GB T 16175-1996 医用有机硅材料生物学评价试验方法.pdf

1、GB!T 16175-1996 前言本标准在制订过程中参考借鉴有关国际标准和国内外先进标准，对多种愿用有机硅材料进行了实验验证。本标准第2、3、5、6、7、8、9章参照采用I9010993(医疗帮械生物学评价3系列标准，其余部分参考国内外先进标准综合制定而成。这些试验方法基本可以满足对医用有机硅材料的生物学评价需求.对于特殊用途材料的生物学评价，可参考本标准在选择指南中规定的补充生物学评价试验项目及试验基本要求，按照有关国内外标准进行评价，本标准由国家医药管理局提出。本标准由国家医药管理局医用高分子产品质量检测中心归口.本标准起草单位z国家医药管理局医用高分子产品质量检测中心、上海生物材料研究

2、测试中心。本标准主要起草人g由少华、薛森、如I秦玉、孙晓、王昕、顾国珍.l 1 范围中华人民共和国国家标准医用有机硅材料生物学评价试验方法organic slllc幅田国胆，恤If or medlcal u配一酬。logi四Ieval uatiOD阳1m咄咄本标准规定了医用有机硅材料的生物学评价试验方法。GB!T 16175-1996 本标准适用于医用有机硅材料的生物学评价.其他医用材料亦可参照采用。2 试验选择指南2. 1 医用有机硅材料按其在临床使用部位和接触时间分类，按表1选择生物学试验项目。2.2表l所列生物学试验不能满足材料生物学评价需求时，按表2选择补充评价试验项目。对于可能影响机

3、体生殖功能的材料，应补充做生殖和发育毒性.，Xot可能在体内降解的材料应做生物降解试验。注z表2所列补充评价试验项目本标准未规定试验方法，可参照有关国际标准或国外标准进行评价。2. 2. 1 亚慢性毒性z该试验测定在大于24h但不超过试验动物寿命的10%的时间内，试验材料或浸提液一次或多次作用的影响。试验应与实际使用情况相一致，2.2.2 遗传毒性z该试验用哺乳或非哺乳动物细胞培养技术测定材料或浸提液引起的基因突变、染色体结构和数量的变化，以及对DNAC脱氧核糖核酸的影响或其他遗传毒性.2.2.3 慢性毒性E该试验是在不少于试验动物寿命的10%的时间内，一次或多次将材料浸提液作用于试验动物，测

4、定对动物的影响。试验应与实际使用情况相一致。2.2.4致癌性z该试验是在试验动物的寿命期内，一次或多次将材料或浸提液作用于动物，测定其致肿瘤性。试验应与实际使用情况相一致，2.2.5 生殖和发育毒性E该试验评价材料或浸提液对生殖功能、胚胎发育及胎儿和早期婴儿发育的潜在影响回2.2.6 生物降解z该试验测定材料或浸提液的滤出物或降解物的吸收、分布、生物转化和消除过程。国京技术监督局1996-03-07批准1996-10-01实施2 GB!T 16175-1996 表1医用有机硅材料生物学试验项目选择材料分类生物学试验项目接触时间z原发口腔急性A时接触24 h-30 dJ 试验试验激试验试验试验C

5、t(:期接触24 h-30 C长期接触(30dl A 皮肤B C A 麦丽接触粘旗B C X A 损伤表面B C X 飞X X A 间接与E i血液流路C X X X X A 体外至体!组织X E 内接触/骨/牙C X X A 循环血液B X C X X X X A 组织/骨B X C X X X 体内植入A 血擅B X C X X X X 注，X为应选择项目.4 GBIT 16175-1996 3材料漫提液制j备方法3. 1 漫提容器3. 1. 1 浸提应在一洁净、化学惰性的封闭容器中进行，容器内顶部空间尽量小并保证安全性。3.1.2 浸提应在防止供试晶污染的条件下进行D3. 2 浸提条件3

