GB 15193.5-1994 骨髓微核试验.pdf

1、中华人黑共和噩噩家标准GB 15193. 5 94 骨髓微核试验Micronuleus test of加配盟盯row由II1 2主盖章内容与适用范翻本标准规定了微核试验的基本技术要求。本标准适用于检测l环境有害物质的致突变作用。2 原想做楼是在细胞的有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的染色单体:ill(;染色体的无辛苦丝粒断片或环。它在末期以后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内而形成，由于比核小得多故称微核。这种情况的出现往往是由于受到染色体断裂剂作用的结束。另外，也可能在受到纺缝体毒物的作用时，主核没有能够形成代之以一组小核。此对小核往往比

2、一般典攘的微核稍大。3 试剂和材料余部试Jlij主注明外，均为分析纯，试验泪水为蒸缩水3. 1 4、牛血清小牛血清滤菌后放入56恒温水浴保温Ih进行灾活。通常储存于4冰箱冰盆里。亦可用大、小鼠血清代替。3.2 心陀msa染液称浓Giemsa染料3.8 g，加入375四L甲醇分析纯）哥哥嚣，待完全溶解后，再加入125皿L1tl窍。辈辈37tfi混箱保温48h振摇数次。过滤两周后用。3. 3 Giemsa应用液取I份Giemsa染液与6份磷酸盐缓冲液混合而成。！脑用时配制。3. 4 1/15白ol/L磷酸盐缓冲液（pH6，们磷酸二氧锣（KH,PO,)磷酸氢二销（Na,HPO, 12H20) 加蒸馆

3、水至3. 5 ffl董事（分析纯。3.6 解器械，生物豆豆微镜，载玻片等。4 实验动物4. 50 g 11. 81 g 1 ooo mL 小臼鼠是微核试验的常规动物，也可选用大归自乱。通常用712翔龄，体重2530g的小鼠或体重15号200E的大鼠。辈革经用商手中您别的动物至少各5只e中华人民共和国卫生部199408-10批准1994-08-10；实施60 GB 15193. 5 94 5 ”量分组原则上以动物出现严重中毒疲状和或个别动物出现死亡为最高剂量。一般可取1/21,Doo,il!ii险毒性受试物最大给予缝无死亡时，则以受试物最大给予童或5g/kg体重为最高剂簸，以下设35个剂量组。另

4、设溶剂对照级和阳性对照组。阳性对照物i1J用环磷酸胶40mg/kg体重祭日给予。襟作步骤6. 1 标本制备经口灌胃。根据细胞周期和不问物质的作用特点，可先做预试，定取材时间。常用30h给受试物法aBP两次给受试物！商满24h，第二次给受试物后6h.颈椎戴白处死动物。取掏骨军Jl量辛辛，用止血钳挤出膏穗液与玻片端的小牛血清混匀，常戏涂片e或Jli小牛血清？中淡胶管膏髓腔锁成绍胞悬尊重涂片，涂片自然干燥后放入甲醇中固定510min，当日固定后保存。将固定好的涂片放入Giemsa应用液中，染色10 15 min，立即用pH6.8的磷酸盐缓冲液或蒸憾水冲洗。晾干。好标签，干燥器中保存。6.2 阅片选择

5、缀施完整、分散均匀，着色适当的区域，：（1密镜下观察。以幸亏核续稳形态究好作为判断告1月优劣的标准。本法系观察嗜多染红细胞的微核。用Gier色。典型的微核多为单个的、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质致，呈紫红色或蓝蓝紫色，直径通常为红缀憾的1/201/5.用双盲法商片。每只动物计数1000个嗜多染红细胞，观察含有微核的嗜多染红缩臆数，微核率以千分率表示。观察嗜多染红细胞与成熟红细胞（PCE/RB口，可作为细胞毒害性指标之一。般计数200个嗜多媒红绸跑。7数据处理一般采用卡方检验、1自松分布、或双jj!jt检验等统计方法进行数据处理，并按动物性别分别统计。8结果评价试验短与对照您相比，试验缔柴微核率有明显的剂量反应关系并有统计学意义时，NP可确认为阴性结果。若统计学上有显著性差别，但无剂量反应关系时，则须进行重复试验。结果能重复者可确定为阳性。附加说明z本标准启立交部卫生监督司提出。本标准出卫线曾在食品卫生主主楼检验溃、中00预防医学科学雷军营养与食品卫生研究所、浙江；袋丁fl.生在幸被站负责起草。本标准主要恕直在入徐凤丹、串串驰、赵硕。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。, 61