢，卵巢内含有淡货色的机期卵和动物极为黑色、微物极为事L白色的成熟卵ii，U靠近成熟卵。饺更应腺的前方各有个指状脂肪体，做成熟前为白色或淡黄色，做成熟蔚为

7、黄色，大小随季节及读养状况等阙絮变化。6 生长与繁殖6.1 生长不问月龄组的牛蛙体长、f年3量的实测值见我2.生长j程、体长与体主量关系式兑附远走A.袋2不陶月龄组牛蜒的体长、体重测债月龄/份。1 2 3 4 以俨6 7 8 4.63 7.21 10.20 12.24 13.47 14.33 14.96 15.58 16. 15 体长/cm:1:0.31 土0.43二1:0.28士0.39士0.29土0.35士0.42土0.52土0.4711. 09 42.43 115.73 202.40 294.45 373.82 44 1. 32 500.84 546.55 体道/g土O.80 土4.61

8、士15.02土17.56土17.77士21.15 士28.26土34.13 :1: 38.97 6.2 繁殖6.2.1 性成熟年龄与体重l龄2龄。雌蚊350g以上，雄蛙300g以上。6.2.2 产卵攀节北方地阪沟5月8月份，湖阀、湖北等省为4月9月份，广东、裕悠等省为3月-11月份，滔宜产卵水说20C30C。6.2.3 产卵次敷与类型回做成熟雌蛙每年可产卵l次-2次，并以春季产卵为主。卵球形，卵径1.2 mm-l, 5 mm，动物极深黑色，植物极乳白色，产出的卵外包胶质膜，相互粘连成单层或朗状卵块。6.2.4 怀卵:1:性成熟的雌蛇生殖季节卵巢系数为12.6%-27.6%.绝对怀卵篮(5.0土

9、0.77)X 10粒，相对怀卵缝(106.7士8.69)粒Ig.7 遗传学特性7.1 细胞爆传学特性牛蛙体细胞染色体数，2=26，臂数(NF)，52，核型公式:2n=22m十4sm。牛蛙染色体组缎见阁2。GB 19163 2003 点 X K式x抓到xx J飞1tx x x .)( 飞1n 10 周2牛岐染色体细翅罔7.2 生化遗传学特性牛抵心肌的乳酸脱氢酶(LDH)问I酶电泳酶i昔见图3，间工酶酶带扫描图见图4，酶带的活性强度见表3。町甲吵峭萨-0tDH4 i zF r 0 I LDH1 + 图3牛般心肌LDH罔工酶电泳酶谱表3牛雄心肌LDH同工酶酶带活性强度8 检测方法8.1 生物学性状测

10、定rij堂性状用分观测定、直尺谈数，精确到0.1cm;体!li:用电子将称耿，精确到0.1g. 内部构量是特征采JfH器制观察，对照标准规定。8.2 繁殖力的测:在繁琐象节，解剖米F卵的搬来蚁，取出卵巢，用电子平平称絮，再称职1.0g卵，两个样品，分别i十数f疆克卵的平均卵校数。卵巢中F斤1智的余部卵教数即为绝对怀卵簸，垠l.体意(日)所含的卵校数为相对怀卵壤。8.3 染色体的检测8.3. 1 标本制备术前8h12 h 腹腔注射0.1%的植物血凝聚家(PHA)O.5mL-1. 0 mL(100 g体!li:).术前4h6 h腹腔注射秋水仙署署溶液(每克体整10g-15g)，解剖牛挫，从股f牙利

11、腔管中取骨髓，投入0.4%的氧化仰(KCD溶液中.37C水浴15min-20 min，以1000 r/min离心10mn，弃其上消液，加1mL阙液(阳回事B冰乙般为3)，4C条件下网20 min，j重复固定两次。再加少量量固定液，伽l取绷胞悬液，取细胞悬液滴片，在E酒精灯上文火烘干，浸没夜吉姆萨(Giemsa)工作液(院制按G日17716的规定执行)中染色30min，用蒸饿水冲去多余染液，空气干燥制片。8.3.2 染色体计数按G日17716的规定执行。8.3.3 组组分桥饺GB17716的规J执行。8.4 化溃传分析8.4.1 试样的制备与保存GB 191632003 解#lJ牛烁，取心肌，用

