DB13 T 212-1994 啮齿类实验动物的遗传标准.pdf

1、 河北省地方标准啮齿类实验动物的遗传标准DB13J T212一941主万内容与适用范围本标准规定了啮齿类实验动物的遗传学语、分类和命名、繁殖交配方法和近交系动物遗传质量监侧。本标准适用于啮齿类实验动物的遗传学分类、命名、繁殖及近交系小鼠、大鼠的遗传纯度检查。2术语2.1遗传概貌(Genetie profile)是指各个近交系遗传标记表型资料的汇总，从一定程度上反映各品系的遗传特征。2.2生化标记(Biochemical markers)是指染色体上的可变异部位，突变后，引起特异性醉的缺损，可用生化方法检查出来。2.3纯合性(H om ozygosity)在同源染色体的相对位置上具有相同墓因的性

2、状。2.4同基因性(Isogenicty)在近交系中所有个体在遗传上是同源的，其基因型是完全一致的。3分类和命名3.1实验动物的遗传分类根据遗传特点的不同，实验动物分为近文系动物、封闭群动物和杂交群动物。3.2实验动物的遗传命名3.2.1近交系(Inbred strains)9.2.1.1定义经连续全同胞兄妹或亲子交配达20代以上而育成。其近交系数应达到96.6%以上，品系内所有个体均可追溯到一对共同的祖先。该品系称为近交系。3.2.1.2命名河北省技术监餐Jill斗H一.一，喇滩1湘4-04-01实施DB13/ T212-94近交系一般用大写英文字母或大写英文字母加阿拉伯数字来命名，其符号应

3、尽量筒短。如A系、Tai系等。具有同一来源的近交系，在近交2。代之前分离的一些品系作为关系相近的品系，使用的符号应能表示出相互间的关系。如NZB. NZC. NIO o.3.2.1.3近交代数近交系的近交代数用大写英文字母F表示。如近交代数为32代时，可写成F32.3.2.1.4亚系(Substrains)3.2.1.6亚系的形成是指一个近交系内和分支的后代动物之间，已经发生或可能存在遗传差异。一般在下述情况下会发生亚系的分化。.二、在兄妹交配40代以前(即20-4。代之间)形成的分支多数因残留杂合而形成。b、来自共同祖先的一个分支，独立繁殖10。代以上时出现差异。多数因突变而形成分化。c，一

4、个分支与其它分支之间发生较大的遗传变异。一般由遗传污染而形成亚系应重新命名。3.2.1.6亚系的命名其命名方法是在原品系的名称后加一道斜线。斜线后标明亚系的符号。亚系的符号有以下三种:a.数字。如CBL/ 6 COL/ 10等。b、育成或产生亚系的单位或人的缩写英文名称，第一个字母用大写，以后字母小写。应注意不要和已公布过的名称重复。例如:A了He表示A系的Heston亚系;CBA/J，表示由美国杰克逊研究所保持的CBA近交系的亚系。c、一个保持者维持的近交系具有两个以上亚系时，采用数字后而再加保持者的缩写英文名称来表示亚系。如C6,BL/6 C6,BL/100若在一个近交系中产生连续变异而形

5、成连续亚系时，其亚系符号应该积累。如CBA/HN，是国立卫生研究院N发现的一个亚系，它是从Harwel处育成的CBA/ H亚系中产生的。对一些建立和命名较早的近交系，亚系名称可用小写英文字母表示。如BALB了C-CBR/ cd虽与上述规则不一致，仍可沿用其原有名称。3.2.1.7支系(Subline)3.2.1.8支系的形成产生支系的具体情况有:DBIS/ 7212-94a.经人为技术处置形成，如卵子移植，人工喂养，代乳，卯集移植或胚胎冷冻等。b、种群转移到新的保持者。3.2.1.9支系的命名a.经人为技术处置形成的支系，应在原名品系名称后附加一个小写英文字母表明处理方式。具体符号如下;卯子移

