GB T 21770-2008 化学品.(有机磷化合物)急性染毒的迟发性神经毒性试验方法.pdf

1、ICS 13.300; 11. 100 A 80 中华人民=lI工./飞、和国国家标准G/T 21770-2008 化学品(有机磷化合物)急性染毒的迟发性神经毒性试验方法ChemicalsCorganophosphorus substances)-Test method of delayed neurotoxicity foIIowing acute expos盯e2008-05-12发布中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局中国国家标准化管理委员会2008-09-01实施发布中华人民共和国国家标准化学品(有机磷化合物)急性染毒的迟发性神经毒性试验方法GB/T 21770-2008 * 中国标

2、准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X123016印张0.5字数10千字2008年7月第一版2008年7月第一次印刷* 书号:155066 1-32178 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)GB/T 21770-2008 前富本标准等同采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试指南No.418(1995年)(有机磷化合物急性染毒的迟发性神经毒性试验)(英文版)。本标准作了下列编辑性修改z一一增加了范围部分;一一计量单位改成我国法

3、定计量单位;一一删除了OECD的参考文献部分。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。本标准负责起草单位z中自疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所。本标准参加起草单位z宁波出人撞检验检疫局、国家环境保护总局化学品登记中心、中国环境科学研究院、沈阳化工研究院安全评价中心。本标准主要起草人z李涛、孙金秀、龙再浩、李涛、马中春、陈小青、林振兴。I GB/T 21770-2008 OECD引富E GB月21770-2008化学品(有机磷化合物)急性染毒的迟发性神经毒性试验方法1 范围本标准规定了化学品有机磷化语、试验基本原则、试验方法本标准适用2. 1 术语和定义下

4、列术语和定2. 1. 1 迟发性神指一组神经织中3 试瞌基本原则受试物一次荆量经物21d，包括行为异常48 h)，特别是NTE检测。染4 试验方法4. 1 实验动物4.2 动物种居突病，以及神经性胆碱能化作用。观察动化检测(通常在染毒后24h和进行组织病理学检查。使用健康、初成年、8月龄12月龄的家养产蛋母鸡(Gall us gall us驯化种。通常所用母鸡的大小、种属和品系要符合标准动物应在能自由活动的条件下饲养长大。4.2. 1 饵葬环撞动物饲养笼或围栏要足够大，能允许母鸡自由运动以及便于观察动物步态。当饲养环境是人工光照时，要按照12h光照/12h黑暗的朋序循环。要提供合适的饲料，自由

5、饮水。4.2.2 动物准备使用健康、初成年母鸡，要确保没有感染过病毒性疾病、没有接受过药物治疗和没有步态异常，将其1 GB月21770-2008随机分成对照组和染毒组。在试验开始前要至少适应检测实验室环境5d o 4.3 染毒途径和受试物制备4.3. 1 通常采用经口途径染莓，用灌胃、胶囊等方法。4.3.2 如果受试物是液体，可以不稀释或者用合适的赋形揣进行稀释，如玉米油5如果受试物是固体，由于大剂量固体用胶囊形式可能会不被有效吸收，应当尽可能溶解在赋形剂中。如果使用的赋形剂不是水，应当了解它的毒性特征，如果不明确，应在试验前测定其毒性。4.4 动物数量和分组4.4. 1 动物分组包括赋形剂对

6、照组、陆性对照级和染毒组。4.4.2 染毒组和赋形剂对照组要有足够数量的动物，确保有6只用于生化检测(两个时点，每个三只和21d观察期结束时有6只存活用于病理检查。4.4.3 陆形剂对照组除了不给予受试物外，其他处理方式与染毒组相同。4.4.4 阳性对照可以是同步对照，也可以是最近的历史对照。用已知的迟发性神经毒物染毒的阳性对照组至少要包括6只动物(3只用于生化和3只用于病理)，广泛使用的迟发性神经毒物染毒有TOCPo应当定期更新阳性对照的历史数据。而且当检测实验室对于试验中的一些关键要素(例如品系、喂莽、销养条件发生改变时，就必须建立新的阳性对照数据。4.5 预试验预试验是用来确定正式试验时

7、使用的母鸡数和剂量水平，它可通过使用适当数量的动物和剂量水平进行。由于急性试验的结果将被用于确定是否需要进行28d试验，齿此预试验的目标是确定正式试验的最大使用剂量。为了确定正式试验捕聋，在预试验中设计一些动物死亡的剂量是必须的。但是为防止急性胆碱能效应导致的动物死亡，可以使用已知的不干扰迟发性神经毒性反应的保护性药物，如阿托品。母鸡的历史数据或其他毒理学信息也可以帮助剂量选择。4.6 眼景试验使用本试验方法规定的程序进行试验，试验中受试物染毒剂量不低于2000 mgJ(kg d)，没有观察到毒性效应，或根据结构相关化合物分析所得的数据也表明不会产生毒性，那么就没有必要进行更高剂量的试验。当人

