GB T 16286-1996 食品中蔗糖的测定方法 酶-比色法.pdf

1、GBI16286-1996 前古口食品中草草糖的测定方法，一俄采用盐酸水解法。由于盐酸水解熏糖过程中，还有其他糖类被水解为还原糖，导致测定结果偏离。本标准采用的酶比色法是在检索了近20年148篇国外文献的基础上，经过反复实验、验证商银定的.由于篇法具有离度的专一位(-果糖营酶只能催化然糖转化为葡萄糖牵挂果糖)，灵敏度高，操作简便，因此测定结果准确。煎糖酶解后的产物一一葡萄糖的测定方法，与GB/T16285-1996保持一致。本标准的附录A是标准的附录。本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起直在单位z中留农垦北方食品监测中心。本标准经全国食品工业标准化技术委员会秘书处审核本标准

2、主要起草人2张宗城、刘宁、郝憾。屿),),) f 1 范围中华入民共和家标准食品中蕉糖的测定方法酶-比色法Method for determinatlon of sucr曲ein food Enzyme-colorimetrlc n回hod本标准巍定了F吉普草比您法测定食品中辈辈糖的方法本标准适用于各类食品中煎糖的测定。本标准最低检出限量为O.04月熊糖)!mL(试液).2 原理GB/T 16286一1996在-果糖苦草草(-FS)催化下，煎糖被酶解为藏萄糖和果糖。葡萄糖氧化部(GOD)在有氧条件下，催化-D葡萄糖葡萄糖水溶液状态)氧化，生成b葡萄糖酸8内首旨和过氧化氮。受过氧化物酶(POD)

3、催化，过氧化氢与中氨基安替比林和苯盼生成红色眼亚股。在波长505nm处测定酿亚胶的吸光度，计算食品中燕糖的含量。-FS C日22011十H，O一句也C6H，06(G)+C,H1,0 , (F) GOD C,HO, (G) +0，一C，HlOO，+注，0，POD H，O，十C，H50H+C11H，3N3。一一+C6H，NO十日，03试知i3.1 组合试)f盒1号并lt，内含果糖苦草草(fructosidase)400U (活力直在位)、拧後酸、拧镰毅三销s2号瓶:内含0.2mol/L磷酸盐缓冲液(p日=7.6)200mL.其中含4-氨黎安替比林0.00154 mol/L; 3号瓶2内含0.022

4、mol/L苯黔溶液200mL; 4号瓶:内含葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase) 80白U(活力单位)、过氧化物酶(辣根，peroxdase ) 2000 U(活力单位)。1、2、3、4号瓶须在4C左右保存。3. 2 酶试剂溶液3.2.1 将1号瓶中的物质府重蒸馆水溶解，使其体积为66mL.轻轻摇动(勿剧烈撼动).使酶完全溶解。此溶液ap为自巢糖普普鲁试剂，其中拧草草酸(缓冲溶液浓度为Q.lmol儿.pH=4.6.在4C左右保存，有效期一个月。3.2. 2 每2号瓶与3号费在中的溶液充分混合3.2.3 将4号瓶中的酶溶解在3.2. 2混合液中，轻轻撼动(勿剧烈摇动h使酶完全将解，即为葡

5、萄糖氧化酶过氧化物酶试)fll溶液e在4C左右保存.有效期一个月。2盟家技术滋督局1996-04-10批准1996-12月的实施336 G/T 16286一19963. 3 . 085 mol/L亚铁氟化御熔液称取3.7g亚铁氟化御K，Fe(CN)， 3H,O.GB 1273.分析纯，溶于100mL重蒸馋水中，摇匀。3.4 O. 25 mol/L硫酸辛辛溶液称取7.7g硫酸钵(ZnSO， 7日20.GB666，分析纯溶于100mL:!在蒸馆水中，摇匀。3.5 o. 1四o1/L氢氧化纳溶液称取0.4g氮氧化锵(GB629.分析纯)，溶于100mL重蒸馆水中，摇匀。3-6i.w.糖标准溶液称军主

6、经100士ZC烘烤2h的燕糖(HG3-1号衍，分析纯)0.4000草，溶予重蒸熔水中，定容至100 mL.摇匀。将此溶液用重蒸饿水稀释V协一V阳，即为400g/mL煎糖标准溶液。4 仪器和设备实验室常规仪器及下列各项34. 1 锈钵或粉碎机e4.2 分析筛。4.3 组织捣碎机。4.4 假温水浴锅。4. 5 吁见光分光光度汁。4.6 微量移液管，1.00 rnL.精度。01mL, 5 试样的制备5. 1 I窃体摔品粉末状样品:取有代农性的样品至少200g，充分棍匀，堂子密闭的玻璃容器内。颗校状样品:取有代表性的样品至少200g.用粉碎机粉碎，或用研钵研细，递过100日分析筛，紧于密闭的玻璃容吉普

7、内。新鲜水果、疏菜等团体样品:取有代表傲的可食部分至少200g，用组织捣碎机捣碎，嫂子密闭的玻璃容器内。5.2 糊状祥品取有代表院的样品至少200g，充分混匀，置子密闭的玻璃容器内。5.3 药液体详品取有代表性的样品交少200日，用组织捣碎机掏畔，置于密闭的玻璃容器内。5.4 液体样品取有代表性的祥品至少200g，充分jfl!.匀，置于密闭的玻璃容器内。6试液的制备6. 1 不含蛋白质的试样Ifl lOO mL j烧杯春节llk试样(5.1 5. 4) O. 5 10 g (精确3臣。.000lg).加少量室主事馆水，转移到250 mL容量瓶中，用重蒸古董水定容至刻度。摇匀后用饺速滤纸过滤。奔