6、植e(egg transfers)奶母代乳(Foster-nursing)卯巢移植。(Ovary transplant)人I喂养h(Hand-rearing)胚胎冷冻p(Freeze preservation)人工喂养加奶母代乳fh(Fastered onhand-reared)代乳的奶母动物或接受卵子，卵粱移植的受体动物.可在上述符号后面标明品系名称或缩写品系名称。如C,HfCBL或C,H f B，表示C,H近交系是由CBL品系代乳养大的。b、采用人为技术措施的一个重要方面，可以有目的的去除或植人垂直感染病毒，如植人或去除的病毒是已知的，可在品系名称后加一横线，以大写英文.字母标明病毒，最后

7、写上一个“+”或“一”号，以表示植人或去除。如C,H/HeN-MTV+，表示将纯化的小鼠胸腺病毒(MTV)接种于剖腹手术取得的C.H/HeN品系的小鼠中。、一个品系转移到另一个单位，由于环境的改变，繁殖代数的增加，可能遗传上产生差异应以下法表示:原品系或亚系名称后加两条斜线。例如C,H/ He/ / N,表示Harwell氏保持的C,H / H e近交系的支系。经过数次引种的支系，一般只标明现在保种单位名称，可不必依次标明各中间引种单位名称。3.2.2重组近交系(Recombinant inbred strains)8.2.2.1定义由两个高度近交系杂交的F武个体之间经连续20代以上的兄妹交配

8、而育成的近交系列，称为重组近交系。3.2.2.2命名在两个亲代近交系的缩写名称中间加大写英文字母R命名。组内之间用阿拉伯数字予以区分。例如:由BALB/ C和CBL两个近文系杂交育成的一组重级近交系，分别命名为C%B-1, C%B-2,一。对常用近文系小巨的缩写名称规定如下:DB13/ 7212-94近交系缩写名称Cs,BL/6 B6BALB/ C CDBA/2 D,C,H C,CBA CBAKR AK3.2.3同源突变近交系3.2.3.1定义两个近交系，除了在一个指明位点等位基因不同外，其它遗传基因全部相同。称为同源突变近交系，简称同源突变系。多由近交系发生基因突变而形成。3.2.a.2命名

9、在发生突变近交系的名称后加突变基因符号(用英文斜体印刷体)。二者之间以连接号分开，如DBA/ Ha-D。当突变基因必须以杂合状态保持时，用“+，号表示。如C,H/ N-*/ W。其近交代数以M+表示，如(F? +M+23)表示某个突变发生后经过23代兄妹交配而育成。3.2.4同源导人近交系(comgenic inbred strains)3.2.4.1定义通过杂交一互交(Cross-inter cross)或回交(Back-cross)等交配系统将一个差别等位基困导人至一个近交系中，由此形成的新近交系与原近交系相比较只是在一个很小的染色体片段上的基因不同外，其他全部相同，称为同源导人近交.系，

10、简称同源导人系。3.2.4.2命名同源导人系名称由以下三部分组成:a,接受导人基因的近交系名称;b、提供导人基因的近交系缩写名称，并与a之间用英文名号分开;c、导人基因的符号(用英文斜体)，与b之间以连字符分开。例如:B10 129-H-126表示该同源导人近交系的遗传背景为CBL/ 106n吕B10)，导人B1。的基因为一H120,供体为129/ J近交系。其繁殖代数以N表示，如(N10F6)表示回交1。代后兄妹交配6代面育成。如(NE12F17)表示采用回交和互交方法，在遗传上当于12次回交后兄妹交配17代而育成。DB13/ 7212-943.2.6(封闭群)远交群(closed colo

11、ny or outbred stock)3.2.6.1定义以非近亲交配式进行整殖生产的一个实验动物种群，连续五年内不从其外部引入新的动物群体，或来源于近文系的种群，在封闭条件下，至少连续繁殖4代以上，称为封闭群或远交群。3.2.6.2命名此群动物由2-4个大写英文字母命名。种群名称前标明保持者的英文缩写名称，第一个字母大写，后面的字母小写，一般不超过4个字母。保持者与种群名称之间以冒号分开。如:N : N IH表示由美国卫生研究院(ICI)保持的N IH远交群小鼠。某些命名较早的远交群动物，虽与上述规则不一致，仍可沿用原来的名称。如wistar大鼠，ddy小鼠。3.2.6杂交群(Hybred)