6、. 2. 1 浸提温度、时间和设备接实际使用情况选择表3所列条件的一种。表3浸提条件浸提温度.C浸提时间.h浸提设备37士124土2电热恒瘟培养箱37士172土2电热恒温培养箱50士272士2电热恒温培养箱70 :1: 2 24士2电热恒温干燥箱121士21 :1: O. 2 电热蒸f气灭蕾器3.2.2 供试品表面积或重量与漫提介质比例按表4规定。表4供试晶表面积或重量与浸提介质的比例供试晶厚度.mm表面积或重量与漫提介质体积比例O. 5 6 cm2/ mL 0.5-1. 0 3 cm2/ mL 1. 0 1. 25 cm /mL 不规则形状0.2 g!阻L3.2.3根据试验的不同需求选择下列

7、浸提介质z的极性液体E水，生理盐水，无血清液体培养基;b)非极性液体s新鲜提纯的植物油(如棉籽泊或芝麻油), c)其他浸提液体:5%(V!V)乙醇水溶液.5%(V!V)乙醇生理盐水溶液，聚乙二醇400(稀释至生理渗透压).二甲亚枫和含血清液体培养基。3.2.4 将供试品用自来水、蒸馆水依次冲洗干净后滤纸吸干，切成5mmX30 mm条状，置浸提容器内，按规定量加入授提介质，使液体浸没供试品。3. 2. 5 浸提液制备后存放应不超过24h. 4 细胞毒性试验(细胞地殖度法)4. 1 方法提要本试验是将一定量的材料或浸提液加入细胞培养液中培养细胞，通过对细胞生长和增殖的影响来评价材料对细胞的潜在毒性

8、作用。4.2 试验样品的制备和要求4. 2. 1 将材料薄片厚度运1mm)用肥皂水清洗，重蒸馆水洗涤，滤纸吸干，医用不锈钢丝悬吊，高压蒸汽灭菌或用紫外线灯照射灭菌3h(正反两面各1.5 h)。5 GB/T 16175-1996 4.2.2 阳性对照.64g/L苯盼溶液团4.2.3 阴性对照E含医用不锈钢丝的空白管。4.3 细胞株推荐使用L-929细胞(小鼠成纤维细胞).试验用细胞为传代4872h生长旺盛的细胞。4.4 培养基与试剂4.4.1 Eagle s MEM加入10%(V/V)小牛血清。4.4.2 磷酸盐缓冲液CP.B.S)无钙缕的磷酸盐缓冲液100.0 mL 盼红溶液10.0 mL 2

9、00 g/L氯化镜熔液0.5 mL 100 g!L氯化钙溶液1. 0 mL 水加至1000mL 4.5 试验步骤4.5.1 细胞悬液制备:用细胞培养基配制4万个/mL细胞悬液分注于试管内(1mL/管).阴性对照组13管(1管备用).材料组10管(1管备用).必要时设阳性对照组3管，置3TC恒温培养箱中培养24h。4.5.2 材料浸提液制备2将细胞培养基按1crn2试样表面积10四L的比例加入放有试样的试管中，37C下浸提24h。4.5.3 漫提液交换:24h后，每管舍弃原培养液，阴性对照组9管用新鲜培养液交换，阳性对照组用含64 g!L苯酷的细胞培养液交换，材料组用含50%(V/V)漫提液的新

10、鲜培养液进行交换，并对三支阴性对照管进行细胞计数，其余置3TC继续培养.4.5.4 细胞计数与吸光度测定4.5.4.1 分别于2、4、7d将对照组和材料组各3管进行细胞计数或吸光度测定，以判断细胞的增殖霞.4. 5.4. 2 细胞计数法:用含掏橡酸的结晶紫罗兰染色，血球计数板在显微镜下计数，上下限不得超过10%，否则重新计数n4.5.4.3 分光光度计测定吸光度法(仲裁法h弃去原细胞培养液，用P.B.S洗涤，10%(V!V)甲隆溶液固定lOmin，水洗23次，加5g!L结晶紫罗兰1.5 mL染色3min，水洗23次，加10g/L十二娩基硫酸纳3.5mL.用分光光度计在波长588nm下测定吸光度