12、里就水洗去现液厉称最、切碎，按1: 5 (质最浓度)加生理盐水低源匀浆，4C条件下以12000r/min离心10min。取t消液加入等锺40%的熊糖溶液，摇匀后作好标记置于一25C冰箱中保存。8.4.2 电泳分离用稳流稳胀电泳仪及6%.丙烯ItU宽凝胶校状咆泳分离。电泳在10C左右进行，点样最50L，用澳酣蓝fP揭示剂。稳Bi280 V，也泳80min-90 min.巨澳盼戚到达m胶前沿1cm处停止。8.4.3 染色固定电泳结束厉，取凝胶放入预先配好的染色液中.37C温浴10min-30 min，至条带清晰，倾出染色液，用固定液(甲蹲z乙酸s水为45: 12 : 43)终止反应。同工酶染色液的

13、配和j见附送日。8.4.4 销馅测定用激光扫描仪对电泳自自谱进行扫描和J锺分析。GB 19163-2003 附雪景A(资料性附亵)长方穗和体长体.关系式A.1 体长和体熏线长为穰体长和体3在1:1是方军最见式(A.l)、武(A.刀。L, 坦白17.32I-e 293 7(仲1JM, = 68 1. 771 -e，.3川付1阳幻J阳?式中zL，z龄时牛蛙体伏，单位为厘米(cm); M，t龄时牛雄体重，单位为克(g); e自然对数的底st 牛娥的月麟，单位为龄。. A.2 体长体重关系:;t牛蛙体长体重关系式见式(A.3)。12 AA ( M 0.0387 X V.4427 .( A.3 ) 3戈

14、叫p，M牛蛙体囊，单位沟沟;(g); L 牛般丰长，岛主仪3甘愿米(cm)。GB 191632003 附录B(规范性附录)闰工酶染色泼的配制队1磷酸盐缓冲液(0.5rnol/L)的配制取磷商费二氮何(KH，PO，)6.8日溶于约80mL蒸惚水中，以氢氧化纳(NaOH)揭穿液(2mol/L)调节pH 在7.4，再用蒸倒水定容泵100mL , B.2 氯化硝蒜阴氮峨蘸(NBT)J!:!液(rng/mL)的配制闻单50mg靠在化硝揍凶氮电蓝蓝(NBT)J容于50mL事馆水中，4C保梯。B.3 辅酶1(NADl贮液(mg/rnL)的配制j取100mg辅酶1(NAD)定容于10mL蒸馆水中。队4盼瞻阳蹄

15、硫酸盐(PMS)贮液(mg/mL)的配制取50mg吩滕lfI自旨硫酸盐(PMS)J辈子50mL然饱水中，4C暗处保存。B.5 氟化制(NaCI)溶液(0.1 rnol/L)的配制取氯化销584mg J辛辛于100mL蒸馈水中份B.6 氟化镇(MgCl，)溶液(0.005mol/L)的配制取氯化镣(MgCl， 6日，0)100 mg定容于100mL 在饱水巾。B.7 乳酸纳溶液(11001/1，)的配制耳RDL乳般纳9.35mL(浓度600mg/mLl加蒸倒水至50mL, B.8 染色液的配制取磷酸盐缓冲液7.5mL.:llU氟化硝基因氮lI!Ilil济液7.5mL、辅瞬I溶液3.0mL、吩嗦甲醋硫酸盐溶液0.75mL、氯化销溶液3.0mL、氯化筷溶液3.0mL、乳酸纳溶液3.0mL，混匀即成。