12、3.2.6.1定义二个或二个以上品系动物之间交配而生的后代叫杂交群。用于实验研究的杂交群是指两个近交系之间交配所繁殖的子一代动物(F,Hybred)，它具有遗传均一，基因型相同，表型一致等优点。3.2.6.2命名将两个近交系的缩写名称合并后，写上F,符号。写在前边的品系是雌性，写在后边的是雄性。如CB,F1，表示该F1动物是由BALB/C( g)与C.,BL/ 6( a)两个近交系交配而产生的。4实验动物的处殖方法很据各品系动物的遗传特点不同，应选择相应的繁殖方法。4.1近交系动物的繁殖方法选择近交系动物繁殖方法的原则，是保持近交系动物的同基因性及其基因纯合性。4.1.1引种用于繁殖的原种近交

13、系动物必须是遗传背景明确，来源清楚，有完整的资料(包括品系名称，近交代数、遗传基因特点及主要生物学特征等)。原种应引自近交系的基础群。4.1.2近文系动物的挤殖可分为基础群、血缘扩大群和生产群。4.1.2.1基础群设基础群的目的，一是保持近交系的传代挤衍，二是为扩大资殖提供种动物。_p鱼3/7Z2-94_a,基础群应严格以全同胞兄妹交配方式进行摘殖。b、基础群应设动物个体记录卡(包括品系名称、近交代数、动物编号、出生日期、离乳日期、交配日期、生育记录等)和繁殖系谱。c、基础群(包括血缘扩大群)动物不超过6-7代都能追溯到一对共同祖先。4.1.2.2血缘扩大群血缘扩大群的种动物来自基础群，按全同

14、胞兄妹交配、设繁殖记录卡。4.1.2.3生产群生产群的种用动物来源于基础群或血缘扩大群，.采用随机交配繁殖，萦殖代数一般不超过3-5代，设个体繁殖记录卡。4.2远交群动物的繁殖方法4.2.1引种原种远交群动物应来源清楚，遗传背景明确，有较完整的档案材料(种群名称、遗传组成特点及主要的生物学特性)。为了保持其遗传异质性及基因多态性的稳定，引种或留种应达到有效数量。如小型啮齿类远交群动物有效繁殖数量一般不能少于26对。4.2.2繁殖4.2.2.1基本要求应尽量保持群内基因频率的分布平衡，以非近亲随机交配方法进行梦殖，每代近交系数上升率不得超过1% e4.2.2.2交配方法a、最佳避免近交法此法适用

15、于每代种用动物10-12对时的交配，将同代的雌1雄种用动物分别标以笼号1, 2, 3 . . 26. n代动物繁殖的下代动物以n+l代表示(设n为繁殖代数，并是自1开始的自然数)。交配编排见表1e上述编排方式，对生殖周期较长的非跪齿类动物(狗、猫、家兔等)难以进行。可从种群数量上加以控制，保持种群规模不低于10只雄种，20只雌种水平。留种时每只雌雄种各留一只雌、雄子代动物作种，应尽盆避免近亲交配。b、循环交配法此法适用于每代雄种动物26-100只的交配萦殖。将动物分成若千组(一般3-6组)，每组包含多个繁殖单位(一雄一雌、一雄二雌、一雄多雌等)，有规律的把不同组内的雄雌动物进行循环交配。c、随

16、机交配法一一一一一一一一DB13/ T212-94表1n +l代笼号雌种来自n代笼号雄种来自n代笼号246。.89011.，立.1此法适用于每代雄种动物多于100只的交配繁殖。从整个种群中随机选取动物，然后任选雌、雄动物进行交配。4.3杂交一代(F1)繁殖方法4.3.1杂交组合的选择此群动物是指近交系之间的杂交，亲代的选择应具以下条件:a、具有杂交优势遗传特性的品系。b、具有实验研究所要求特性的品系。c、两个品系间具有较强的亲合力及较小的异质性差异。4.3.2赞殖梦殖杂交一代的目的，为了在一定时间内提供大量遗传均一，体重相等，年龄接近的实验动物，因此交配方法最好选用定期同居交配法(非撅密，殖法

