SC T 1087.1-2006 渔药毒性试验方法.第1部分 外用渔药急性毒性试验.pdf

1、ICS 65.150 B 50 中华人民共和国水产行业标准SC/T 1087.1-2006 渔药毒性试验方法第1部分:外用渔药急性毒性试验Method of toxicity test of fishery drugs Part 1: cute toxicity test of external fishery drugs 2006-12-06发布2007 -02-01实施中华人民共和国农业部发布刚自SC/T 1087 渔药毒性试验方法分为二个部分:第1部分:外用渔药急性毒性试验;第2部分:外用温药慢性毒性试验。本部分为SC/T1087的第1部分。本部分的附录A、B为规范性附录，附录C、D为资

2、料性附录。本部分由中华人民共和国农业部提出。本部分由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。本部分起草单位:上海水产大学、农业部植业动植物病原库。本部分主要起草人:杨先乐、杨勇。SC/T 1087. 1-2006 I 渔药毒性试验方法第1部分:外用渔药急性毒性试验1 范围本部分规定了外用也药对试验水生动物急性毒性试验的方法。本部分适用于外用植药急性毒性试验。2 规范性引用文件SC/T 1087. 1-2006 下列文件中的条款通过本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究

3、是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T 13267一1991水质物质对淡水鱼(斑马鱼)急性毒性测定方法3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1 渔药fishery drugs 本标准所指的海药是指用以预防、控制和治疗水产动植物的病、虫、害，促进养殖品种健康生长，增强机体抗病能力以及改善养殖水体质量的一切物质。3.2 急性毒性试验acute toxicity test 高浓度或较高浓度的被测试温药，引起试验水生动物群体在短时间内产生一定有害作用的试验。3.3 静水式试验static t臼t试验期间不需更换试验液，限于研究那些化学性质比较稳定

4、的渔药。3.4 换水式试验semi-static test 每24h或更短的时间更新一次试验液。3.5 半数致死浓度median lethal concentration 在确定的试验条件和规定的时间内(如24hA8 h或96h)，试验水生动物在待测试渔药的作用下，导致其半数死亡的该渔药的被度。这个浓度常以某个时间(如24h、48h或96h)的LCso(半数致死浓度)表示。4 试验4.1 试验水生动物选用剑尾鱼(Xi抖。orushelleri)为试验水生动物，并不排除使用其他试验水生动物如斑马鱼(Brachydanio rerio)或其他海水养殖的水生动物等，但试验条件需做相应的改变(如盐度、

5、pH等)。试SC/T 1087.1-2006 验水生动物应选自同一驯养池中规格大小一致的健康个体。试验前试验对象要在与试验时相同的环境条件下至少驯养2周，期间死亡率不得超过10%，否则该批试验动物不得用作试验。驯养期间不得用任何药物。试验前24h停止投饲，每天清除粪便及食物残撞。剑尾鱼和斑马鱼驯养与繁殖的环境参数参见附录C、D。4.2 标准稀释水、渔药储备液和试验溶班4.2.1 标准稀释水4. 1.2.1 标准稀辑水的制备用蒸铺水分别制备92mmolIL浓度的氯化钙、27mmolIL浓度的硫酸镜、35mmollL被度的碳酸氢铀和3阳nollL浓度的氧化饵等四种榕液(附录B)，然后取以上4种溶液

6、各25mLtl昆合并稀释至1L，充分曝气至榕解氧浓度达到空气饱和值，即为标准稀释水。它用于配制渔药储备液和试验梅液。4.1.2.2 标准稀释水水质基本要求新配置的标准稀释水pH应为7.8士0.2，硬度为250mglL左右(以ca3计)。在酸碱度达不到所规定要求时，可用氢氧化铀榕被或盐酸调节pHo4.2.2 渔药储备液将己知量的渔药(以有效成分计)溶于一定体积的标准稀释水中，即为温药储备液。该储备液作为配制试验榕液的母液供当天使用。对于化学性质较稳定的渔药，配制的储备液在4C保存可供2d使用。对榕解度低的温药，在需解时可使用超声波装置促使榕解，或加人对试验没有影响的有机榕剂，但有机溶剂在试验溶液

7、中的浓度不应超过0.1mglL。4.2.3 试验溶班将适量的植药储备液加人标准稀释水中，使其达到所需要的浓度，即为试验溶液。4.3 仪器设备4.3. 1 试验容器试验容器应为玻璃或其他化学惰性物质制成的无明显吸附试验渔药的容器，并保证有足够大的容积，试验介质与空气间有足够大的界面(每10L水要有大约800cm2的界面积)，并备有牢固的密封盖。初次使用的试验容器应仔细清洗。试验后，倒空容器，清洗掉残留植药，干燥后备用。4.3.2 控温设备控温装置应满足将试验悔液和试验容器中的水温调节至试验设定温度。4.3.3 抄网抄网用尼龙纱绢或纱布制成，做到专网专用。4.4 环境条件试验被中榕解氧液度不低于5