11、.4.6结果计算4. 6. 1 细胞计数法:细胞计数经95%可信度的数理统计，得上限、平均数、下限，通过细胞计数计算相对增殖度(RGR).见式(1)。=4且归)见削川m算阳中中=增%对阳相法定测度光吸叶户hvaa X 100 ( 1 ) X 100 .c 2 ) 4.6.3 毒性评定z按表5规定把RGR值转换成六级反应以评定材料毒性程度。, E GB/T 16175-1996 表5反应分级标准反应。级1级2级3级4级5级4. 7结果评价4. 7. 1 试验结果为0或1级反应为合格.4.7.2 试验结果为2级反应的，应结合细胞形态分析，综合评价。4.7.3试验结果为3-5级反应为不合格.4.8

12、试验报告% 相对增殖度注10075-99 50-74 25-49 1-24 。4. 8. 1 试验材料、阴、阳性对照材料的化学名称，商品名称，产晶批号，生产厂家以及材料试梓尺寸规格，灭菌方式。4.8.2 试验用细胞名称、来源、培养基种类。4.8.3 试验方法和步骤。4.8.4 计算细胞相对增殖度-4.8.5 对试验材料进行评价。5 过敏试验5. 1 方法提要本试验是将一定量的材料或材料浸提被与豚鼠皮肤相接触，以评价材料对生物体的潜在致敏性。5.2 试验动物5. 2. 1 白色豚鼠体重300-500g.1-3月龄，雌雄均可，试验样品组每组至少10只，对照组每组至少5只.5.2.2 试验前24h.

13、剃除豚鼠背部4cmX6 cm区域毛发.5.3试验样品的制备和要求5. 3. 1 供应内注射的试样的制备5.3.1.1 可溶性材料z不超过100g/L的水溶液或泊溶液。5. 3. 1.2 不溶性材料z按第3章制备材料生理盐水或植物油浸提液.5.3.1.3 含浸提介质或试验材料的完全弗氏佐剂的制备z将上述漫提介质、材料溶液或材料漫提液与完全弗氏佐剂等容积混合，用力搅拌数分钟至乳化完全为止。5.3.2 供局部应用的试样的制备5. 3. 2. 1 液体材料g按庭内注射要求制备。5. 3. 2.2 固体材料:按第3章制备材料生理盐水或植物油浸提液。5. 3. 3 对照材料的制备5.3.3.1 阳性对照，

14、5%(V/V)甲醒溶液，5. 3. 3. 2 阴性对照E同批材料浸提介质或材料赋形剂。5. 3. 4 经预试后，试验液体的最终浓度若导致局部溃荡、坏死或全身反应则将浓度降低到最大耐受剂7 量.5.4 试验步骤5.4. 1 诱导GB/T 16175-1996 5.4.1.1 庭内注射，70%(V/V)乙醇清洁豚鼠去毛区，在每只豚鼠背脊柱两侧6点对称皮内注射，各点相距1.-.2cm，每点注射剂量为0.1mL.注射剂型和位置见图10头1. I .1 I完全弗民佐荆与生理盐水或新鲜精制植物油的乳化物材料溶踱或材制浸提液g阴性或阳性对照掖2. I .2 3. I .3 I材料溶准吨材料漫提液或阴阳性对照