17、)进行梦殖。6近交系动物的遗传质fm翻DB13I T212-946.1监侧目的检查近交系动物的同基因性及基因纯合性的目的，是为了及时发现由遗传污染，突变或残留杂合等原因而引起的遗传改变。6.2监洲实施方案不同品系受检动物的取样、监侧间隔、质I与数量特性见表2,却不同品系取样监侧间隔质it特性数量特性遗传概貌生化位点产仔数体重(日)204060尽可能多最有效近交系冷冻胚所有繁殖古早种每代JJJ,/J基础14繁殖古早种隔一代JJJJJ血缘扩大群随机一次I年JJJ生产群一次l年JJ重组近交系基础群繁殖古早种隔一代JJJ同源导人近交系基础群繁殖古早种隔一代JJJJJ同源突变近交系所有繁殖古早种侧弋JJ

18、J杂交群(F1)随机一次1年JJJ隔离器内动物随机-浏年J,/J表中所列随机取样的四利乡物，每种取样6-12只，经皮肤移植自检成功.舌，再接受认可单位进行生化位点检查。其他动物进行自检，根据遗传概貌可增加其他方法进行监侧。如毛色基因测试，免疫标记基因检侧，染色体标记检测等。5.3监侧方法5.3.1皮肤移植法同一品系的不同个体之间能够互相接受对方提供的移植组织或器管，如皮肤移植是目前最常用的监测近交系小鼠亚系间或亚系内组织相容性基因发生差异的方法。具体方法见附录A近交系小鼠、大鼠皮肤移植术，。5.3.2生化标记基因检测方法此法是以异构蛋白基因或同工醉作为生化标记，采用电泳方法检查近文系动物一一一

19、一一一一一一一一一一一一一DB13/ T212-94一的同基因性及基因纯合性。具体方法见附录A“近交系小鼠、大鼠皮肤移植术”。6.4监测结钠判定遗传质量监测结果如与被检动物所特有的遗传概貌相符，应判为遗传质量合格。如被检动物的监测结果与原品系遗传概貌不相符者，应按表3进行分析处理。都不相符类型可能发生差异原因处理对策杂合型多个位点近期发生遗传污染淘汰一个位点近期发生遗传突变淘汰或维持纯合型多个位点早期发生遗传污染淘汰或重新命名2-3个位点残留杂合的纯合淘汰或重新命名一个位点突变已固定重新命名，注:重新命名者，必须重检。_DB13T/212_一一附录A近交系小峨、大甩皮胶移植术A1适用范围适应于

20、近交系小鼠、大鼠的遗传质量监侧。也适用于近交系小鼠、大鼠培育过程中的纯度检查。A.2原理同系异体的皮肤相互移植后，移植物被接受或排斥是受组织相容性抗原所决定。因此，通过观察同系异体皮肤移植物能否接受用以判断组织相容性基因的异同。本移植技术采用背部或尾部的皮肤进行移植。A.3背部皮肤移植A.3.1设备和材料a、落地手术灯(装100W灯泡);三用水浴锅;药物天平。b、眼科剪刀和镊子;注射器(lml)和4.或6=针头;蜡盘或木板;脱脂棉球;载玻片。c、戌巴比妥钠;青霉素G钠粉剂(80万单位);无菌生理盐水。d. 3%碘酒棉球和76%酒精棉球;涂有医用凡士林及粉剂青霉素G钠的纱布若干块(长160- 2

