SN T 1666-2005 水稻条纹病毒、水稻矮缩病毒、水稻黑条矮缩病毒的检测方法 普通RT-PCR方法和实时荧光RT-PCR方法.pdf

1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1666-2005 水稻条纹病毒、水稻矮缩病毒、水稻黑条矮缩病毒的检测方法普通RT-PCR方法和实时荧光RlPCR方法Detection of rice stripe virus, rice dwarfvirus and rice black streaked dwarfvirus一Conventional RT蛐PCRand real唰timefluoescence RT皿PCR2005-09-30发布2006-05唰01实施中华人民共和国国家质量监督检验检窥总局060509000073 重SNjT 1666-2005 削吕本标准由国家认证认可监

2、督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国湖南出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人:朱金国、陈红运、朱水芳、李献坤、黄志强、陈白苦、姜金林、向俨。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。I 1 范围水稻条纹病毒、水稻矮缩病毒、水稻黑条矮缩病毒的检测方法普通RT-PCR方法和实时荧光RT-PCR方法SN/T 1666-2005 本标准规定了水稻条纹病毒、水稻矮缩病毒、水稻黑条矮缩病毒的普通RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测方法。本标准适用于水稻、玉米和媒介昆虫中的水稻矮缩病毒、水稻条纹病毒、水稻黑条矮缩病毒的检测。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标

3、准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件.其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准.然而.鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/丁6682分析实验室用水规格和试验方法SN/丁1193基因拴验实验室技术要求3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 水韬条纹病毒rice stripe virus , RSV 属纤细病毒属(丁E川ZVZrL)病毒.病毒粒子为分枝线状.含单一的核衣亮蛋白.病毒基因组由四个单链正义RNA和四个双链RNA组成。在自然界中由飞灰虱传播.主要侵染禾本科植物。

4、侵染水韬可引起祖绿黄斑、黄绿色条带、枯萎、抽穗畸形等症状。3.2 水稻矮缩痛毒rice dwarf virus , RDV 属呼肠孤病毒科植物呼肠病毒j离(P h ytorevi rus)病毒.病毒粒子为具有双层外壳蛋白二十面体现链RNA病毒.在自然界中由叶蝉传播，主要侵染禾本科植物。受染水稻可引起矮缩、扭曲、色斑生长受阻等病理状态c3. 3 71 1X D 25 mmo1/L 205 mmo1/L 3 5 mmo1/L 0.2 mmollL ? 15口1olL006 lmollL ? 15口101/L006 lmo1/L ? 5 UL 1 U/test O. 2 10mollL 00 2 f

5、lmo1气，D 27.8 50 对待测样品进行RI干CR检测.如果阴性对照和空白对照正确，待测样品出现与阳性对照一致的所测病毒的扩增条带.判定结果为阳性。对阳性样品的PCR产物应进行实时荧光RT-PCR检测或进行序列分析.其结果证实与所检测的水稻病毒一致.则可判定样品中含有所检测的水稻病毒。阳性对照、阴性对照和空白对照正确.旦样品无扩增条带.判定结果为阴性。5. 1. 2 实时荧光RT-PCRf夺泯样品的Ct值为40时.则判定采检测到病毒。待泯样品的Ct擅小于或等于35时.则判定检测到病毒。待测样品的Ct值小于40雨大于35时.应重新进行测试.如果重新测试的Ct值为40时.则判定检测到病毒:如

6、果重新测试的Ct值小于40丽大于35时.则判定位测到5.2 结果表述检出结果表述如下:a) 检出水稻条纹病毒或未检出水韬条纹病毒:b) 检出水稻矮缩病毒或未检出水韬读缩病毒:c) 捡出水稻黑条楼缩病毒或未检出水稻黯条接结病毒。D mOONjSFH5 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准水稻条纹病毒、水稻矮缩病毒、水稻器条矮缩摘毒的检测方法普通RT-P(双方法和实时荧光RT-P方法SN!1、1666-2005争合中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045闷址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷铃开本880X1230 1/16 印张O.75 字数11千字2006年1月第一版2006年1月第一次印刷印数1-2000定价8.00元9峰书号:155066.2-16593 SN/丁1