8、mglLj每天光照保持12h-16 hj避免强光直射;试验期间水祖恒定于设定的植度;试验过程中尽量避免外界干扰o试验榕掖的配制与储存、试验水生动物的管理及全部试验都应在空气污染物未达到有害撒度的环境下进行。选择重铅酸伺(K2Cr2)作为参考毒物，24h重恪酸悍的LCso值应处于200mglL-400 mglLo可根据需要进行多次参考毒物的毒性试验，以得到参考毒物试验数据重现性的资料，每当蓄养种群发生变化都应按本方法规定的条件重复进行试验。4.5 试验步骤4.5.1 预备试验预备试验用于确定试验放度的范围。预备试验放度梯度一般以10为公比作间隔。在6个容器中加入适量标准稀释水，其中5个容器中随机

9、加入适量的渔药储备液，配制一组适宜的地度系列，第6个容器用作对照，每个容器放试验水生动物5尾(只)。如果数据不充分，无法确定正式2 SC/T 1087. 1-2006 试验所需要的浓度范围，则另选一组、战度范围重新进行试验。在试验所要求的温度下进行试验，试验时间为24h-26 h。每天定时测定2次容器中的溶解氧浓度，发现试验水生动物死亡及时处理。4.5.2 正式试验4.5.2.1 确定试验方式根据被测试温药的性质确定采用静水式或换水式试验。4.5.2.2 试验浓度和试验分组试验眼皮确定在试验水生动物全部死亡的最低浓度与全部不死亡的最高浓度间，按预备试验确定的故度范围以几何级数做间距，选择6个浓

10、度进行正式试验，并设平行，其中包括一个不含试验海药的试验溶液的对照(如果用有机榕剂溶解试验渔药，则需要加设一个含有有机榕剂的对照，其有机溶剂的浓度与试验榕液中有机溶剂的最高浓度相同)。所选择的试验溶液的浓度应包括能够测得试验水生动物20%到80%死亡率的被度。4.5.2.3 试验操作从驯养试验水生动物群体中随机、迅速取10尾(只)或10尾(只)以上的试验水生动物放人各试验容器中。在操作过程中因转移处理错误的试验水生动物弃去不用。全部操作过程要在30min内结束。换水式试验每8h-24 h更换一次试验液。试验水生动物转移时应从最低放度到高放度，避免造成试验渔药的明显转移。4.5.2.4 试验观蟹

11、和记录观察井记录试验水生动物的平衡、游动、呼吸、体色变化等中毒症状和死亡情况，特别是试验开始后3h-6h内。以后每天至少记录2次并及时清出死亡动物。每天定时测定2次试验液的悔解氧、pH和温度，试验开始和结束时还应测定各组试验液中渔药的浓度，记录表格见附录Ao5 结果的表述5.1 死亡率的修正试验要求对照组的死亡率不得超过10%(最好低于5%)，否则试验要重新进行。当对照组中试验水生动物出现偶尔死亡时，各浓度组的死亡率按(1)式加以修正。P.- C P=-:一一x100 . . . . . . . (1) 1- C 式中:P一校正后的死亡百分数，%;Pt一一试验组死亡百分数，% ; C一一对照组

12、死亡百分数，%。5.2 LCso计算按GB/T13267-1991中第8章规定的三种方法之一计算24h、48人72h和96h的LC50值。结果常以48hLC50或96hLCso表示。5.3 试验报告试验报告中要求包括下列资料及数据:a) 试验方式、试验水温及试验水质基本情况。b) 试验水生动物的详细情况。c) 配制稀择水、储备液和试验液的方法。d) 试验水生动物的中毒症状，试验和对照组中试验水生动物的死亡率及其反应异常率。的LCso计算方法以及24h、48h、72h和96h的LC50值(在可能情况下列出其95%置信限)。3 SC/T 1087. 1-2006 f) 参比毒物的LCso值。g)

13、偏离本部分所规定的程序，解释其原因。4 SC/T 1087. 1-2006 附录A(规范性附录)外用渔药急性毒性试验观察记录表样品编号试验起止日期渔药名称|分子式其他资料储备液配制方法储备液浓度，mglL试验容器中最大榕剂浓度，mglL试验方式试验水生动物参考毒物(K2Cr2)的LCso各次测定结果X士S.D.变异系数时间项目对R浓度1浓度2浓度3浓度4浓度5水温pH 溶解氧24 h 其他水质指标中毒症状死亡数水温pH 海解氧48 h 其他水质指标中毒症状死亡数水温pH 溶解氧96 h 其他水质指标中毒症状死亡数操作者:一一一一记录人:一一一备注:5 SC/T 1087.1-2006 B.1