21、00mm，宽40- 60mm，厚2-3层或长宽均为40-60mm) o将剪刃镊子、载玻片、注射器、纱布、脱脂棉等置于高压锅内121 -C 16分钟灭菌。A.3.2操作步骤A.3.2.1根据6.2监测实施方案抽取动物，详细记录其编号、品系名称、性别、出生日期、体重及特征等。A.3.2.2用无菌生理盐水配制0.7%戌巴比妥钠溶液。A.3.2.3动物麻醉每2。克体重大鼠或每10克体重小鼠腹腔内注射0.7%戌巴比妥钠溶液0. lml。根据不同品系动物对麻醉剂的不同敏感特性，适当增减注射量。A.3.2.4将麻醉后的动物固定在蜡盘或木板上，剪去被毛，以3 0/0琪酒和76%酒精棉球消毒。A.3.2.5从鼠

22、背左右两侧各剪下直径6-10二二的皮肤各一块(一块用于自体DB13T/212_一移植，另一块用于异体移植)。A.3.2.6将剪下的皮片(皮下组织向上)放在载玻片上，轻轻去掉皮下组织至真皮，并用无菌生理盐水冲洗。A.3.2.7两只动物的皮片，左片用于自体移植，右片以逆毛方向互相交换移植并使之吻合。A.3.2.8覆盖涂有凡士林和青霉素G钠的纱布块，并用纱布包扎3-4圈，松紧适度。A.3.2.9用毛笔沾上石膏糊(以40热水调成糊状)封闭，挂上标记卡片。一周后拆除石膏包扎。A. 3. 3结果观察A.3.3.1拆除包扎后，如皮片干瘪脱落，应视为移植技术失败。对照自体移植失败率不得大于10% ,A.3.3

23、.2皮片在移植后2-3周内被排斥，应视为急性排斥。其表现为皮炎，水肿、坏死、结痴直至脱落。遗传污染通常引起急性排斥。A.3.3.3皮片在三周后被排斥，视为慢性排斥。其表现为逆毛脱落至无毛或留下凹陷疤痕。移植物是否慢性排斥至少观察100天。遗传突变通常引起慢性排斥。A.3.3.4如对结果有怀疑，应进行重新移植。重新移植的动物，可另取一批新的动物或继续使用对移植结果产生怀疑的原批动物。A.4尾部皮肤移植术A.4.1材料和设备-A.4.1.1 11号带柄手术刀;玻璃套管(直径8mm，长“mm，用于大鼠的可适当大些);医用胶布。A.4.1.2其他材料同A. 3. 1A.4.2操作步骤A.4.2.1动物

24、的选择、编号、麻醉等按A.3.2.4进行。待动物麻醉后，以6只为一组按顺序取仰卧或放在一块滤纸上，用3 0/09曰2.4.A碘酒彬球和76%的酒精棉球消毒鼠尾。A.4.2.3用左手食指按住动物尾根，左手拇指按住尾尖，固定鼠尾并使其徽微伸展，然后右手持解剖刀，刃面朝前，避开尾静脉，与尾部皮肤成20-30.夹角，在离尾根部6mm处削下一片宽约2- 3mm，长约7- 8mm的皮肤，其厚度以创面有点状渗血为宜.或以能暴露出白色有肌键但又不割伤血管为宜。DB13TJ212A.4.2.4右手持刀片逆时针方向转交左手，.附着在刀片上的皮片相应转了1800，用镊子取下皮片巾在原创面上，尽盘使其吻合，在皮片上覆

25、盖一层滤纸，轻轻按压后取掉滤纸片。该移植物作为自体移植对照。A.4.2.6按A.4.2.3-A.4.2.4步骤.完成另只动物的自体移植对照。A.4.2. 6按A.4.2.3-A.4.2.4步骤，参照互相循环皮肤移植系统(见下图)，进行循环皮肤移植。O/U oLo oLo/图中A表示自体移植对照回圈中的阿拉伯数字表示编号小良供体的皮片A.4.2.7取6支玻璃套管，分别套人动物尾巴至尾根部3mm处，用医用胶布将尾巴与套管贴住贴2-3圈，使套管可轻徽上下活动.但不脱落。A.4.2.8套上玻璃管后，以落地手术灯照射16-30分钟，然后让动物以仰卧式放人鼠盒，并挂上标记卡片。A.4.2.9 24小时后取

