GB T 17528-2009 胡椒碱含量的测定.高效液相色谱法.pdf

1、ICS 67.200. 10 X 14 中华人民共和国国家标准GB/T 17528-2009 代替GB/T17528-1998 胡椒碱含量的测定高效液相色谱法Determination of piperine content-Method using HPLC (ISO 11027: 1993 ,Pepper and pepper oleoresins-Determination of piperine content-Method using high-performance liquid chromatography, MOD) 2009-04-03发布2009-09-01实施中华人民共和

2、国国家质量监督检验检夜总局也士中国国家标准化管理委员会.oc.，.1 IJ GB/T 17528-2009 目。昌本标准修改采用ISO11027: 1993(胡椒和胡椒油树脂胡椒碱含量的测定高效液相色谱法(Pepper and pepper oleoresins-Determination of piperine content-Method using high-performance liquid chromatography)。本标准与ISO11027: 1993的主要差异如下:一一将ISO11027: 1993的名称修改为Determinationof piperine content

3、-Method using high-per formance liquid chromatography; 一一一增加了方法的检出限;一一将ISO11027: 1993中6.2胡椒碱标准溶液的浓度范围0.05g/L._O. 2 g/L修改为0.4mg/L_ 2.0 mg/L; 一一将ISO11027 :1993中4.3所用流动相乙腊-1%乙酸(48+52)修改为甲醇-水(77+23);一一取消ISO11027: 1993中10.1和10.2计算公式的计算因子，因修改后的计算公式元计算因子。本标准代替GB/T17528-1998(胡椒碱含量的测定分光光度法。本标准与GB/T17528-1998

4、相比主要差异如下z一一将分光光度测定法改为高效液相色谱测定法。本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国辛香料标准化技术委员会归口。本标准起草单位:农业部食品质量监督检验测试中心(湛江)。本标准主要起草人:杨春亮、程盛华、黎珍莲、周慧玲、林玲、查玉兵。本标准于1998年10月首次发布。I GB/T 17528-2009 胡椒碱含量的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了用高效液相色谱法测定胡椒碱含量的方法。本标准适用于黑、白胡椒和黑、白胡椒粉及其含油树脂抽提产物中胡椒碱含量测定。本标准的方法检出限为O.008 g/100 g。2 原理试样中的胡椒碱用乙醇提取，用

5、高效液相色谱紫外检测器检测，外标法定量。3 试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馆水或去离子水或相当纯度的水。3. 1 乙醇(CH3CH20H):95%(质量分数。3.2 甲醇(CH30H):色谱纯。3.3 胡椒碱标准物质:纯度二三98%。3.4 胡椒碱标准溶液:准确称取(10士O.l)mg胡椒碱标准物质于10mL棕色烧杯中，用乙醇(3.1)溶解，转移至10mL棕色容量瓶中，用乙醇(3.1)定容至刻度，此溶液的质量浓度为1000 mg/L(临用时配制)。3.5 胡椒碱标准工作液:用微量移液器吸取50L胡椒碱标准溶液(3.的，置于25mL棕色容量瓶中，加乙醇(3.1)稀释至刻度

6、，此溶液的质量浓度为2.00mg/L。4 仪器4. 1 高效液相色谱仪z配有紫外检测器。4.2 组织捣碎机。4.3 样品筛:孔径为500m。4.4 棕色圆底烧瓶:100mL，配套冷凝回流装置。4.5 棕色容量瓶:10mL , 25 mL , 100 mL。5 试样制备5. 1 整粒胡椒用捣碎机(4.2)将样品粉碎，直至全部通过样品筛(4.3)，储于棕色瓶中备用。5.2 胡椒粉将所有样品通过样品筛(4.3)，不能通过筛网的，用捣碎机(4.2)粉碎，直到粒径达到要求为止，储于棕色瓶中备用。5.3 胡椒油树脂使样品充分均匀化。6 分析步骤注:由于胡椒碱溶液不稳定，见光易分解，避光操作很有必要。操作中

7、用铝倍或黑纸将烧瓶和容量瓶包裹起来，并尽可能快地测定。1 nu nU X RU-nu 9一14一A-m x一P一只一一切. ( 1 ) G/T 17528-2009 6. 1 提取6. 1. 1 从制得的胡椒试样(5.1)或胡椒粉试样(5.2)中称取0.2g,._, O. 5 g试料，精确至0.0001 g，置于烧瓶(4.的中，加入50mL乙醇(3.1)，装上回流冷凝管，加热至沸，保持四流3h，冷却至室温后，将溶液滤人100mL棕色容量瓶(4.5)中，用乙醇(3.1)少量多次冲洗抽提瓶和过滤器，洗液一并滤入容量瓶中，并加乙醇(3.1)至刻度，摇匀备用。6. 1. 2 从胡椒油树脂试样(5.3)

8、中称取0.05g ,._, O. 1 g试料，精确至O.OOOlg，置于100mL棕色容量瓶(4.5)中，用乙醇(3.1)稀释至刻度，摇匀备用。6.2 标准曲线制备准确吸取适量胡椒碱标准工作液(3.5)，用乙醇(3.1)稀释成质量浓度分别为0.40mg/L、0.80 mg/L、1.20 mg/L、1.60mg/L和2.0mg/L的标准溶液(现用现配)，然后分别吸取10L注入色谱仪(4.1)测定并绘制标准曲线。6.3 色谱条件6.3.1 色谱柱:C18, 200 mmX4. 6 mm，5m，或相当者。6.3.2 流动相:甲醇+水=77+2306.3.3 流速:1.0 mL/min。6.3.4 色

9、谱柱温度:30 oc。6.3.5 检测器波长:343nmo 6.3.6 进样量:10L。6.4 测定准确吸取1mL-3 mL提取液(6.1)，置于25mL棕色容量瓶(4.5)中，用乙醇(3.1)稀释至刻度，然后吸取10L注入色谱仪(4.1)进行测定，与标准曲线比较求出胡椒碱的含量。同时做空白试验。7 结果计算试样中胡椒碱的含量以质量分数wt，单位以克每百克(g/100g)表示，按式(1)计算。式中:m一一一试料质量，单位为克(g);F一一一测定试液中胡椒碱的质量浓度，单位为毫克每升(mg/L); V1一一试料定容体积，单位为毫升(mL);V2一一分取提取液体积，单位为毫升(mL)。计算结果保留

10、三位有效数字。8 精密度在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10%, 以大于这两个测定值的算术平均值的10%情况不超过5%为前提。9 胡椒碱标准色谱图标准色谱图参见附录Ao2 战. mAU 3 2 。一14 5 6 附录A(资料性附录)胡椒碱标准色谱图7 8 9 图A.1GB/T 17528-2009 10 11 12 mm gONiNRFH筒。华人民共和国家标准胡椒碱含量的测定高效液相色谱法GB/T 17528-2009 国中骨中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销骨印张0.5字数7千字2009年6月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2009年6月第一版* 定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066 1-37689 GB/T 17528-2009 打印日期:2009年7月14日