SN T 1942.1-2007 进出口动物源性食品中布鲁氏菌属检验方法 第1部分 分离与计数方法.pdf

1、华人员共和圈出入境检验检接行业标准SN/主1942.1 2007 进出口动物漉性食品中布鲁民菌属验方法第1部分;分高与计数方法Detection of Brucella in food from animal for import and export-. Part 1 Isolation and enumeration 2007-08-06发布2008-03-01实施中华人民共和国发布国家股蛊监督检验栓疫总局别器SN/T 1942;进出口动物源性食品中布鲁民商属检验方法分J一一第1部分:分离与计数方法:2部分:PCR检拚方法。7f又部分为SN/T19422007的第1部分。7f立部分的酣录人

2、和甜录B均为现迫性附，仇。本部分由回家认证认可监督管理委员会提出并归口G例IT1942. 1-2007 本部分起草单位:巾华人民共和应i辽宁出入境检验检疫局、辽宁省痰病顶防控制中心卒部分主要起草人:关琪、王秋月、姚文清、秦成、耿英芝、本标准为首次发布的出入境检验检疫仔业标准。SN/工1942.1-2007 迸出口动物源性食品中布鲁员菌属检验方法第1部分:分离与计数方法国SN 1942的本了进山门动物1J引中布鲁民菌属的品中布鲁民计数u的分离与计数方法。2 规范性引用文件F列文件中的件-二卡随后所有的修改价协目的各方研究部分。GB 19489 SN/T 1942的本部分的引用而成为本部分的的内容

3、)或楼订版均不足川于文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，日期的寻IJH 如部新版本适用物用要求3 生物安全措施了保护。并按照GB19刊9巾的的工作人员检测; , 平日i麦弃物应小叶4 设备和材料4. 1 4.2 4. 3 - 1 00 气。10C -55C咆分亥Ij度O.1 : :3旷C1汇。4. 4 岐营工:1 1到L，5mL手1110mL，分刻度0.1mL。4.5 4. 6 C 呐Ul n 飞1jnuze 4.7 L :3 mm4 mr刀，可涂布，15mm55 lTlm 4. 8 4.9 4. 10 4. 11 4. 12 (丁且在(丁C55006.。.1 g 0 :取1学人j、剪刀氏

4、j嚣Cfv1CC:35202，氏菌CMCC55307句、10%二二氧化碳和85%fJ目的氏CMCC55224c 0可用具双相压力叶的5 培养基和试荆有规定外，树为分析tJ.g115生化试剂，水为蒸锢在。州/1942组120075. 1 布氏肉汤见第/.15. 2 布氏琼脂(见第人2 5. 3 月于浸?夜地5毒4血琼脂(5. 5 氏5. 6 膜蛋白陈琼脂(见第/.55. 7 版脱梭i音养5. 8 内色氓。5. 9 J门K(/ 氧化氮济?佼G5.120.85同灭菌生理盐水。6 楼验方法6. 1 方法摆要动物?原位食品中物隙性111可6.2 检验程序民菌属的人哩6图16.3 布鲁氏商黯定量检验(MP

5、N去)6. 3.1 检样稀释6.3. 1. 1 以无菌操作将检样25rnL)放少、生化鉴氏菌属的检验程序225 rnL灭现盐水的灭由A广口瓶内:5探SNjT 1942. 1-2007 成1: 10的稀释液。恼i体检样用灭菌均质器，以8000 rjmin 10 000 r/min的速度处理1min，做成1 : 10的均匀稀释清币6. 3. 1. 2 用1mL灭囱收管收取1: 10稀*乎被1mL、注入含有9mL灭菌1:现就水或其他稀粹液的试管内，振摇试管j昆匀.做成1: 00的稀释液。6.3. 1.3 另取1mL灭菌阪管，按七条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次.换用1支1mL 灭菌吸管。

6、6. 3. 1.4 根据食品卫生标准提求或对检样污染情况的估计，应择三个稀释度。6. 3. 2 增菌试验将1mL f辛检样品接种子布氏肉汤24 h土2人6.3. 3 分离培养将呈轻度浑浊:有沉淀不形需氧(10%二氧化碳)和有氧条氏染色和证实试验c的1功()!旨形成微小、灰色不浴血的.落。6.3.4 染色及镜检在上述平板上，挑取班商酶，尤3宇恼，6.3.5 (提集试验(下述方法任6. 3.5. 1 破片凝集试验:取用接种环挑取分离可疑菌荡，匀律;虫，则试验为日性。即可步IJ养，用于进步鉴定3内，每一稀料j支接种二?气置:360C土1c油箱内，培养或布氏琼脂平板上.分别于做，按表1观察蓝|洛形态，

