1、GB/T 14926.2194 1 主题内容与适用范围 本标准规定了兔出血症病毒（以下简称兔瘟）的检验方法、试剂等，适用于检测兔瘟的感染情况。 2 引用标准 GB/T 14926.18 实验动物 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒检验方法 GB/T 14926.24 实验动物 小鼠肺炎病毒检验方法 3 材料和试剂 3.1 兔瘟毒种：取自典型发病的兔肝，在我国流行的毒株属于一个血清型。 3.2 0.85生理盐水。 3.3 人“O”型红血球。 3.4 组织捣碎匀浆器，转速10000r/min。 3.5 电子显微镜。 3.6 酶标仪。 3.7 离心机。 4 检验步骤 4.1 制备兔瘟病毒抗血清：采集自然感染
2、耐过急性期兔血清。 4.2 制备兔瘟病毒阴性血清：采集无兔瘟病毒感染家兔血清作为阴性血清。 4.3 制备兔瘟病毒抗原： 4.3.1 制备粗制抗原：取病兔肝脾用组织捣碎机制成10悬液，3000r/min离心15min，取上清液测血凝滴度，选择15 12020 480为宜。 4.3.2 制备提纯抗原：将上清液用4060蔗糖经40000离心2h，收集5560蔗糖层乳白色带，经去蔗糖，沉淀物用磷酸缓冲液（PBS）悬浮，经琼脂糖2B （Sepharose 2B）柱纯化，收集第一峰。 4.4 制备兔瘟病毒抗血清IgG标记酶结合物。 5 检验方法和结果判定 5.1 测兔瘟病毒抗原：在急性流行兔瘟时，有临床症
3、状者，应查抗原为宜。 5.1.1 现场快速诊断：检样为发病兔，用小块滤纸插入兔肝脏片刻，取出纸片放入预先已经滴有1人“O”型红血球的玻片上，若有兔瘟，肉眼可直接检查到血凝现象。 页码，1/2GB/T 14926.21942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92621R.htm5.1.2 测病兔肝HA滴度：取发病兔肝制成20混悬液，3000r/min离心15min，取上清液，用人“O”型血红细胞作血凝素滴定，HA滴度应在5109以上。5.1.3 直接ELISA法测兔瘟病毒抗原：见 GB/T 14926.18中4.1.6。 5.1.4 免疫电镜法：将肝脏
4、组织上清液用CHCl3提取，取水层液用已知兔瘟阳性血清作免疫电镜，如见有成堆的典型病毒颗粒可判为阳性结果。 5.2 测兔瘟病毒抗体：凡经兔瘟疫苗免疫后检测其抗体目的有两个，其一考查疫苗的免疫效果；其二根据抗体的水平，可提醒管理人员决定是否需要再免疫。未经免疫的兔血清标本可用于检查兔的隐性感染。 5.2.1 HI法：检测本病毒抗体取816血凝单位为宜。HI抗体滴度15判为阴性；抗体滴度15为阳性。方法见GB/T 14926.24中5.3。 5.2.2 间接ELISA测兔瘟病毒抗体：见GB/T 14926.18中4.1。 凡是急性发病的动物查抗原即可；无临床症状动物以查抗体为宜。不论查抗原或抗体，凡检测结果出现阳性时，选用同一种方法或另一种方法重试。如为阳性则判为阳性。 6 结果报告 根据判定结果，作出报告。 页码，2/2GB/T 14926.21942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92621R.htm