8、体暴露水平表明需要进行更高剂量试验时，不能采用限量试验。4. 7 正式试验根据预试验结果和2000 mgJ (kg d)的上眼剂量，在正式试验中设计的受试物荆量水平应当尽可能高。动物的死亡后所存活数应满足用于生化(6只和第21天病理(6只检测的需要。应当使用已知不干扰迟发性神经度反应的阿托品或其他保护性药物，来防止急性胆碱能效应导致的死亡。4.8 观察动物染毒后应当立即开始观察。在最初2d内要每天仔细观察数次，此后每天至少班察1次，或直到按设计动物被处死。应当记录所有的中毒症状，包括临床行为异常出现的时间、类理、严重程度和持续时间。共济失调可通过至少自4级水平组成的评分量表来评价，同时要记录动

9、物的麻痹现象。被选择进行病理检查的动物要每周至少2次放出笼子，进行强迫性活动，比如爬楼梯，来帮助观察动物的轻微毒性效应。取出并处死所有濒死动物并进行大体解fftI检查。4.9 体重所有母鸡在染毒前当时称童，以后每周至少称童1次。4. 10 生化4. 10. 1 在染毒后的某几天中从每个染毒组和赋形前对照组(当设同步阳性对照时随机各选6只母鸡、从阳性对照组随机选3只母鸡，处死，取脑和腰部脊髓，测量其NTE活性。此外，制备和测量坐骨神经组织的NTE活性也是有用的。通常，染毒后24h从对照组和每个染毒组取3只母鸡处死，48h再取3只处死，而阳性对照组的3只母鸡则在24h处死。如果观察到的临床中毒症状

10、时间经常通过观察阻碱能症状出现的时间来评估表明毒性物员在体内发挥毒性作用非常缓慢，那么神经组织的两次取GB/T 21770-2008 样时间最好选择在染毒后24h和迟至72h之间更为合适。4. 10.2 如果认为合适，也可以对上述神经组织进行AchE活性分析。但是，AchE在体内可能发生自发复活，从而导致低估受试物抑制AchE的能力。4. 11 病理4. 11. 1 大体解剖要对所有的动物(包括按计如处死和颜死的动物)进行大体解剖，内眼观察搞和脊髓的外观。4. 11. 2 组织病理学主要对动物的神经组织进行镜检，神经组织取材于观察期存活和未用于生化检测的动物。使用灌注技术对组织进行原位固定。组

11、织如片必须包括小脑中部纵向水平、延髓、脊髓和外周神经。脊髓切片钮括颈部上段、中胸段和腰髓部;外周神经切片部位包括坐骨神经、腔神经及其支配排蹄凯的分支边端区。切片要用合适的髓勒和轴突特异性染色方法进行染色。5 试验数据和报告5. 1 数据必须提供应包括个体数据，所有数据应以表格的形式表示，列出试验开始时各组的动物数，出现损伤、行为异常或生化改变的动物数，以及损伤或毒性效应的类理和严重程度，以及相应的百分率。5.2 结果评价5.2. 1 试验结果要根据染毒组和对照组出现的临床行为、生化和组织病理学变化以及观察到其他效应之间的发生率、严重程度和相互关系进行评价。5.2.2 计数资料要用适合的和一般都

12、能被接受的统计方法进行评价，在试验设计时就应当菇择统计方法。5.3 试验报告试验报告必须包括下列信息:5.3. 1 受试物a) 物理性状包括异构体、纯度和理化性质); b) 名称和识别码。5.3.2 赋形剂如果使用的赋形剂不是水，要说明使用理由。5.3.3 实验动物a) 动物的品系zb) 动物数量和年龄3c) 动物来源、以及饲养条件等zd) 试验开始每只动物体重。5.3.4 试验条件a) 详细叙述受试物制备、稳定性和均匀皮的资料zb) 详述受试物的染毒情况;c) 饲料和饮用水的质量;d) 荆量选择的理由ze) 详细说明受试物染毒的情况，包括赋形剂、给药体积和物理状态的资料zf) 所周保护性药物

13、的种类和给药处理的详细描述。5.3.5 结果a) 体重资料zb) 各剂量水平的毒性反应，包括死亡率;OONlohhFNH8 GB/T 21770-2008 c) 临床异常的性质、严重程度和持续时间是否可逆); d) 详细描述生化检测方法和结果;e) 大体解剖检查结果;f) 详细描述所有组织病理学结果;g) 结果的统计处理。5.3.6 结果讨论5.3.7 结论5.3.8 结果解释如果试验结果(包括生化、组织病理学和临床异常表现是阴性，那么在通常情况下不再要求进行进一步的迟发性神经毒性试验。对于可疑或不能得出结论性结果的则需要进行进一步评估。究m必叫权LI侵且写仍有m专刊川权-z版的rG8/T 21770-2008