15、液与完全弗氏佐剂的乳他物尾图I注射剂型和位置5.4.1.2 局部斑贴z皮内注射后l周，在豚鼠去毛区再度剃毛70%(V /V)乙醇清洁，如未产生剌激症状，各注射部位以100g/L十二皖基硫酸纳石蜡液(SLS)涂布.24h后贴敷于材料溶液、漫提液或阴阳性对照液中浸泡至饱和的2cmX4 cm滤纸片，固定并留置48h士2h. 5.4.2激发局部斑贴后至少14d.将豚鼠腹部一侧毛发剃除，用70%(V /V)乙醇清洁，在腹侧去毛区贴敷同5.4. 1. 2处置的撞纸片，固定并留置24h:J:2人5.5 结果观察除去贴敷物后24h、48h、72h观察激发部位反应，按表6记录每一观察时间和每一激发部位红斑和水肿

16、反应分级。表白皮肤反应分级标准红斑反应分级水肿反应无红斑。无水肿极轻微的红斑(刚可察出)1 极轻微水肿刚可察出局限性红斑模红色)2 轻微水肿边缘和高度均局限)中度红斑(鲜红色，区域清晰)3 中度水肿边缘升高近1mm) 严重红斑(紫红色，形成轻微焦躏)4 严重水肿高度超过1mm，边界超过接触区5.6结果评价5.6.1 阴性对照组动物皮肤反应分级小于1时，试验样品组动物反应分级为1或大子1时认为致敬s阴性对照组动物反应分级为1或大于1时，试验样品组动物反应超过对照组中最严重的反应则认为致敏。5.6.2 60%的阳性对照动物的皮肤反应应为2或大于2.否则应重复试验。5.6.3 封闭性包扎可能使动物产

17、生皮肤反应，可与阴性对照组动物比较，如需再次激发，应在首次激发后7d进行，贴敷于动物另一侧腹部。5. 7试验报告5. 7. 1 试验材料的化学名称、商品名称、产品批号和生产厂家，浸提介质和浸提条件，5. 7.2 使用动物的品系、性别、体重和健康状况.5.7.3描述每次观察期试验材料组和对照组动物的皮肤反应分级情况。8 5.7.4 对试验材料进行评价。E皮肉剌激试验6.1 方法提要GB!T 16175-1996 本试验是一种非特异性的急性毒性试验田通过动物皮内注射材料浸提液，以评价材料是否对组织有毒性作用。6.2试验动物6.2.1 健康臼色家兔，同一品系，雄雄均可，体重不低于2kgo 6.2.2

18、 每种材料至少需用3只家兔，若试验结果可疑，应重复试验，6.2.3试验前24h在兔脊柱两侧各剪剃5cmX25 cm区域兔毛，应避免损伤皮肤。6.3按第3章规定制备材料生理盐水和植物油浸提液。6.4 试验步骤6.4.1 70%100个4 血管充血无。极少l 轻度2 中度3 重度伴血管破裂4 水肿无。极少1 轻度2 中度3 重度4 8.6结果评价8. 6. 1 根据表11计算结果，平均记分为0分提示无剌激，14分为极轻微剌激，58分为轻度剌激，911分为中度刺激，1216分为强剌激物。8.6.2 对照组记分如大子9则提示对照试剂具有剌激性或给药时损伤对照侧组织，应重新选择对照试剂并重试。8.7试验

19、报告8. 7. 1 试验材料和阴性对照材料化学名称、商品名称、批号及生产厂家，浸提介质及浸提条件。8.7.2 试验动物品系、体重、性别和鼠龄。8.7.3 试验方法和步骤。8.7.4 结果及评价。9 眼剌激试验9.1 方法提要本试验将一定量的材料或材料浸提液滴入动物眼内，观察角膜、虹膜和结膜的反应，以评价材料对眼的剌激作用。9.2试验动物采用健康成年新西兰或大耳白兔，体重23kg.每种材料至少用兔3只。9.3试验样品的制备和要求9.3. 1 固体水溶性材料碾成细末，用6g/L氯化锅溶液溶解，每0.1mL溶解液内含材料应不多于100 mg. 9.3.2 材料浸提液制备按第3章规定，浸提介质采用6g

