GB T 16285-2008 食品中葡萄糖的测定.酶-比色法和酶-电极法.pdf

1、ICS 67.050 X 04 .一E c 口口-Determination of gIucose in food一 GB/T 16285 2008 代替GB/T16285 1996 、Enzyme-coIorimetric method and enzyme-eIectrode method , 2008-06-25发布r 2009-01-01实共发布 GB/T 16285 2008 目。1=在本标准代替GB/T16285 1996(食品中葡萄糖的测定方法比色法和酶-电极法。本标准与GB/T16285 1996相比主要变化如下z标准名称改为z食品中葡萄糖的测定酶-比色法和酶-电极法;按GB/

2、T1.1一2000和GB/T20001. 4 2001的规定，修改了文本格式。本标准的酶-比色法为仲裁法;酶-电极法为快速法。本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位z中国农垦北方食品监测中心(酶-比色法、山东省科学院生物研究所酶-电极法)。本标准主要起草人z张宗城、刘宁、冯德荣、孙士青、宋家华。准的历次版本发布情况为zGB/T 16285 1996. I , GB/T 16285 2008 1 范围食品中葡萄酶-比色法和的测定，电极法本标准规定了酶比色法和酶-电极法测定食品中葡萄糖的分析步骤。本标准适用于各类食品中葡萄糖的测定;亦适用

3、于食品中其他组分转化为葡萄糖的测定，本标准的酶比色法的最低检出限量为0.01fLg/mL;酶电极法的最低检出限量为1.0 mg/100 mL。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析试验室用水规格和试验方法(GB/T6682 1992 , neq ISO 3696:1987) 3 酶比色法3. 1方葡萄糖氧化酶(GOD)在有下，催化萄糖(葡萄糖水

4、蓓液的氧化反应，生成内醋和过氧化氢。在波长505nm 3.2 反应式化物酶(POD)催化，过氧化氢与小氨基安替比林和苯酣生成红色酿亚定醒亚胶的吸光度，计算食品中葡萄糖的含量。GOD C6HIZ06+0Z一C6H1006十HzOzPOD Hz O2 +Cs Hs OH +Cll Hl3 N3 0一-+-C6HsNO+HzO3.3 试剂和3.3. 1 试剂和分析用水所有试剂均使用分析纯试剂，或生化试剂z分析用水应符合GB/T6682规定的二级水规格，或重蒸懦水，3.3.2 组合试剂1号距z内含磷酸盐缓冲搭液(0.2mol/L ,pH 7.0)100 mL，其中4-氨基安替比林为o.001 54 m

5、ol/L。2号瓶z内含苯酣潜液(0.022moI!L)100 mL. 3号瓶z内含葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase) 400 U (活力单位、过氧化物酶辣根，peroxidase) 1000 U(活力单位葡萄糖氧化酶和物酶的活力要求和判定见附录A。1、2、3号瓶应在约4*C保存。3.3.3 酶试剂溶液将1号瓶(3.3. 2)和2号瓶(3.3.2)的内容物中，轻轻摇动勿剧烈摇动)，使葡萄1个月。3.3.4 亚铁氨化饵溶班(0.085moI/L) 称取3.7g亚铁氧化饵，溶于100mL水中，?合均匀，再将3号瓶(3.3.幻的内容物溶解其。此溶液应在约4*C保存，有效期 1 、户，叮UGB

6、/T 16285 2008 3.3.5 疏酸铸溶液(0.25mol/L) 称取7.7g硫酸辞，溶于100mL水中，摇匀。3.3.6 氢氧化铀溶班(0.1 mol/L) 称取4g氢氧化铀，溶于1000mL水中，摇匀。3.3.7 葡萄糖标准溶液经100C士20C烘炜2h的葡萄糖1.000 0 g，溶于水中，定容至100mL，摇匀。用水转释此需液2.00mL 100 mL，浓度为200g/mLo3.4 仪器和设备3.4. 1 研钵或粉碎机。3.4.2 分析I)J0 3.4.3 组织问町川。3.4.4 恒温水浴锅。3.4.5 可见光分光光度计。3.4.6 微量移液管:1.00 mL，精度0.01mLo