8、去最初的滤液30mL.即为试液。试液中煎糖含量大于2000g/mL时，应适当增加定容体积。6.2 没蛋白质的试样月1100mL烧杯称取试祥(5.15.的O.5 10以精确3Io. 000 1 g).力nc:量重蒸饱水，转移到250 mL容量瓶中，加入0.085mol/L亚铁氧化饵溶液(3.3)5mL、0.25mo1/L硫酸铸溶液(3.4)5mL和O. 1 mol/L氢氧化纳洛液。.5)10mL.使蛮归凌沉淀。用重蒸缩水定容至I度，然匀后m快速滤生在过滤D弃去最初滤液30mL.目n为试液。:i37 GB/T16286一1996试液中煎糖含量大于2000月/mL时，应适当增加定容体积。7 分析步骤

9、7. 1 标准曲线的绘制用微量移液管取0.00.0.20.0.40.0.60.0.80.1.00 mL煎糖标准溶液(3.6).分别置于10mL比色管中，各加入1.0mL-果糖背酶试剂溶液(3.2.1).摇匀，在36:1:1 C水浴锅中恒温20mino取出后加入3时，葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液(3.2.3).在36土IC水浴锅中恒温40mino冷却至室温，用重蒸馆水定容至10mLo用Icm比色皿，以煎糖标准溶液含量为0.00的试fiJ溶液调整分光光度计的零点，在波长505nm处测定各比色管内溶液的吸光度。以N-糖含量为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制标准曲线。7.2 试液吸光度的测定用微量移液

10、管取O.205. 00 mL(依试液中煎糖的含量而定)试液(6.16.2)，置于10mL比色管中。以下按7.1步骤操作，旦须用等量试液(6.16.2)调整分光光度计零点。测出试液吸光度后，在标准曲线上查出对应的煎糖含量。8 分析结果的寝述食品中煎糖的含量以质量百分率表示，按式()计算2x= C 一一一V. L一一一X100 =一一王1 000 X 1 000 . . _. . V , mX式式中:x样品中煎糖的含量，质量百分率，%:C 标准曲线上查出的试液中煎糖含量，g，m 试样的质量，g;V , 试液的定容体积，mL;V2一一测定时吸取试液的体积，mLo汁算结果精确至小数点后第二位。9 允许

11、差m X v: X 10000 同伞样品的两次测定值之差，不得超过两次测定平均值的5.0%。:l38 () GB/T 1 62 86 -1 996 附录A标准的附录-果糖营酶、葡萄糖氯化酶、过辄化物酶的技术要求、试验方法及判定规则A1 技术指标A1. 1 磁活力-果糖脊酶酶活力(U/mg)，二;:100，曹哥德糖氧化酶酶活力CU/mg)，二月0，过氧化物酶能活力(U/mg)，二;:，50。A 1.2 干扰酶-在糖营墨草、喜喜萄糖氧化酶、过氧化物酶都不得含有纤维素酶、淀粉葡萄糖警赂、半乳事苦苦董事和过氧化氢酶。A2试验方法用微量移液管吸取0.50mL照糖标准溶液(3.6)，置于10mL比色管中.

12、1Jll入100问乳糖HG3 1 ()，分析纯、100吨可溶性淀粉HGB3095.分析纯)和100照纤维二楼(生化t1l).再加入LOmL果糖1:1酶i式frj浴液(3.2.1)。以下按7.1步骤操作。测定吸光后，在标准曲线(7.1)上查出对应的照糖含量，按式CAl)计算f.糖的回收率sR出c一X100 . . . . . CAll 0.5 X 400 式中，R煎糠的回收率，%; (咱一-)1军糠的实视tl僚，路。A3 判定规则没H导要安糠的留校率，如在95%-105%范窗内，问:判定-果糖营酶、葡萄糖氧化酶幸在过氧化物泌符合技术要求。G/T 16286-1996(食品中煎糖的测定方法酶一比色

13、法第1号修改单本穆泼单经Ilil家技幸监督属于1997年9耳仪器以技监辍标忌(1997)第200哈立批准，由1998年1丹:挂起实施合. 3. 1 !矗E第3行中的叫(PH7.6)更改为气(PH7.0盯)2 ?1-Z条玫F揭哥童薪哥矗立=7, 2 试液眼光度的测定用嫩量移液骨取o.205. OOml(侬试被中jIf.糖的含量而定试液(6.1-6.2)，虽Itr 10ml tt色管中u以干校7.IJL骤操作才1续用等量试液(6.1-6.2)演整分光光度计零点，操作费骤如下。取等量试液刊.16. 2)加入3ml葡萄糖氧化酶过氧化物酶试剂溶液(32，3) .摇匀.在36士I(、水浴锅中恒温40min冷却草草混，用重蒸媲*定容3f10四1，用此溶液调戴分光光度计军点p翻t封试模较先度后.在标准涵线上班出对应的费苦塘含量也fJ载t1998年第1期中民林准化B33Q