7、并做革兰什1氏琼脂形成无色、生.透明、剧形、表面光滑、边缘整齐、中央稍凸jli、直径约2 rnrn-3 rnm的!囱落。检，布鲁民I菊属为前兰氏阴性1求中F疫血洁，另一立;M1向等量生理盐水衡状或颗粒状凝集，生理盐水仍均液或膜蛋白陈琼脂斜面.做纯培飞楼翠豁黠嫖黯怒毅然慈毒草慧磁在离破蹈寇军V翻秘滋豆F; 6.3.5.2 试式管凝集岚验:本i试验金辍辘潜耀露擎赣掺陆启.叮扫曦撼藤密叹!院;芷tr.0 1取权;洁吉j净争的小j凝疑集d哲管吕苦;8支第一铛管加0.5.%;石石炭酸生工理理盐7水j(2. 4 I11L白.i第:工二管室第丘管仔加付?咒古mL，:第第六、i七二斗伊科怦严汽汗r中不加入此生

8、王那唱盐水;用1口m川11然后吸出2.0rnL，移入第二管0.5m川L八、乘剩Ij余1.5 mL弃去，如前法沮合均匀后，吸出O.5汀，移入第二管0.5mL.依次类推到第四管.第四管说匀后吸出0.5rnL弃去，然后各管如表2加!人所需物质。置360C士10C恒温箱中4b G h，取出后放室温18h22 h(360C土10C24 h也可)，观察结果。十十十十为液体完全透明，菌体完全被凝集.呈伞状，沉于管底，振荡时沉淀物是片状、块状或颗杭状.即100%凝集。斗十十为略浑浊，菌本大部分被凝集沉于管j成.振荡所见如上，自Il75%凝集。一十为液体不甚透明，管底有明报凝集物沉淀-振荡见絮状物，约50:y凝

9、集。十掖体更不透明.有不很显著凝;集物沉淀，或又有沉淀痕迹，约2-5凝集。一液体悴油，fVJ有部分沉陡物，振荡立即Jt车把iJiJ具体操作见农:2。d SN/T 1942.1 2007 3挝吃草二I寸13 L f 1 1 ; 50 试剂府最/-飞J6.3.6 分别接种七i击360C十1吃表3两种mU每氧化隅硝酸敖毛除了CM(、C55006.fj前CMC(丁55224)做对照常(羊布CMCC55:305. CMCC5;: 202 氏陆CJVlCC5530了?凝集反应| 嗡于中jilSN/T 1942. 1-2007 RPMTDl ()4 豆豆常见1ii二型矿HN. 1. F 千七i瑞环境寸1.:

10、360巳叮lC6.3.7.2 2 d;3 d 料j叩进行:rt:习时中1 : 2GOOO、1: 50000和1: 100000.碱性复红在培养基中种染和|三种不同度的五种培养慕伫，各接种环菌液，浓度为1: 50000和1: 1()0000 , 3d-4df舌始奋:拉牛长情况6 3.7.3 H少S纸6.3.7.4 6.3. 7.5 10 J毛乙子培养物试管1)才以制定试管内有元游离比SoH,S 生dIJ 前生化反应相f旺。人、M血RPM血月1玻片试验，也可用:本试验也适用于常规分型试验。世界卫生组织推荐丁b瞪商体作为分类月jj制定于二布鲁氏菌丰台所有RPM湾菌株对Tb噬菌体均不敏感自250 gJ

11、 6. 2 1. 2 18 ? 3 :3 G 8. 7 94 。3 。9. , :. ( 1日3 。23 4. 6 94 l 。3. 6 O. 17 18 3 。I 38 8. 7 ll O -一一一一吨时、一甲卜一一十.，._。7. 2 l. 3 18 :3 。3 64 180 二一一一一一一句。3. 6 38 3 。43 9 180 _T_ l 1 l. 3 L.云j3 1 75 ; 17!200 一-一，-一一一、矗山.嘈1 l 11 3.已3 1 2 120 37 420 2 。11 3. () 42 3 3 160 40 120 Y_.-,- -一-_._.、.2 15 4. 5 4

12、2 3 2 。93 18 420 3 。16 4. 5 42 3 ? 1 150 、3巧I 420 2 。9. 1 1. 38 3 2 2 210 40 430 2 。3. 6 42 2 3 290 90 2 。2 4. 5 42 电5LZ 。2/10 42 -. 一2 。42 3 l60 90 2 000 2 I 1 I 1 I 20 I 4.5 d2 i: :3 3 2 1 100 I .1 80 1 0 f工注工如7果按2 1 种应:扩大十倍.分别为1.() ,0. J和0.01时，表巾的数字相应缩小十倍。如果按种;盘缩小十倍，分别为.001和()O()J时，我小的数字相应扩大卡陪其余类推。9 hoowiiF 嗡曲国1:1:.人搅检验检:Jlt 出口动物源性食品中中华人中I!I际准出版社出版北京复兴门外三织河北街1号码:100015 阿拉twww. SpC. n川cn司主活:中我标准出版社黎圣王岛r:p秘了一印刷j 口抽川叩-J ntruF .1 8 r:p张l2007平11月1 2 000 16 1230 2007年11月第一版880 书号-218199寸，nuv n 叫/町-ji-nL A吁Q旷i T1 / 剖问安U