1、GB/T 18651-2002 前午一-H过去认为无浆体(anaplasma)是原虫，现确定是一种立克次氏体，译名还有微粒抱子虫、无形体等，根据生物学特征，无浆体最为确切，因此本标准中用此名。牛无浆体病是一种牛血液传播病。牛一旦感染，即可成为终生带虫者，使养牛业造成很大经济损失。世界动物卫生组织WorldOrganization for Animal Health (英),Office Intentional des Epizootic(法)，OIE将本病列为B类传染病，本病也是我国出入境动物检疫对象之一。IE推荐诊断牛元浆体病的方法中，卡片凝集检测具有微量、快速、灵敏度高和特异性好等优点，故
2、得到广泛应用。我国曾报道过用补体结合试验诊断牛无浆体病，但因部分血清有抗补体作用，而常被误判，目前，国内尚无卡片凝集检测标准。本标准以OIE推荐技术为依据，参考了澳大利亚和美国检测方法，抗原保存期为一年到三年，试验温度范围为25C28C。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位z农业部动物检疫所。本标准主要起草人z吴鉴三、张肖正。216 中华人民共和国国家标准牛无浆体病快速凝集检测方法GB/T 18651-2002 1 范围Methods of fast agglutination test for bovine anaplasmosis 本标
3、准规定了牛元浆体病快速凝集检测方法。本标准适用于牛元浆体病的诊断。其他动物无浆体病的诊断亦可参照本方法。2 试剂和器械2. 1 试齐IJa)元浆体凝集抗原，4C保存;bl阴性协同血清(牛血清因子l，-70C-80C保存zd阳性对照血清，-20C保存gd)阴性对照血清，-20C保存。以上试剂由$J标单位提供。2.2 器械2. 2. 1 微量移液器:5L、10L或5L25LC连续可调)。2.2.2 微量移液器头若干个。2.2.3 试验用板z取85mmX12.5 mm洁净透明塑料平板，用油漆或泊性记号笔划成4排X6个区位。3 操作步骤实验应在25C28C环境下进行。3. 1 被检血清按常规采集和分离
4、，从采集到第一次检m目前，要在室温放置38h48 h，然后冷藏或冻存备用，长期低温保存会使阳性率下降。3. 2 取出凝集抗原、阴性协同血清、阳性和阴性对照血清以及被检血清，在25C28C下放置15 min20 min , 3. 3 同时在平板第一排左起1、2区位J上阳性十和阴性(符号，其余各区位依次编上被检血清号。3. 4 用微量移液器在编号区位内按号分别加阳性、阴性对照血清和待检血清10L，3. 5 在各区位加凝集抗原5L，靠近血清，互不接触。3. 6 在各区位抗原旁加阴性协同血清10L，互不接触。3. 7 用牙签将各区位的三种反应物摊成液面(约成人小指甲盖面积1，混合均匀。做一份血清换用一根牙签。3.8 用手轻轻晃动该平板，在4min_ 8 rnin内，当阳性对照血清开始出现凝集反应时，对着黑色背景判读结果。中华人民共和国国家质量监督检验检瘟总局2002-02-19批准2002 - 05 -01实施217 GB/T 18651-2002 4 日l定标准4. 1 阳性对照血清出现颗粒清晰的凝集现象。4.2 阴性对照血清没有可辨认的任何凝集颗粒。4.3 被检血清凡出现可辨认的凝集颗粒的凝集现象，均判为阳性反应。218