7、 3.5 试样的制备3.5. 1 固体样品粉末状样品z取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的政璃容器内。颗粒状样品=取有代表性的样品至少200g，用粉碎机粉碎，或用研钵研组，通过100日分轩窍，置于密闭的玻璃容器内。新鲜水果、蔬菜等固体样品z取有代表性的可食部分至少200g，用组织捣碎机鸪碎，置于密闭的注璃容器内。3.5.2 糊状样晶取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。3.5.3 固、渣体样品取有代表性的样品至少200g，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的哇璃容器内。3.5.4 渡体样晶取有代表性的样品至少200mL，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。如样品中含二

8、氧化硅，应用三角瓶取200mL，旋摇至基本无气泡，安装冷凝管，置沸水浴中加热10min，取出玲却至室温.3.6 试班的制3.6. 1 不含蛋白质的试样z用100mL烧杯称取试样(3.5)1gu 10 g(精确至0.0001 g)，扫少量水，转移到250mL容量瓶中，稀释至刻度。摇匀后用快速滤纸过法。弃去最初撞撞30mLo 试液中葡萄糖含量大于300g/mL时，应适当增加定容体积。3.6.2 含蛋白质的试样z用100mL烧杯称取试样(3.5)1g- J10 g(精确至0.0001 g)，如少量水，转移到250mL容量瓶中。加入亚铁氧化饵溶液(3.3.4)5mL、硫酸辞搭液(3.3.5)5mI.和

9、氢氧化铀窑撞(3.3.6)10 mL，用水定容至刻度。摇匀后用快速滤纸过滤。弃去最初捷液30mI.o 试液中葡萄糖含量大于300g/mL时，应适当增加定容体积.3.7 分析步3.7. 1 标准曲线的绘用微量移液管取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80ml.、1.00 mL葡萄帮标准蓓在(3. 3. 7) ，分别置于10mL比色管中，各加人3mL酶试剂溶液(3.3.3)，摇匀，在36(;士1(;水摇摆中恒温40mino冷却至室温，用水定容至10mL，摇匀。用1cm比色皿，以葡萄辖标准需液含量为0.00g/mL的试液调整分光光度计的零点，在波长505nm处，测定各比色管

10、中溶攘的吸光度.以葡萄糖含量为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制标准曲线。2 GB/T 16285 2008 3.7.2 试遭眼光度的测定用微量移液管取0.50mL, J5. 00 mL试液(3.6)(依试液中管中。以下按3.7.1步明、J)fI r- 0 测定试液吸光度后，在标准曲线上查出相应的葡的含量而定)，置于10mL比色 3.8结食品中葡萄糖的含量，以-X1计，数值以%表示，按式(1)计算znu nu nu -nu uv-唱i一A-9 m-v 一-m 1 X ( 1 ) 式中zml一一标准曲线上查出的试液中葡萄糖的质量的数值，单位为微克g); m一一试样的质量的数值，单位为克(g);V1一一

11、试液的定容体积的数值，单位为毫升(mL);V2一一测定时吸取试液的体积的数值，单位为毫升(mL)。计算结果表示到小数点后两位。3.9 允许同一样品两次平行测定结果之差不得超过两次测定平均值的5.0%。4 电摄法4. 1 方法提要葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下，催化D葡萄糖(葡萄糖水溶液的氧化反应，生成D葡萄糖酸-内醋和过氧化氢。过氧化氢与过氧化氢型电极接触产生电流。该电流值与日-D-葡萄糖的浓度呈线性比例，在酶电极葡萄糖分析仪上直接显示葡萄咽口且。4.2 反应式GOD C6 H1206十O2一C6HI006+HzOz4.3 试剂和溶班4.3. 1 试剂和分析用水所有试剂均使用分析纯试剂或生

