GB T 13089-1991 饲料中恶唑烷硫酮的测定方法.pdf

1、GB 1308991 本标准参照采用国际标准ISO 55041983含油种子及其去油后饼粕中异硫氰酸酯和唑烷硫酮的测定。 1 主题内容与适用范围 本标准规定了饲料中唑烷硫酮的测定方法。 本标准适用于菜子饼粕和配合饲料中唑烷硫酮的测定。 2 原理 饲料中的硫葡萄糖苷被硫葡萄糖苷酶（芥子酶EC3.2.3.1）水解，再用乙醚萃取生成的唑烷硫酮，用紫外分光光度计测定。 3 试剂和溶液 除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。 3.1 乙醚：光谱纯或分析纯。 3.2 去泡剂：正辛醇（C6H17OH）。3.3 pH7.0缓冲液：取35.3mL0.1molL柠檬酸（C6H8O7H2

2、O，HG 31108）溶液（21.01gL）于一个200mL容量瓶中，再用0.2molL磷酸氢二钠（GB 1263）溶液调节pH至7.0。 3.4 酶源：用白芥（ Sinapis alba L.）种子（72h内发芽率必须大于85，保存期不得超过两年）制备。将白芥籽磨细，使80通过0.28mm孔径筛子，用正己烷或石油醚（沸程4060）提取其中脂肪，使残油不大于2，操作温度保持30以下，放通风橱于室温下使溶剂挥发。此酶源置具塞玻璃瓶中4下保存，可用6周。 4 仪器、设备 4.1 分析天平：感量0.000 1g。 4.2 样品筛：孔径0.28mm。 4.3 样品磨。 4.4 玻璃干燥器。 4.5 恒

3、温干燥箱：1032。 4.6 三角烧瓶：25、100、250mL。 4.7 容量瓶：25、100mL。 4.8 烧杯：50mL。 4.9 分液漏斗：50mL。 页码，1/3GB 13089912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130890A.htm4.10 移液管：2mL。 4.11 振荡器：振荡频率100次min（往复）。 4.12 分光光度计：有10mm石英比色池，可在200300nm处测量吸光度。 5 试样制备 采集具有代表性的样品至少500g，四分法缩分至50g，再磨细，使其80能通过0.28mm筛。 6 测定步骤 6.1 称取试样（菜籽饼粕

4、1.1g，配合饲料5.5g）于事先干燥称重（精确到0.001g）的烧杯中，放入恒温干燥箱（4.5），在1032下烘烤至少8h，取出置干燥器（4.4）中冷至室温，再称重，精确到0.001g。 6.2 试样的酶解 将干燥称重的试样全倒入一250mL三角烧瓶（4.6）中，加入70mL沸缓冲液（3. 3），并用少许冲洗烧杯，使冷却至30，然后加入0.5g酶源（3.4）和几滴去泡剂（3.2），于室温下振荡2h。立即将内容物定量转移至100mL容量瓶（4.7）中，用水洗涤三角烧瓶（4.6），并稀释至刻度，过滤至100mL三角烧瓶（4.6）中，滤液备用。 6.3 试样测定 取上述滤液（菜籽饼粕1.0mL，配

5、合饲料2.0mL），至50mL分液漏斗（4.9）中，每次用10mL乙醚（3.1）提取两次，每次小心从上面取出上层乙醚。合并乙醚层于25mL容量瓶（4.7）中，用乙醚（3.1）定容至刻度。从200nm至280nm测定其吸光度值，用量大吸光度值减去280nm处的吸光度值得试样测定吸光度值 AE。 6.4 试样空白测定（菜籽饼粕此项免去， AB为零）按6.1、6.2、6.3同样操作，只加试样不加酶源（3.4），测得值为试样空白吸光度值AB。 6.5 酶源空白测定 按6.1、6.2、6.3同样操作，不加试样只加酶源（3.4），测得值为酶源空白吸光度值AC。 7 测定结果 7.1 计算公式 式中： X试

6、样中唑烷硫酮的含量，以每克绝干样中唑烷硫酮的毫克数表示；页码，2/3GB 13089912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130890A.htm 若试样测定液经过稀释，计算时应予考虑。 7.2 结果表示 每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 结果表示到0.01mgg。 7.3 重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值： 在唑烷硫酮含量小于或等于0.20mgg时，不得超过平均值的20； 在唑烷硫酮含量大于0.20mgg而小于0.50mgg时，不得超过平均值的15； 在唑烷硫酮含量等于或大于0.50mg/g 时，不得超过平均值的10。 AE试样测定吸光度值；AB试样空白吸光度值；AC酶源空白吸光度值；CP转换因素，吸光度为1时，每升溶液中唑烷硫酮的毫克数，其值为8.2；m 试样绝干质量，g。页码，3/3GB 13089912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130890A.htm