1、GB/T 14926.594 1 主题内容与适用范围 本标准规定了实验动物多杀巴氏杆菌的检验方法。适用于大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠和兔的检验。 2 引用标准 GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 3 材料和试剂 3.1 血琼脂 GB 4789.28中3.6。 3.2 营养琼脂 GB 4789.28中3.7。 3.3 三糖铁琼脂 GB 4789.28中3.24。 3.4 糖发酵管 GB 4789.28中2.2。 3.5 半固体琼脂 GB 4789.28中3.28。 3.6 麦康凯琼脂 GB 4789.28中3.22。 3.7 尿素培养基 3.7.1 成分 3.7.2 制法
2、除指示剂外，用水溶解以上成分，煮沸。用1N NaOH调pH，然后加入指示剂，分装于灭菌试管内，110高压灭菌10min。 3.7.3 试验方法：挑取琼脂培养物接种，在361培养24h，观察结果。尿素酶阳者产碱而变为深红色，阴性为黄色。 3.8 蛋白胨水 GB 4789.28中2.13。 3.9 硝酸盐培养基GB 4789.28中2.17。 3.10 氧化酶试验 GB 4789.28中2.18。 蛋白胨（日本胨） 1g氯化钠 5g葡萄糖 1g磷酸二氢钾 2g0.4酚红溶液 3mL尿素 20g蒸馏水 1000mLpH 6.7页码，1/3GB/T 14926.5942006-3-30file:/C
3、InetpubwwwrootdatagbbBE92605K.htm4 检验程序 5 检验步骤 5.1 采样：鼻咽部或气管分泌物，病灶分泌物。 5.2 分离培养：将接种的血平皿置361温箱培养2448h， 挑取灰白色、不溶血、光滑露滴样菌落，转种血平皿或纯培养基，置361温箱培养1824h。用于 生化鉴定。多杀巴氏杆菌在麦康凯或SS琼脂上均不生长。 5.3 形态与染色：将可疑菌落涂片染色，显微镜观察，多杀巴氏杆菌为革兰氏阴性，两端钝圆的短杆菌。新分离的菌株有荚膜，经人工培养后很快消失。急性患病死 亡动物，心血或脏器组织触片，瑞氏染色后镜检可见本菌两极着色，有诊断意义，并可从脏器中分离到纯菌株。
4、 5.4 将上述可疑菌株接种三糖铁琼脂，置361培养1824h。底部及斜面均产酸，不产气。若产生硫化氢则进一步做生化试验。 5.5 生化试验：将上述可疑菌纯培养物接种生化培养基，361培养24h观察结果。多杀巴氏杆菌的生化特征以及巴氏杆菌属各菌种的生化特性鉴别如下表。 巴氏杆菌属的菌种生化鉴别表 多杀巴 氏杆菌 巴斯德 （新菌种）嗜肺巴 氏杆菌 尿素巴氏杆菌溶血巴 氏杆菌 产气巴氏杆菌溶血（乙型） 葡萄糖（产气） 产酸：葡萄糖 木糖 / / /（） / / / 页码，2/3GB/T 14926.5942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92605K.htm ： 阳性，： 阴性，/：大部分菌株阳性，/： 大部分菌株阴性 ，（）：迟缓反应。 6 结果报告 根据以上生物学特性，生化试验的结果，符合本菌要求作出阳性报告，不符合要求作出阴性报告。 甘露醇 乳糖 蔗糖 麦芽糖 触酶 氧化酶 在麦康凯琼脂上生长 西蒙氏枸橼酸盐 尿素酶 硝酸盐还原 吲哚 明胶水解 三糖铁： 高层产酸 斜面产酸 鸟氨酸脱羧酶 赖按酸脱羧酶 / /（） / / / / / / /（） / / / / / 页码，3/3GB/T 14926.5942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92605K.htm