20、/L氯化铺榕液。9.4 试验步骤9.4. 1 试验前24h用检眼镜检查每只兔双眼有无异常。9.4.2 将0.1mL液体材料或材料寝提液滴入家兔一眼的下结合膜囊内，闭眼1s，1侧眼作为空自对13 GB!T 16175-1996 照。9.4.3 材料如需进行重复接触试验，试验周期应与材料的临床使用期相近，但接触时间不超过21d.重复接触试验每天滴眼一次，要求同9.4.2. 9.5结果观察9. 5. 1 单次滴眼在滴入后1h、24h、48h租72h检查动物双眼，按表12记分标准记录。9.5.2 多次滴眼在滴入前后1h检查动物双眼，按表12记分标准记录。9.5.3如有持续性损害应延长观察期，以确定其损

21、害程度，但不超过21d，重度病变则不必延长观察。部位角膜虹膜结膜表12眼损伤反应记分标准反应混烛度(选最致密混浊区), 透明角膜云野或弥散泪浊区，虹膜清晰可见易识别的半透明区，虹模模糊角膜呈乳白色，看不见虹膜，勉强可见瞌孔角膜完全混浊，看不见虹膜和瞌孔角艘受累范围s小于或等于1/4.大于0小于1/2.大于1/4小于3/4.大于1/2大于3/4直至整个角JlI!区域正常超出正常皱粟，充血水肿，角膜撒克血(其中一种或全部).对光反应存在，但反应减弱光反射消失，出血或严重结构破坏(其中一种或全部充血累及险结膜和球结膜，不包括角膜和虹艘), 正常血管明显充血血管弥散性充血，呈暗红色，纹理不清弥散性严重

22、出血水肿2无水肿轻微水肿(包括瞬膜明显水肿伴部分险外翻水肿使眼险呈半闭合状眼险水肿，眼呈半闭合到全闭合状分峰物z无分泌物任何超过正常量的情况(不包括动物眼内毗少量溢液分泌物浸湿眼险及眼险邻近费毛分泌物浸湿眼醋、睫毛蓝眼周围区域注带警号者为阳性结果.14 记分。1椅2快3樨4餐。1 2 3 。1 ，睡2铃。1 Z蕃3铸。l 2钟3骨4僻。l 2 3 GB/T 1 61 75 -1 996 9.6结果评价9.6. 1 单次接触动物在任何观察期内，有2/3滴入材料或材料漫提液的眼睛出现阳性结果即认为该材料为眼的阳性剌激物。9.6.2 重复接触动物在任何观察阶段，有一半以上动物眼出现阳性结果则认为该材

23、料为眼的阳性剌激物。9.6.3如一半以下动物眼出现阳性结果或反应可疑，应另取动物重试。9.7 试验报告9. 7. 1 试验材料及浸提介质化学名称和商品名称、批号及生产厂家:材料浸提液制备方法.9.7.2试验动物品系、体重及性别。9.7.3试验方法和步骤。9.7.4 结果及评价。10 怠性全身毒性试验10. 1 方法提要本试验是一种非特异性急性毒性试验，通过动物静脉或腹腔注射材料浸提液，以判断材料的急性毒性作用。10.2试验动物10.2. 1 选用健康小白鼠，体重17-23go 10.2.2 将小白鼠随机分为试验材料和对照两组，每组5只。做过本试验的小白鼠不得重复使用。10.3试验样品的制备和要

24、求10.3.1 按第3章规定制备材料生理盐水和植物油浸提液。10.3.2 同批号材料浸提介质为阴性对照液。句10.4 注射剂量和途径10. 4. 1 试验组动物分别由尾静脉注射材料生理盐水浸提液或由腹腔注射材料植物油漫提液，剂量为50 mL/kgo 10. 4. 2 对照组动物由尾静脉或腹应注射与浸提液同批号的生理盐水或植物泊，剂量为50mL/kgo 10.5结果观察注射后于4h、24h、48h、72h观察记录试验和对照组动物的一般状态、毒性表现和死亡动物数。其毒性程度根据表13观察指标分为无、轻、中、重度和死亡。注射后24h、48h、72h称量记录两组动物的体重。表13注射后动物反应观察指标