14、氯化钙溶液附录B(规范性附录)标准稀释水配制将11.76 g氯化钙(CaChH20)溶于水中并稀释至1L，配制成92mmolIL浓度的溶液。B.2 碗酸镜溶液将4.93g硫酸镜(MgS047H20)梅于水中并稀释至1L，配制成27ntrnollL谁度的溶被oB.3 碳酸氢铀溶液将2.59g碳酸氧铀(N副13)溶于7j(中并稀释至1L，配制成35mmollL浓度的榕液。B.4 氧化押溶液将0.23g氯化饵(KC1)梅于水中并稀释至1L，配制成3mmollL浓度的榕液。6 SC/T 1087. 1-2006 附录C(资料性附录)剑尾鱼(Xiphophorushelleri Heckel)饲养与繁殖

15、的环境参数C.1 剑尾鱼的生物学特性剑尾鱼是一种热带泼水小型鱼类。其体理小，头较尖，吻尖突，口中等大，下顿微突出。雌雄鱼体形相差较大，雌性腹部圆大，雄性细长侧扁，尾鳝最下方5-6鳝条合井，虽剑状。体色有深红、钱红、桶黄、自腹、全白、绿色和黑色斑纹等多种。C.2 环境参数剑尾鱼在水的各层游动，适应力强，其主要水质因子的适宜范围为水温20C- 30C ，溶解氧5.0mg儿，pH7.0-8.5o剑尾鱼食性属杂食性，天然条件下，仔鱼以小型浑游生物为食，成鱼则以水蜓蚓(红虫)为食，也可适应人工配合饲料。应用人工配合饲料替代水蛇蚓喂养时，幼鱼与成鱼的蛋白质需求量有差异，分别为43%和36%-41%。C.3

16、 繁殖剑尾鱼是卵胎生鱼类，繁殖期水温宜在22C-29C之间。其娃振期为30d左右，临产前1d-2d将雌鱼放置于单独容器内。待卵排尽以后将成鱼取走，留下鱼卵进行孵化。雌鱼一般在150d左右即可生产，条件适宜时，每隔30d-40 d可再产一胎，每次产仔20-200尾。剑尾鱼具有性逆转现象，有些产过小鱼的雌鱼身体逐渐变细，圆形的臀鳝逐渐变成棒状，尾鳝下端开始长出剑状突起物。7 SC/T 1087.1-2006 附录D(资料性附录)斑马鱼(Brachydaniorerio Hami lton-Buchanan)驯养繁殖的环境参数D.1 斑马鱼的生物学特性斑马鱼是一种热带泼水小型鱼类。其体长很少超过45

17、mm，鱼体呈lM1柱形，上有7条-9条浅蓝色水平条纹。背部呈橄榄绿色，雄性带有金黄色光泽，雌性体呈银白色。D.2 环境参数斑马鱼在水的各层游动，适应力强，其主要水质因子的适宜范围为水温20C- 25C ，溶解氧5.0mg儿，pH6.5-7.0。诱导产卵时水温控制在23C-26C。D.3 繁殖D.3.1 材料和方法产卵箱容积应在2L以上。由于成鱼贪吃鱼卵，故需在距产卵箱底部2cm处设一挡板，板上开孔(孔眼直径3mm5 mm)，将成鱼限制在挡板上。D.3.2 产卵时的处理方法产卵前12h应停止投饲。第一天傍晚将分开饲养性成熟的雌雄鱼放入产卵箱中，次日产卵，约3h产卵完毕。雌鱼每次产卵约300粒，个

18、体大者可达千粒，产卵后将成鱼取走，孵化鱼卵。D.3.3 鱼苗的发育鱼卵4d-5d孵化完成，新孵化的鱼苗在24h-48 h内不动。当鱼苗能够自由游动时，用原生动物或特制的小颗粒鱼食喂饲;3周后，改用丰年虫元节幼体喂饲;一个月后可转移到容积较大的水族箱内，投眼特制的饲料;3个月后，鱼体性成熟，体长达3.5cm左右。成熟后的雌雄鱼分开饲养。8 CON-F.hOF Hum 中华人民共和国水产行业标准温药毒性试验方法第1部分:外用遛药急性毒性试验SClT 1087.1-2006 * 中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)9令，哥(邮政编码:100026 网址:) 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销印张1字数10千字2007年1月北京第1次印刷印数:1-500册定价:12.00元争夺争夺开本880mmx 1230mm 1116 2007年1月第1版书号:16109 1041 争夺版权专有侵权必究举报电话:(010) 65005894 SC/T 1