12、化试剂5分析用水应符合GB/T6682规定的二级水规格。4.3.2组4. 3. 2. 1葡化化酶膜z含葡萄糖氧化酶(GOD)15U(活力的活性和抗干扰性的判定，见附录孔F应在0Cu4C保存，有效期12个月。4.3.2.2 复合试剂z含磷酸二氢饵、磷酸氢二锅、乙二胶四乙酸二铀、氧化铀、苯甲酸铀、庆大霉素盐z常温保存，有效期24个月。4.3.2.3 D葡萄糖标准潜液z浓度为100.0mg/100 mL;密封保存，有效期12个月。4.3.3 锺冲溶擅将一袋复合试剂(4.3.2.2)溶解在1000mL水中，摇匀。pH:7.2士0.1.4.4 仪器和设备4.4. 1 研钵或粉碎机二旷卢，-民-吨俨4.4

13、.2 、 4.4.3 碎机。4.4.4 酶电极葡萄糖分析仪z直接读数式z测量范围omg/100 mL 100. 0 mg/100 mL (-D-葡萄度土1.0 mg/100 mL(萨糖).3 G/T 16285 2008 4.4.5 4.5 试样的同3.5.进样器z容备4.6 试渣的制备50L，精度1L。4.6. 1 固体试样和固灌体试样4. 6. 1. 1 一般固体试样和固、液体试样z称取试样(4.5)1gu 10 g(使之定容后葡萄黯含量为1mg/mI. 200 mg/mL)于100mL烧杯内，精确至0.0001 g，用水移入100mL容量瓶中，帮释至刻度，摇匀，放置30 min(摇动2次

14、r-3次)。用快速滤纸或脱脂棉过滤。弃去最初滤波，收集1mL2mL撞撞于苦差小试管中。4. 6. 1. 2水果、蔬菜试样=称取试样(4.5)1 g 10 g于100mL烧杯内使之定容后葡萄梧含量为1 mg/mL 200 mg/mL) ，精确至0.0001g.加入煮沸的水30mLrJ50 mL和5mL缓冲需注(4.3.白，继续煮沸3min 5 min，冷却至室温后用研钵研细或用组织捣碎机捣碎。用水移入100mI.容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。用快速滤纸或脱脂棉过捷。弃去最初滤液，收集1mL 2 mL洼洼于节主小试管中。4. 6. 1. 3 食用葡萄糖试样z称取试样(4.5)1 gu10 g于100

15、mL烧杯内，精确至0.0001 g.妇人约50 mL水，搭解后煮沸2min。冷却后用水移人1000mL容量瓶中，帮释至刻度，摇匀。4.6.2 糊状和液体试样称取试样(4.5)1 grJ10 g(使定容确至O.OOOlg.用水移入100mL容透明状，可不过滤。弃去最初滤液，萄黯含量为1mg/mLr J200 mg/mL)于100mL瓷杯内，辛苦中，稀释至刻度，摇匀.用快速法纸或民梧过主主:m需注呈1 mL 2 mL滤液小试管中.4. 7 分斩步4.7. 1 校正仪从组合试剂盒中取出电极，将其表面清理干净，吸取缓冲溶液(4.3.3)滴在电极表面。用小程子取一片酶膜圈，安装在电极表面，使酶膜圈中心和

16、电极中心的白金完全贴紧，形成无气范的薄层注体，然后将电极安装在反应池内。仪器开机后，缓冲潜液即自动进入反应池，并自行冲洗。当仪器出现进样指令后，用样器准确吸取25L-D-葡萄糖标准溶液(4.3.2.3)(用滤纸擦净针尖外部注入进样口内。20sr40 s后仪器自动显示标准榕液(4.3.2.3)的指示值。再等30s J60 s，仪器自行完成冲洗过程，即可重复注入标准榕液(4.3. 2. 3)数次，直至仪器显示允许开始测定样品.当连续两次标准蓓液(4.3. 2. 3)显示值的相对于2.0%时，即完成校正步哪。4.7.2 测定样晶用试被(4.的进样器，至少两次。准确吸取25L试液(4.的，用法纸擦干针