25、程度症状无未见毒性症状轻轻度症状，但无运动减少、呼吸困难或腹部剌激症中脏部剌激症状.呼吸困难，运动减少.眼险下垂，腹泻，体重通常下降至15-17g 重衰竭、发钳、震颤，严重腹部剌激症状，眼险下垂，呼吸困难，体重减轻，通常小于15g 死亡l注射后死亡10.6结果评价10.6. 1 在72h观察期内，试验组动物的反应不大于对照组动物，则认为材料符合试验要求.10.6.2 如试验组动物有2只或2只以上出现中、重度毒性症状或死亡则认为该材料不合格。15 GB/T 16175-1996 10.6.3 如试验组动物中有2只或2只以上出现轻度中毒症状，或l只动物出现中度毒性症状或死亡，则应另取体重18-19

26、g小白鼠10只为1组进行复试.复试结果符合10.6. 1，则认为该材料合格。10.6.4 如试验组5只动物的体重均下降，即使没有其他中毒症状，仍需用10只小白鼠复试。10. 7 试验报告10.7.1 试验材料化学名称、商品名称、批号及生产厂家p材料浸提液制备方法，10.7.2试验动物品系、性别及体重.10.7.3 动物的反应可按无、轻度、中度、重度和死亡描述。10.7.4 对试验材料进行评价。11 溶血试验11. 1 方法提要本试验是通过材料与血液直接接触，测定红细胞释放的血红蛋白量以检测材料的体外溶血程度。11.2试验步骤11. 2. 1 新鲜稀释抗凝兔血的制备。11.2.1.1 新采兔血2

27、0mL加20g/L草酸御1mL.制备成新鲜抗凝兔血。11.2.1.2取新鲜抗凝兔血8mL.加生理盐水10mL稀释。11. 2. 2 称取试样每份5亩，共3份。自来水冲洗后用蒸馆水冲洗，墟纸吸干水分后将试样切成5mmX30mm条状，置试管内，每管加生理盐水10mL;阴性对照3管，每管加同批号生理盐水10mL;阳性对照3管，每管拥蒸馆水10mL.全部试管浸入3TC水浴内30min. 11. 2. 3 不适宜称重取样的材料根据3.2. 2供试品表面积与浸提介质的比例量取试样，操作步骤同11.2.2。11.2.4 全部试管每管加稀释兔血0.2mL.轻轻混匀后置于3TC水浴中继续保温60min. 11.

28、 2. 5 倒出各管内液体离心5min(2 500 r /min).吸取上清液移入比色皿内，用分光光度计在545nm 波妖处测定吸光度。11.3 结果计算11. 3. 1 试验结和对照组吸光度均取3管平均值。阴性对照管的吸光度应不大于0.03.阳性对照管的吸光度应为0.8:1:0.3.11. 3. 2 榕血率按式(3)计算样晶吸光度-阴性对照吸光度溶血率(%)= - - - - - - X 100 u. .叫3) 阳性对照吸光度一阴性对照吸光度11.4 结果评价11.4. 1 溶血率不大于5%，则材料符合医用材料的溶血试验要求。11.4.2 溶血率大于5%.则预示试验材料有溶血作用。11. 5

29、 试验报告11. 5.1 试验材料化学名称、商品名称、批号及生产厂家。11. 5. 2 各试验管和对照管的吸光度及各组的平均值和溶血率。11. 5. 3 对试验材料进行评价。12 热原试验12. 1 方法提要本试验是将一定量材料浸提液由静脉注入家兔体内，在规定的时间内观察家兔体温升高的情况，以判断浸提液中所含热原的限度是否符合规定。12.2试验动物16 GB/T 16175一199612. 2. 1 健康成年新西兰兔，体重1.7-3. 0吨，雄兔应无孕。12.2.2 测温前7d内应在同一环境条件用同一饲料饲养，在此期间家兔体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。12.2. 3 未经用于

