SC T 7201.5-2006 鱼类细菌病检疫技术规程 第5部分：白皮假单胞菌白皮病诊断方法.pdf

1、SB中华人民共和国水产行业标准鱼类细菌病检疫技术规程20061206发布 2007-0201实施中华人民共和国农业部发布目 录第1部分：通用技术第2部分：柱状嗜纤维菌烂鳃病诊断方法第3部分：嗜水气单胞菌及豚鼠气单胞菌肠炎病诊断方法第4部分：荧光假单胞藏赤皮病诊断方法第5部分：白皮假单胞菌白皮病诊断方法115253139ICS 6502030B 41中华 人民共和SB国水产行业标准鱼类细菌病检疫技术规程第5部分：白皮假单胞菌白皮病诊断方法Rules for quarantining bacterial diseases of fishPart 5：Diagnostic method for wh

2、ite skin disease20061206发布 20070201实施中华人民共和国农业部发布前 言SCT 7201 52006SCT 7201(鱼类细菌病检疫技术规程分为五个部分：第1部分：通用技术；第2部分：柱状嗜纤维菌烂鳃病诊断方法；第3部分：嗜水气单胞菌及豚鼠气单胞菌肠炎病诊断方法；第4部分：荧光假单胞菌赤皮病诊断方法；第5部分：白皮假单胞菌白皮病诊断方法。本部分为SCT 7201的第5部分。本部分的附录A为规范性附录。本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会归口。本部分起草单位：中国水产科学研究院长江水产研究所、中国水产科学研究院珠江水产研究所。本

3、部分主要起草人：何力、邹为民、徐忠法、姜兰、周瑞琼、罗晓松。41鱼类细菌病检疫技术规范第5部分：白皮假单胞菌白皮病诊断方法1范围本部分规定了鱼类白皮假单胞菌白皮病(white skin disease)的诊断方法。本部分适用于鱼类白皮病的诊断。2规范性引用文件SCT 720152006下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GBT 4789281994食品卫生微生物检验染色体、培养基

4、和试剂GBT 18652-2002致病性嗜水气单胞菌检验方法SCT 70142006水生动物检疫实验技术规范SCT 720112006鱼类细菌病检疫技术规范第1部分：通用技术SCT 720122006鱼类细菌病检疫技术规范第2部分：柱状嗜纤维菌烂鳃病诊断方法3病原体与流行情况31主要病原体自皮假单胞菌(Pseudomonas dermoalba)。32流行情况主要危害鲢、鳙，草鱼和青鱼有时也可发生，特别是对鱼苗及夏花鱼种危害较大。全国各地都有发生。水温25*(2以上为流行季节，当鱼体碰伤或体表被寄生虫损伤时，易发生。4试剂除非另有说明，在检验中仅使用确认为分析纯的试剂、蒸馏水或去离子水。常用试

5、剂与染色液的配制应符合SCT 702112006中附录A的规定。微生物生化鉴定管可代替相应的试剂。41七叶灵。42醋酸铅。43氯化汞。44明胶。45脱脂奶粉。46可溶性淀粉。47柠檬酸铵铁。48几丁质。49酪氨酸。410过氧化氢。4 11葡萄糖。43SCT 7201520064，12溴麝香草酚蓝。4 13乙醚。414碘液。415革兰氏染色液。416 kovaes试剂。417格里斯氏(Griess)试剂。418鞭毛染色剂。5培养基51胰胨琼脂培养基。52 Christensen氏枸橼酸培养基。53硝酸盐液体培养基。54休和利夫森二氏培养基。55明胶培养基(配制见附录A)51-54的培养基配制见S

6、CT 720112006的附录B。6设备和器械按SCT 720112006第4章的规定执行。7采样遵照SCT 7014-2006第4章的规定。8病原菌的分离8 1平板划线分离用接种环取被检物在胰胨琼脂培养基平板上划线。可采用各种不同的常规划线方法，需尽量使其产生单个分散的菌落。在25恒温培养24 h96 h。8 2纯培养按SCT 720112006中73的规定执行。9诊断91临床诊断911活动情况病鱼行动迟缓，病情严重时，头部向下，尾部向上，与水面垂直。912外部检查发病初期，尾柄处发白，以后迅速扩展蔓延，背鳍基部后面的体表全部发白。9 2实验室诊断921样品处理取少量病灶处黏液放在载玻片上，

7、加上2滴-3滴无菌水，盖上盖玻片，在显微镜下观察；取病灶处黏液在胰胨琼脂培养基平板上划线分离、培养。922镜检在载玻片上滴一滴蒸馏水，取少许菌苔于水滴中，尽量分散，自然干燥。滴加鞭毛染色剂甲液染色44SCT 72015_200620 min，用蒸馏水冲洗，晾干后，加二液染30 s-60 s，加热，使其稍冒蒸汽而染液不干，冷却后用蒸馏水冲洗。在显微镜下观察。923生化检验923 1假单胞菌病原性检验92 311菌落观察在胰胨琼脂平扳上25培养2 d左右，观察培养基颜色变化。92312鞭毛观察鞭毛染色按GB 4789281994中27的规定执行。镜检。92313糖发酵实验将分离菌在休和利夫森二氏培

8、养基管穿牵4接种，28培养24 h。试验管变为黄色。判为阳性。92314甘露醇发酵实验以甘露醇代替休和利夫森二氏培养基中的糖，使甘露醇终浓度为1，28培养24 h。试验管变为黄色，判为阳性。9，2315氧化酶实验按GBT 18652-2002的222的规定执行。92316乙醇氧化实验以乙醇代替休和利夫森二氏培养基中的糖，使乙醇终浓度为1，可不加琼脂，28培养24 h。试验管变为黄色，判为阳性。92 317明胶液化实验将分离菌在明胶培养基管穿刺接种，28培养2 d。明胶凝块部分或全部变为可流动的液体，则为明胶水解阳性。10结果判定101病原菌1011临床检验结果符合91的规定；菌落不呈黄色；革兰

9、氏染色为阴性；极生鞭毛；氧化酶试验阳性；葡萄糖发酵试验、乙醇氧化试验、甘露醇试验、明胶水解实验阴性。可判断病原菌为白皮假单胞菌。10 12血清学检验，涂片上有棕色细长颗粒，颗粒大小与杆菌一致，或生化检验符合以下所有特性者可判定病原菌为柱状噬纤维菌：a)菌落形态特征符合92的规定，革兰氏染色为阴性；b) 明胶液化试验、酪素水解试验、硝酸盐还原试验、过氧化氢酶试验、硫化氢试验为阳性；e)淀粉水解试验、七叶灵水解试验、几丁质分解试验、分解纤维素试验、酪氨酸水解试验、靛基质试验、硫化氢试验、枸橼酸盐利用试验、过氧化氢酶试验、葡萄糖利用产气试验为阴性。10 2综合判定l临床诊断结果符合91的规定，生化检验符合1011或1012的规定，可判定为白皮病。SCT 720152006A 1明胶培养基A11配方蛋白胨明胶蒸馏水pHA12配制附录A(规范性附录)培养基的配制，g100 g-150 g1 000mL7274混匀，加热使之完全溶解，用1molL的NaOH调pH。分装试管，培养基高度约4 cln5 crla，115(2高压灭菌15 min。410*C备用。