1、中华人民共和国国家标准电子级水中细菌总数的滤膜培养测试方法代替国家技术监督局 批准 实施范围本标准规定了电子级水中细菌总数活菌的滤膜培养测试方法本标准适用于 级电子级水中细菌总数的测量引用标准下列标准所包含的条文通过在本标准中引用而构成为本标准的条文 本标准出版时所示版本均为有效 所有标准都会被修订使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性电子级水电子级水测试方法通则定义无菌操作在无细菌存在的条件下进行的操作 在测定水中的细菌时必须事先将使用的器皿仪器设备及实验室进行灭菌 以获得正确的结果菌落水中的细菌是极微小的无法用肉眼观察将单个菌体或孢子在固体培养基上培养一定时间后使其生长繁殖形成
2、肉眼可见的微生物集团即为菌落细菌培养法将一定量水样经超滤膜过滤再用适当的培养基将留在超滤膜表面的细菌培养以形成菌落 然后计数以测量水中活细菌的数量原理水中的细菌经过 微孔膜过滤截留于滤膜上将滤膜贴在衬底 吸透了 培养基的滤纸上在适宜的条件下进行培养细菌繁殖成肉眼可见的菌落 细菌体内存在的脱氢酶 与 三苯基氯化四氮唑 简称 在胞内反应使菌体呈红色反差增大借此观测及计数试剂空白用水 级电子级水于高压无菌器内在 压力下无菌培养基 空白用水中 胰蛋白胨 牛肉膏 葡萄糖加热溶解冷至室温以 氢氧化钠调节 至 加 琼脂加热溶解并趁热过滤以四层纱布 一层脱脂棉为介质 装于 三角瓶中 灭菌后备用氢氧化钠溶液 氢
3、氧化钠 溶于 空白水中 储于聚乙烯瓶中溶液灭菌备用仪器和设备无菌间 或无菌工作台 备有功率大于或等于 的紫外灯置于工作台 处电热恒温培养箱高压蒸汽灭菌器恒温烘箱体视显微镜微孔有机滤膜 孔径 格栅膜过滤器 杯式不锈钢过滤器各种玻璃器皿广口瓶三角瓶 培养皿量筒等酒精灯 平头镊子纱布棉花定性滤纸等抽滤系统如下图所示滤杯 滤膜 载膜网 抽滤瓶 缓冲瓶 真空泵抽滤系统示意图分析步骤检测前的准备开启无菌室及净化工作台 后使之进入稳定工作状态器皿的灭菌将培养皿取样瓶等玻璃器皿 先用电子级水洗净烘干用纸包严后置于铝制专用容器中放入恒温箱 内 干热灭菌有机滤膜的灭菌于电子级水中煮沸 弃去沸水后 再加新的水煮沸反
4、复进行三次即可 或在紫外灯下照 灭菌水样测定取 溶液于 培养基中 在培养皿中混匀约 厚 冷却备用 取摇匀后的适量水样 级水取 级水取 经过过滤装置过滤 用 空白用水冲洗抽干 用镊子将滤膜置于备好的培养基上膜面朝上盖好皿盖 待凝固后 将平皿翻转置于培养箱中 于 下恒温培养 后取出在体视显微镜下观察菌落并计数 按同样步骤进行空白实验 每个样品平行进行三次测定 取其平均值分析结果的计算水中的细菌总数按下式计算式中 每毫升水样中细菌总数 个滤膜上的菌落数个空白实验的菌落数 个被测水样的体积试验报告按 第 章要求注意事项细菌分析应特别注意外来微生物的污染将载菌膜置于培养基上时中间不得有间隙或气泡在制备培养基的加热过程中应补充所损失的水分
