GB T 16294-1996 医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法.pdf

1、GB/T 16294-1996 中一口前本标准依照国内外药品生产管理规范）（C;M凹的要求，非等效采用美国国家航空及宇宙航行用NASA标准NHB53402（关于洁净室和洁净工作台微生物的控制标准，并参考JGJ71 90洁净室施工验收规范制定。悬浮粒子和微生物的测试是评价医药工业沽净室和洁净区空气洁净度的主要指标。本标准用沉降菌评价洁净室和洁净区空气中的微生物。医药工业洁净室（区）沉降菌的测试应采用本标准的规定。本标准的附录A、附录B、附录C都是标准的附录。本标准的附录D是提示的附录。本标准由国家医药管理局提出并归口。本标准起草单位上海市医药管理局药品测试所。本标准主要起草人钱周、步伯苏、沈建华

2、、顾锋、唐小珍。16 L一范围中华人民共和国国家标准医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法Test method for settling microbe in clean roorn(area）。fthe pharmaceutical industry 本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。GB/T 16294-1996 本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或无茵区域包括洁净工作台的沉降菌的测定和环挠的验证。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修坷，使用本标准的各方应探讨使用下列

3、标准最新版本的可能性。YY IT 0188. 6-1995药品检验操作规程第6部分2药品生物测定法3 定义本标准采用下列定义。3. 1 洁净室区）clean room (area) 对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。3-2 洁净工作台cleaning work station 一种工作台或者与之类似的一个封闭图挡工作区。其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流卑、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。3.3 洁净度cleanliness洁净环境内单位体积空气中含大于或

4、等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。3.4 菌落colony forming units 细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFUo通常用个数表示。3.5 沉降茵settling microbe 用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。3.6 悬浮粒子airbornepartical 可悬浮在空气中的尺寸一般在0.001 m 1 000 11m之间的固体、液体或两者的混合物质，包括生物性粒子和非生物性粒子。3. 7 单向流unidirectionalair flow（曾称为层流laminar flow) 沿着平行流线

5、，以单一通路以一定凶速向单方向流动的气流。国家技术监督局1996-04-10批准1996-10-01实施I 7 一GB/T 16294 1996 3.8 非单向流nonunidirectional air flow（曾称为乱流turbulent flow) 具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。3. 9静态测试at-rest test 洁净室（区净化空气调节系统己处于正常运行状态，工艺设备已安装洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。3. 10 动态测试operational test 洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。4 测试方法4. 1 方法概述本

6、测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。4.2所用的仪器和设备4. 2. 1 高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。4. 2. 2 恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行检定。4. 2. 3培养皿一般采用如Omm15mm的砌硅酸玻璃培养皿。4.2.4 培养基普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。其配制方法见附录A（标准的附录）。4.3 测试步骤4. 3. 1 采样方法将己制备好的培养皿按5.4.1.2的要求放进，

7、打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5 h，再将培养皿盖盖上后倒置。4.3.2 培养4.3.2.1 全部采样结束后，将培养皿fiilI于恒温培养箱中培养。4.3.2;2 在3035培养箱中培养，时间不少于48h。4.3.2.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。4. 3. 3 菌落计数4.3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用510倍放大镜检查，有否遗漏。4. 3. 3. 2 若培养皿上有2个或2个以上的茵落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。4. 4 注意事项4. 4. 1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确

8、性。4. 4. 2 采取切措施防止人为对样本的污染。4. 4. 3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。4.4.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细茵茵落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。4. 4. 5采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。5 测试规则5. 1 测试状态18 GB/T 16294 1996 一5. 1. 1 沉降茵测试前，被测试洁净室区的温混度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。5. 1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区已经过消

9、毒5. 1. 3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。5. 2测试人员5. 2. 1 测试人员必须穿戴符合环绕洁净度级别的工作服。s.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。5.3测试时间5. 3. 1 对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始5. 3.2 对非单向流，如10000级、100000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30 min后开始。5.4 沉降茵计数5. 4. 1 采样点数目及其布置5.4.1.1 最少采祥点数目沉降法的最少采样点数可按表1确定。表1最少

10、采样点数目国和、洁i净度级另ljm 100 10 000 100 ccn 1020 4 2 2 二注20408 2 2 二4010016 4 2 二三10020C40 10 3 二三20040080 20 6 二40DI 0口。160 40 13 二I0002 000 4CO 100 32 2 ooc 800 200 63 注2表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面面积对于非单向流洁净室是指房间的面积在满足最少损1J点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2.表2最少培养皿数洁净度级别所需如Omm 培养皿数（以沉降0.5 h计）100 14 10 000 2 100 000 2 5.4.1.2

11、 采样点的布置采样点的位l可以同悬浮粒子测试点。a）工作区采样点的位置离地0.8 m 1. 5 m左右（略高于工作面）。b）可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。19 :L (lJIl-!if- GB/T 16294-1996 ( 1) 式中：M一一平均菌落数，M1一一I号培养皿菌落数；M, 2号培养1111商落数gM，n号培养皿菌落数g一一培养皿总数。5. 7 结果评定用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。5. 7. 1 洁净窒（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。5. 7.2 若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结

12、果均须合格。采样点位贯的详细规则见附录B（标准的附录5. 5 记录测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态。测试报告的编写见附录C（标准的附录）。5. 6结果计算5. 6. 1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。5.6.2 平均菌落数的计算，见式。）。 -M 数阴山菌均平C I) GB/T 16294 1996 附录A（标准的附录）培养基的准备及灭茵A1 培养基的准备培养基可以外购或自行配制。自行配制方法见YYIT 0188. 6一1995第6章无菌检查部分中关于此类培养基的配方和操作步骤。其他符合药典灵敏度要求的培养基亦可以自行配制。A2 培养基平皿的制备A2. 1 将向Omm的培

13、养皿宜于121湿热灭茵20min或180干热灭茵2h0 A2. 2将培养基加热溶化，冷至45时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml,o A2. 3 待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于3035恒温培养箱中培养48h，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。注z制各好的培养基平皿宜在zc8的环境中得放附录B（标准的附录采样点布置洁净室和洁净区采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。下列采样点布置的图示可作参考。注.为采样点图Bl21 一一一编号测试依据环挠温度培养基批号检测日期菌落数区域评定标准检验者平皿洁净度级别100 10 000 JOO 00

14、0 ? 1 z -+ GB/T 16294-1996 附录c （标准的附录沉降茵测试报告 3 测试单位测试状态相对湿度培养温度报告日期结论复核者4 附录D （提示的附录）国内外有关沉降菌测定的标准表Dl美国NASA标准日本制药协会NH!l5340 Z 个（向Ornrn lh) 个（90rnm lh) 0. 49 I 2.45 5 I Z. Z 20 % 静压差Pa C 平均数级别备注中国化学制药工业协会个（归Ornrn 0. 5h) 1,;3 10 、中华人民共和国国家标准医药工业洁净室（区悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法GB/T 16292 16294 1996 晤中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045电话，68522112中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售版权专有不得翻印6 开本880x12301/16 印张1%字数44千字1996年9月第一版1996年9月第一次印刷印数1-6000 ,. 书号155066 1 13165 ,. 标目297一74