GB T 22429-2008 食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157及单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验.酶联免疫法.pdf

1、ICS 0710030C 53 鳕国中华人民共和国国家标准GBT 22429-2008食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌0 1 57及单核细胞增生李斯特氏茵的快速筛选检验酶联免疫法Rapid screening for Salmonella，Escherichia coli 0 1 57 and Listeria monocyfogenPs in foodsEnzymelinked immunoassay method20081 019发布 2009020 1实施车瞀鹊熙瓣警矬瞥星发布中国国家标准化管理委员会“”1刖 罱本标准的附录A为资料性附录。本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归

2、口。本标准起草单位：杭州市质量技术监督检测院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、上海食品药品检验所。本标准主要起草人：肖海龙、顾呜、芮昶、韩伟、徐伟东、鲍英、王颖。范围食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌0157及单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验酶联免疫法GBT 22429-2008本标准规定了食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌0157及单核细胞增生李斯特氏菌的酶联免疫法的检验步骤和判断原则。本标准适用于各种食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌0157及单核细胞增生李斯特氏菌的定性检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

3、的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 47894食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GBT 47896食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验GBT 478928 2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GBT 478930食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验3方法提要样品作增菌处理，增菌液经加热处理后移入包被特异性抗体(一抗)的固相容器内，使目标菌与抗结合，洗去未结合的其他成分；加入特异性酶标抗体(二抗)，再次洗去未结合的其他成分；加入特定

4、底物与之反应，生成荧光化合物或有色化合物，通过检测荧光强度或吸光度，与参照值比较，得出检验结果。4设备和材料酶联免疫分析仪(vIDAs仪或类似产品”)。冰箱：28。恒温培养箱：301，361，421。均质器。电子天平：量程0 g500 g，感量01 g。旋涡混合器。恒温水浴锅。灭菌设备。5培养基、试剂和试剂盒51 缓冲蛋白胨水(BP)：按GBT 478928 2003中412的规定配制。1)VIDAS仪是由法国梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。1，23456784444444452 氯

5、化镁孔雀绿增菌液(MM)：按GBT 478928 2003中413的规定配制。53 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)：按GBT 478928 2003中414的规定配制。54亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)：按GBT 478928 2003中416的规定配制。55改良肠道菌新生霉素增菌液(mEC+n)：制法参见第A1章。56 FraserI增菌液：制法参见A225。57 Fraser增菌液：制法参见A226。58盐酸吖啶黄溶液：制法参见A221。59萘啶酬酸钠盐溶液：制法参见A222。510沙门氏菌酶联免疫试剂盒。51 1 肠出血性大肠埃希氏菌0157酶联免疫试剂盒。512单核细胞增生李斯特氏菌酶联

6、免疫试剂盒。6检验61沙门氏菌的检验611 前增菌和增菌：按GBT 47894中的规定处理。612增菌后处理：移取1 mI，增菌液到灭菌小试管中，于沸水中加热15 min。剩余的增菌液于4保存，以便用于阳性确认。613取沙门氏菌的酶联免疫试剂盒，于1530的环境中放置30 min。614取适量加热处理后的增菌液到试剂盒测试孔中，通过自动或手动操作，经过酶联免疫反应过程后，检测反应强度(荧光强度或吸光度)，与参照值比较，得出检验结果。注：详细操作需根据所用仪器及试剂盒的说明进行。62肠出血性大肠埃希氏菌0157的检验621增菌：无菌操作取25 g(mL)样品到均质袋中，并向其中加入225 mLm

7、EC+n，充分均质，于4l1培养24 h1 h。622增菌后处理：按612给出的步骤处理。623取肠出血性大肠埃希氏菌0157的酶联免疫试剂盒，于1530的环境中放置30 rain。624检验步骤按614给出的步骤处理。6 3单核细胞增生李斯特氏菌的检验631 前增菌：无菌操作取25 g(mL)样品到均质袋中，并向其中加入225 mL Fraser I增菌液，充分均质，于301培养24 hl h。632增菌：移取1 mL FraserI增菌液(631)到9 mI。Fraser 11增菌液中，于30l培养24 h】h。633增菌后处理：按612给出的步骤处理。634取单核细胞增生李斯特氏菌的酶联

8、免疫试剂盒，于1530的环境中放置30 min。635检验步骤按614给出的步骤处理。7试剂盒控制71选用新批号试剂盒时，应验证试剂盒的质量指标；使用时应严格按照试剂盒的要求设立试验对照。72选用试剂盒检验不同目标菌期间，应不定期选用相应的可溯源标准菌株进行过程控制。8结果报告检验结果为阴性时，报告为未检出。检验结果为阳性时，应按GBT 47894、GBT 47896、GBT 478930或其他标准进行确证。，附录A(资料性附录)培养基GBT 22429-2008A1 改良肠道茵新生霉素增菌液(mEC+n)A11成分胰蛋白胨 200 g3号胆盐 112 g乳糖 50 g无水磷酸氢二钾40 g无

9、水磷酸二氢钾 15 g氯化钠 50 g蒸馏水 1 000 mLA12制法将上述成分溶于水后校正pH至694-1，分装后置121高艋灭菌15 rain，取出后冷却至室温，加入过滤的新生霉素溶液，使其终浓度为20 mgL。A2 Fraser增菌液A21成分酪蛋白酶消化物动物组织酶消化物牛肉浸膏酵母浸膏氯化钠磷酸氢二钠磷酸氢二钾七11r苷氯化锂蒸馏水A22制法将上述成分置于50水浴中充分溶解A221盐酸吖啶黄溶液盐酸吖啶黄灭菌蒸馏水50 g50 g50 g50 g200 g120 g135 g10 g30 g1 000 mL冷却后调pH至7o74，分装，121灭菌1 5 rain。25 mg10 r

10、llL振摇混匀，充分溶解后过滤除菌，避光保存。A222萘啶酮酸钠盐溶液萘啶酮酸 20mg005 molL氢氧化钠溶液 10 mL振摇混匀，充分溶解后过滤除菌。A223 005 molL氢氧化钠溶液氢氧化钠01 gGBT 224292008灭菌蒸馏水振摇混匀，充分溶解后过滤除菌。A224柠檬酸铁铵溶液柠檬酸铁铵灭菌蒸馏水振摇混匀，充分溶解后过滤除菌。A225 Fraser I增菌液在1 000 mL Fraser增菌液(A2盐酸吖啶黄溶液萘啶酮酸钠盐溶液柠檬酸铁铵溶液A226 Fraser II增菌液在l ooo mL Fraser增菌液(A2盐酸吖啶黄溶液萘啶酮酸钠盐溶液无菌分装于10 mL大试管中。50ml，05 g10 mL5 mL5 mL10 mL10 mL10 mL