30、热原试验的新兔，应在试验前7d内预测体温进行筛选，筛选试验条件与热原试验测温条件相同，但不注射授提液，每隔1h测量体温1次，共测4次，体温应均在38.0-39. 6 c的范围内，且最高最低体温的差数不超过0.4c的家兔方可供试验用。12. 2. 4 已用于热原试验的家兔，如试验结果符合规定，至少应休息48h.方可供第二次试验用。其中升温达0.6C的家兔应休息两周以上，再按新兔一样测量体温，合格后方可继续供试验用。如试验结果不符合规定，且其组内家兔平均升温达0.8C或更高时，则组内全部家兔不再使用。两次试验间惰的时间超过3周时，应按新兔一样测量体温。12. 2. 5 每一家兔使用次数不应超过10

31、次。12.3试验祥晶的制备和要求12. 3. 1 与浸提液接触的所有器具均应置电热干燥箱内，180C干烤2h或250C干烤30min以除去热原物质。12.3.2 接第3章制备材料浸提液，浸提介质采用预试热原检查合格的氯化销注射液。12.4 试验步骤12. 4. 1 试验用家兔准备12.4. 在试验前1-2d，供试用家兔应处于同一环境中，试验室和饲养室的温度差不得大于5C。在一次试验全过程中，室温变化不大于5C。12.4.2 一种浸提液用兔初试3只，复试5只。12.4.3 家兔禁食2h后预测体温2-3次，间隔时间30-60min，后两次体温之差不超过O.2 C.以此两次体温的平均值作为该兔的正常

32、体温，当日使用的家兔体温度在38.0-39. 6.C范围内，同组各兔间正常体温之差不得超过1C。12.4. ,. 4 家兔装在固定器内，应防止骚动，30lln后开始第一次测温，将虹门体温汁或测温探头插入兔脏门，深度约6cm，测温时间每兔至少2minD 12.4. 2 测定家兔正常体温符合要求后15min内，自耳静脉缓慢注入材料浸提液，剂量为10mL!kg , 浸提液温度约38C. 12.4. 3 注射完毕每隔1h测温1次，共测3次，以3次体温中最高的l次减去正常体温，即为该兔体温的升高度数。12.5结果评价12. 5. 1 初试3只家兔体温升高均在0.6C以下，并且3只家兔体温升高总数在1.c

33、以下时;或在复试5只家兔中升温0.6C或0.6C以上的兔数不超过1只，并且初试复试合并8只家兔的升温总数不超过3.5C时，均认为材料符合热原试验要求。12. 5. 2 初试3只家兔中，若有l只家兔升温0.6C或0.6C以上，或3只家兔升温均低于O.6C，但升温总数达1.4C或1.4c以上时，应另取5只家兔复试，试验方法向上D12. 5. 3 初试3只家兔升温0.6C或O.6C以上兔数超过l只时;或在复试5只家兔中升温0.6C或0.6C以上兔数超过l只时;或初试复试合并8只家兔升温总数超过3.5C时，均认为材料不符合热原试验要求。12.6试验报告12. . 1 试验材料化学名称、商品名称、批号及

34、生产厂家s材料浸提液制备方法。12.6. 2 试验动物数量、体重、预测体温时间。12. 6. 3 试验动物测温记录、注射剂量。12. 6. 4 对试验材料进行评价。11 GB!T 16175-1996 13 植入试验13.1 方法提要本试验将材料植入家兔背部肌肉内，观察植入后不同时间材料周围组织反应情况，以评价材料在肌肉组织中的组织反应程度，13- 2 试验动物13. 2. 1 健康成年新西兰或大耳臼家兔，体重2.5kg以上，每种材料需兔9-15只，13- 2. 2试验前24h.剪去动物脊柱两侧背毛。13.3试验样晶的制备和要求。13.3.1 试验材料z加工成直径1mm、长10mm或直径2mm