17、尖外部，注人进样口。20srJ40 S后读取显示值。4.8结4 食品中的含量，以质量分数几计，数值以%表示，按式(2)计算=X R Vz -2 1 000 X ml 式中zR一一仪器测定的数值，单位为毫克每百毫升(mg/100mL) ; V3一一试液的定容体积的数值，单位为毫升(mL); ml一一试样的质量的数值，单位为克(g)。果表示到小数点后一位。.( 2 ) G/T 16285 2008 4.9 允许差同一样品的两次测定值之差:食品中葡萄糖含量小于1.0%时，不得超过两次测定平均值的5.0%; 食品中葡萄糖含量大于或等于1.0%时，不得超过两次测定平均值的2.0%。，事5 GB/T 16

18、285 2008 附录A规范性附录化酶和过氧化物酶的活力与判定A. 1 活力要求A. 1. 1 葡萄糖氧化酶的活力:不低于20U/mg;不得含有纤维素酶、淀粉葡萄糖昔酶、萨果黯背离、半乳糖昔酶、过氧化氢酶等干扰酶。A.2 化物酶活力z不低于50U/mg;不得含纤维化氢酶等干扰酬。法酶、淀粉葡萄糖昔酶、F一果黯昔霹、半乳曹营A. 1. 2 、用移液管吸取0.50mL葡萄糖标准溶液(3.3. 7)，置于10mL比色管中，加入100g可捂住淀告(分析纯、100问纤维二糖(生化试剂、100问乳糖(分析纯和100gllr.黯分析纯)，再如入3mI. 溶液(3.3.3)。以下按3.7. 1步骤操作。定吸光

19、度后，在标准曲线(3.7.1)上查出相应的葡萄糖含量，按式(A.1)计算葡萄梧的目;在率znu nu i 叫一一F . ( A.1 ) 式中zF 的回收率，%; 的实测数值，单位为mz (g)。A.3 判定测定的葡萄糖回收率，如在95%J105%范围内，则判定葡萄糖氧化酶和过氧化物酶符合要求。如6 B. 1 校正仪则显示出时，应更换新B.2 的判定，注入25L-D-葡萄性的相应数值。如相 性的判定GB/T 16285 2008 附录B(规范性附录化酶膜的判定标准溶液(4.3. 2. 3 ) ，仪器显示指示数值后，按下酶膜响应键，大于10.0，则表示酶膜活性符合要求;相应数值小于10.0校正仪器

20、操作步骤完成后，仪器显示酶膜线性检查指令.用微量进样器注入50L-D-葡萄糖标准溶液(4.3. 2. 3 )，如显示值大于184.0，表示酶膜线性良好;小于184.0时，应按下仪器线性校正键，进行线性校正，或更换新酶。B.3 抗干扰性的判定校正仪器操作步骤完成后，用微量进样器吸取25L新配制的1%亚铁霞化饵溶液，注入反应池进样口。当仪器显示值为一2.0十6.0时，表示酶膜抗干扰符合要求z否则应更换新阴阳。1%亚铁氧化饵洛液的配制z用100mL烧杯准确称取1.15 g亚铁氧化饵K4Fe(CN)6 3HzO，分析纯，加人少量水使之溶解，转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。一-4-t-4一-铲飞电、-.f.- .- , , ，、，才-飞雪词 GON-N -严自己, 中华人民共和国国家标准食品中葡萄嚣的商定比色法和酶电提法GB/T 16285 2008 * 中国标准出版社出版芷行北京复兴门外三里肖北街日号,100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印固厂印自各地新华书店经销 开本880X 1230 1/16 印张o.75 字室主14千字2008年9月第一应28年5月第一次印民 书号:155066 1-33077 如有印装差错由本社发行中心语虽版权专有侵权必究电话:(010)68533533GB/T 16285-2008