26、下套管，此时其皮片已贴在创面上。A.4.3结果观察A.4.3.1移植后一周皮片呈苍白、干搏、脱落.应视为手术失致。对照自休_一-一卫B13T/2121_移植技术失败率不得大于10%.A.4.3.2皮片在2-3周内发炎、水肿、坏死、结痴直至脱落，应视为急性排斥。遗传污染一般引起急性排斥。A.4.3.3皮片在2-9周内逆毛逐渐脱落，直至无毛或留下凹陷疤痕，应视为慢性排斥。遗传突变一般引起慢性排斥。皮片在100天的观察期内，其逆毛始终生长者，则为永久接受的标志。DB13/ 7212-94附一录B近交系小鼠、大峨生化标记基因监侧方法(补充件)B.1适用范圈适用于近交系小鼠、大鼠的遗传质量监侧。也适用于

27、近交系小鼠、大鼠培育过程中的纯度检测及生化遗传概貌的建立。B.2原理近交系小鼠、大鼠体内的同工酶和某些蛋白质具有各种变异的不同亚型，从而形成不同电泳表型，并成为相应遗传位点上各种不同等位基因的生化标记。各种近交系小鼠、大鼠在生化多态性位点上都具有各自特定的等位基因.可做为遗传质量监测的依据。B.3主要设备和材料a、常压电泳仪b,醋酸纤维素膜电泳槽c、电泳点样装置d,醋酸纤维素薄膜(浙江.黄岩8x 12cm)e,醋酸纤维素板美国Helena实验室出厂)f、低温高速离心机9、振荡仪h、组织匀浆器(2m1或6m1)i、抗凝毛细管B.4化学试剂三羚甲基氮基甲烷Trio (Trihydroxymethy

28、l) amino methan)国产A. R或C. P乙二胺四乙酸Ethylene diamine tetracetic acid(EDTA).国产A. R或C. P翻酸Boric Acid国产A. R或C. P甘氮酸Glycine国产A. R或C. P盐酸Hydrochloride acid国产A. R或C. P柠榨酸钠Sodium Citrate国产A. R或C. P柠裸酸Citric Acid国产A. R或C. PDB13/ T212-94一一一一_磷酸氢二钠Sodiun phosphate dibasic国产A. R或C. P磷酸二氢钾Patassium phosphate monob

29、asic国产A. R或C. P氢氧化钠Sodium hydroxide国产A. R或C. P碳酸氢钠Sodium bicarbonate国产A. R或C. P琼脂粉Agar国产A. R或C. P坚固兰RR盐Fast blue RR salt国产A. R或C. P醋酸镁Magnesium acetate国产A. R或C. P氯化镁Manganese Chloride国产A. R或C. P丽春红一S Ponceau S国产A. R或C. P三氯乙酸Trichloroacetic acid国产A. R或C. P磺基水杨酸Sulfosalicylic aeid国产A. R或C. P日一醋酸茶醋日N a

30、phthyl-acetate国产A. R或C. P4一甲基散形乙酸盐4-Methyl-Umbellifery美国sigm a公司Acetatea-磷酸蔡醋a-Naphthyl Acid phosphate美国sigm a公司D一果糖一6-磷酸D-Fructose-6-phosphate美国，igm a公司甲基唾哇基四哇MTT美国sigma公司辅酶li TPN美国sigm a公司甲硫酚嗦PMS美国sigm a公司异柠檬酸Isocitric Acid美国sigm a公司葡萄糖一1,6一二磷酸D-Glucose-1, 6-diphosphte美国sig m a公司葡萄糖一6-磷酸Glucose-6-

