GB T 19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法.pdf

1、 ICS 中华人民共和国国家标准GB/T 196812005食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法 The method for the determination of Sudan dyes in foods High performance liquid chromatography 2005-03-29发布 2005-03-29实施 国家质量监督检验检疫总局 国家标准化管理委员会 发布GB/T 196812005 I 前 言 本标准遵循GB/T1.1-2000标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则和GB/T20001.4-2001标准编写规则 第4部分：化学分析方法的编写规则

2、。 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。 本标准由国家粮食质量监督检验中心归口。 本标准起草单位：国家粮食质量监督检验中心，大连市产品质量监督检验所。 本标准主要起草人：潘炜、王春燕、李鹏、董广彬、于利军。 GB/T 196812005 1 食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法 1 范围 本标准适用于食品中苏丹红染料的检测。 本标准规定了食品中苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红的高效液相色谱测定方法。 方法最低检测限：苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红均为 10 ug/kg 。 2 术语和定义 2.1 苏丹红 属偶氮系列化工合成染料。 3 方法要点 样品经溶剂提取

3、、固相萃取净化后，用反相高效液相色谱紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。 4 试剂与标准品 4.1 乙腈 色谱纯 4.2 丙酮 色谱纯、分析纯 4.3 甲酸 分析纯 4.4 乙醚 分析纯 4.5 正己烷 分析纯 4.6 无水硫酸钠 分析纯 4.7 层析柱管：1cm（内径） 5cm(高)的注射器管。 4.8 层析用氧化铝（中性 100目200目）： 105 干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g 中加入2mL水降活，混匀后密封，放置12h后使用。 注：不同厂家和不同批号氧化铝的活度有差异，须根据具体购置的氧化铝产品略作调整，活度的调整采用标准溶液过柱，将1ug/mL 的苏丹红的混合标

4、准溶液1mL加到柱中，用5%丙酮正己烷溶液60mL完全洗脱为准，4种苏丹红在层析柱上的流出顺序为苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红，可根据每种苏丹红的回收率作出判断。苏丹红、苏丹红的回收率较低表明氧化铝活性偏低，苏丹红的回收率偏低时表明活性偏高。 4.9 氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3 cm 高，轻敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL正己烷预淋洗，洗净柱中杂质后，备用。 4.10 5%丙酮的正己烷液：吸取50mL丙酮用正己烷定容至1L。 4.11 标准物质：苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红；纯度95% 4.12 标准贮备液：分别称取苏丹红、苏丹红、苏丹红及苏丹红

5、各10.0mg（按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪（ 配有紫外可见光检测器） GB/T 196812005 2 5.2 分析天平：感量 0.1mg 5.3 旋转蒸发仪 5.4 均质机 5.5 离心机 5.6 0.45m有机滤膜 6 样品制备 将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需磨细。 7 操作方法 7.1 样品处理 7.1.1 红辣椒粉等粉状样品 称取1 g5g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入10mL30mL正己烷，超声5min，过滤，用10mL正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5mL以下，

6、慢慢加入氧化铝层析柱中（4.9），为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。控制氧化铝表层吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂质的多少用10mL30mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL（4.10）洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45m有机滤膜过滤后待测。 7.1.2 红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品 称取0.5 g2g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入适量正己烷溶解（约1 mL10mL），难溶解的样品

7、可于正己烷中加温溶解。按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析柱过滤后待测”操作。 7.1.3 辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品 称取10 g20g（准确至0.01g）样品于离心管中，加10mL20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品多加水，加入30mL正己烷：丙酮 = 3：1，匀浆5min, 3000rpm离心10min, 吸出正己烷层，于下层再加入20mL2次正己烷匀浆，离心，合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g 脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5分钟，用5mL正己烷溶解残渣后，按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析柱过滤后待测”操作。 7.1.4 香肠等肉制品 称取粉碎样品10g20g（准

8、确至0.01g）于三角瓶中，加入60mL正己烷充分匀浆5min，滤出清液，再以20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次滤液，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5mL以下，按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析柱中过滤后待测”操作。 7.2 推荐色谱条件 7.2.1 仪器条件 色谱柱： Zorbax SB-C18 3.5 m 4.6mm150mm （或相当型号色谱柱） 流动相： 溶剂A 0.1%甲酸的水溶液：乙腈 = 85：15 溶剂B 0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20 梯度洗脱：流速:1mL/min 柱温：30 检测波长：苏丹红 478nm ；苏丹红、苏丹红、苏丹红 520n

9、m ；于苏丹红出峰后切换。进样量10l。梯度条件见表1。 7.2.2 标准曲线 吸取标准储备液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mL ，用正己烷定容至25mL，此标准系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56g/mL,绘制标准曲线。 7.3 计算 GB/T 196812005 3 按公式（1）计算苏丹红含量 R=CV /M （1） R样品中苏丹红含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； C由标准曲线得出的样液中苏丹红的浓度，单位为微克每毫升(g/mL)； V样液定容体积，单位为毫升（mL）； M样品质量，单位为克（g）。 表1 梯度条件 流动相 时间（min） A B 曲线 0 25 75 线性 10.0 25 75 线性 25.0 0 100 线性 32.0 0 100 线性 35.0 25 75 线性 40.0 25 75 线性 GB/T 196812005 4 附录A （资料性附录） 苏丹红标准色谱图 min0 5 10 15 20 25 30 35mAU 01234VWD1 A, Wavelength=476 nm (SUDAN405030307.D)5.75210.50615.51721.870Sudan ISudan II Sudan IIISudan IV