35、、-I*6mr卫的圆柱形试样，要求表面光滑，边缘平整。将试样用蒸馆水冲洗灭菌后备用。13. 3- 2 对照样品z推荐选用预试合格的医用级热硫化甲基乙烯基硅橡胶，制备同13.3. 1。13- 4 试验步骤本标准推荐注射法，也可采用常规手术法进行操作。 13. 4. 1 麻醉和消毒s麻醉采用静脉注射戊巴比妥铺25-30mL/kg或硫喷妥销15-20mg!kg或其他适宜的麻醉剂。按外科常规手术要求以确町和70%V!V)乙醇彻底消毒手术区域。13. 4. 2 手术步骤:按外科常规手术要求进行操作。在兔脊柱两侧约2.5cm处等距离各选4个植入点，每点间距2cm，一侧植入试验材料，另一侧植入对照样晶。用手

36、术刀片切开植入点皮肤，分离皮下组织和筋膜，注射法采用穿刺针与脊柱平行成30。角刺入肌肉内，取一探条将试条推入肌肉内E手术法用止血钳分离肌肉，将试条送入深度为1-2cm的肌肉内。医用缝合线缝合肌筋膜和皮肤切口B植入时如有过量出血，应在另位置重新植入备用试样。13-5结果观察13- 5. 1 肉眼观察z短期植入在植入后第1周、4周、12周，长期植入在植入后第1周、4周、12周、26周、52周，分别处死动物2-3只，取出脊柱两侧肌肉，肉眼观察植入部位有无皮下和肌肉组织异常病变。切取包裹试样周围0.5-1cm的肌肉组织，置10%V!V)甲l榕液中固定。13- 5. 2 组织病理学检查13. 5. 2.

37、 1 将固定组织石蜡包埋切片，伊红苏木素和VG染色，每块肌肉做两种染色，每种染色各做两张组织切片，于光学显微镜下观察，比较试验材料与对照品植入部位周围组织反应情况，以及纤维囊腔厚度、炎症细胞和其他细胞存在情况，试样-组织界面处的其他异常情况等。13.5.2.2 炎症细胞反应分级按表14规定。表14炎症细胞反应分级标准级别炎症细胞反应I级试样周围未见或仅见极少量淋巴细胞E级试梓周围可见少量淋巴细胞E级试样周固有少量嗜中性桩细胞，淋巴细胞浸澜和巨细胞反应N级试样周围可见以嗜中性拉细胞浸润为主的炎症反应，可见吞噬细胞13.5.2.3纤维囊腔形成分级标准按表15规定。18 GB/T 16175-199

38、6 表15纤维囊腔形成分级标准级别纤维囊腔形成I级囊腔厚度稳定，无继续增生现象E级纤维化囊腔致密，壁的厚度比形成初期为薄E级试样周围可见纤维母细胞、纤维细胞与胶原纤维，并已形成纤维囊腔结构N级试样周围可见小血管与纤维母细胞增生，开始形成疏松的囊壁13-6结果评价13.6.1 每一期试验材料与对照品组织学观察比较，反应程度前者超过后者一级的片子数不得多于总数的1/4.13.6.2 试样植入不同时期的炎症细胞反应和囊腔形成程度见表16规定。表16组织反应程度指标植入后日期炎症细胞反应程度纤维囊腔形成程度1周N级4周罢王E级12周;1级26周1级52周1级13.7试验报告13. 7- 1 试验材料化学名称、商品名称、批号及生产厂家s试验材料形状、大小。13.7. 2 动物品系、体重、性别、数量。13.7.3 植入方法。13.7.4 肉眼观察及组织学观察情况。13. 7. 5对试验材料进行评价。无囊壁形成N级运E级;1级I级19