31、phospharic acid美国sigm a公司葡萄糖一6-磷酸脱氧酶Glucose-6-phosphate美国sigm a公司dehydrogenase苹果酸M alic acid美国sig m a公司丙酮Acetone国产A. R或C. P注:A. R分析纯.C. P化学纯B.6电泳样品根据6.2监测实施方案抽取动物，编号、记录。B.6.1血浆以抗凝毛细管行眼眶采血术。600g离心6分钟，分离血浆和血球吸出血浆备用。16DB13/ 1212-94B.6.2溶血液在去除血浆的红血球内加人燕馏水其比例为1:4(V/V)。振荡1分钟成为透明液体，即为溶血液。B.6.3组织匀浆上清液颈椎脱臼法处

32、死动物后，迅速剖腹，小鼠取肾脏1只，肝脏1叶;大鼠取肾脏1只，小肠3cm,皋九1只，并开胸取肺脏1叶;分别加人适童预冷燕馏水.燕馏水与组织的比例一般为4:1 (V/ W).分别以组织匀浆器匀浆。匀浆液置于低温高速离心机中，2000 x g, 40(m in)分钟。以吸管吸取上层清液存人小试管中备用。B.6.4尿液左手抓取小鼠，右手以毛细血管吸取尿液备用。如排尿过多也可以小试管直接收集备用。上述电泳样品均宜新鲜制备使用，可置4冰箱内保存一天。超过一天者需放人一20以下的冰箱内保存，时间不宜超过一个月。B.6电泳步异B.6.1浸膜将醋酸纤维膜(板)轻轻浸人相应的电泳缓冲液中。浸人时应避免膜(板)上

33、出现气泡。B.6.2点样将浸透的膜(板)，取出以滤纸吸干，纤维膜毛面朝上，平置在点样板上，以点样器取预制在样品槽内的编号样品，在膜(板)上点样，一次点样量为0.3p 1，为增加膜(板)上的样品A，可重复点样，最适宜的点样it不超过0. 9ju 1(三次)。B.6.3电泳用铅笔在膜(板)上标明电泳原点，泳动方向，迅速将膜(板)搭在事先放人缓冲液(见表B1)的电泳槽纸桥上。盖上电泳棺，接通电源。B.7染色B. 7. 1蛋白染色法电泳结速后取出膜(板)置人0.2%丽春红染液中，10-16分钟后以竹摄取出换以7 %醋酸脱色直至电泳区带清晰可见。B.7. 2醉显色板法(适用于醋酸纤维素膜)B.7.2.1

34、将酶显色液(见表B1)新鲜混合。加人2%热琼脂3 - 4m 1,迅速混匀，均匀倒置在6 x 8cm的玻璃板上，制成醉显色板。B.7.2.2电泳结束后取出膜将点样面贴在醉显色板上。注意将膜与醉显色板DB13J212-94间的气泡排尽，但不可移动膜的位置。B.7.2.3将带膜显色板移至37 IC温箱保温，直至酶区带清晰显现。B.7.2.4取下已显色的膜浸人7 %醋酸中终止反应。B. 7. 3琼脂复盖法(适用于醋酸纤维素板)。B.7.3.1电泳结束后取出醋酸纤维素板。B.7.3.2新鲜混合酶显色液(见表B1),迅速与2- 3m1的2 0/0热琼脂混匀，均匀倒在水平放置的醋酸纤维板上。B.7.3.3待

35、琼脂冷却固定后，将醋酸纤维素板移入37 C温箱，直至酶区带清晰显现。B.7.3.4将醋酸纤维素板放人7 %醋酸中终止反应。B.7.3.6判读结果B.8小鼠生化标记检测细则见表B1B.9大鼠生化标记检测细则见表B2B.1。判定标准参照对照动物确定每个位点的带型后，与常用品系动物的生化遗传概貌比较。小鼠、大鼠常用品系动物生化遗传概貌见表133及表B4,FOn,i军I目口 .卜J食务写.J自日招口卜J翼它冲皇偏公稀玛游如确弓 a玲育洪些9息砂架- C zw.Dki台裁湘架x拍江忿非In蠢 I IIQ琶器摹岛寻爵 II III叠娜RK NoQ，一;A国盒哥:蔓滋鬓鬓9M_蔽滋I一a s;冬一;I蔺-

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