1、ICS 11. 220 B 41 中华人民共和国农业行业标准NY /T 577-2002 山羊关节炎/脑炎琼脂凝胶免疫扩散试验方法Agar gel immunodiffusion test for caprine arthritis/encephalitis 2002- 08-27发布2002-12-01实施中华人民共和国农业部发布595 NY /T 577-2002 前言山芋关节炎/脑炎(caprinearthrtis/encephalitis，简称CAE)是由山芋关节炎/脑炎病毒(CAEV)引起的山羊的一种慢性病毒性传染病，其主要特征是成年的羊呈缓慢发展的关jj-炎.阅或伴有f8J质性肺炎
2、和间质性乳房炎。羔羊表现为上行性麻痹的神经症状，被世界动物旦生组织WorldOrganization for Animal Health (英),Office International des Epizooties(法)，OIE列为B类痰俯.我国农业部把该病列为二类动物疫病。本病的诊断方法为琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验.是根据。IE(诊断试验的疫苗标准手册)(2000版)和我国的实际情况制定的。技术上与OIE保持一致.该法简便、特异.在闽际贸易中为指定的诊断方法。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、新疆畜
3、牧科学院。本标准主要起草人z相文华、王治才。,)96 1 范围山羊关节炎/脑炎琼脂凝胶免瘟扩散试验方法本标准规定f山羊关节炎/脑炎琼脂凝胶免疫扩散试验的技术要求。本标准适用于lU羊关节炎/脑炎的诊断和检疫。2 琼脂凝胶免瘦扩散试验2. 1 材料准备NY /T 577-2002 2. 1. 1 试剂及器皿氯化纳(NaCl)，叠氮饷(NaN，)，lmol/L .:起甲基氨基甲烧-盐酸(Tris-HCl)琼脂糖嘈移液器(50L100L)及吸嘴，外径7mm薄壁金属打孔器，直径9.5cm平皿。2. 1. 2 抗原、标准阴性血清、阴性血清。2.2 操作方法2.2.1 琼脂糖凝胶板制备称琼脂糖1.0 g 、
4、氯化锅8g置100mL三角瓶中，加入pH8.() O. 05 mol/I. Tris-HCl 100 mL，隔水煮沸至全部溶化。将其自然冷却至60C左右时，倒入平皿。每只于一皿加1:-)mL.待其凝固后加盖，置湿盒内.放4(待用。2.2.2 打孔将琼脂板放于打孔模式图上(见图1)，用打孔器按图样打梅花型孔，fL径7rnm，孔距2.5mm，打完孔后，挑出孔中琼脂块，再用溶化的琼脂封底。2.2.3 加样0) 0 o 0 0) 0 图1AGID打孔模式固按附上中心孔加人抗原，2、4、6孔滴加阳性血清，1-3，5孔滴加被检血清，加满样品后，置37C温盒内。2. 3 结果判定2. 3. 1 于24h、4
5、8h及72h观察是否有沉淀线出现，终判时间为72人检查时用斜射光，背景要暗。2. 3. 2 判定标准当标准阳性血清与抗原孔间有明显沉淀线而被检血清与抗原孔间也有明显沉淀线.397 NY /T 577-2002 或标准阳性血清与抗原子Lfl的沉淀线末端向毗邻的被检血清子L内但i偏弯时.rlJ为m性。子标准阳性血清与抗原孔间有明显沉淀线，而被检血清与抗J;j(孔|同元沉淀线，戎标准阳性血清与抗原孔间的沉淀线末端向毗邻的被枪血清孔直伸或rl外方偏弯时，如l为阴性。标准阳性血清孔土J抗原孔之间的沉淀线末端.似乎向毗邻受检血清孔内侧偏弯.但又不易判断者为日I疑。口J疑Rtf重检，仍为口J疑判为阳性。:J 9R
