DB13 T 2196-2015 猪链球菌病防治技术规程.pdf

1、ICS 11.220 B 41 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 21962015 代替 DB13/T 693-2005 猪链球菌病防治技术规程 2015 - 05 - 11 发布 2015 - 07 - 01 实施河北省质量技术监督局 发 布DB13/T 21962015 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准是对DB13/T 693-2005猪链球菌病防治技术规程的修订。 本标准与DB13/T 693-2005标准的主要差异如下： 删除了4.5.3“动物试验”和4.5.4“耐胆汁水解七叶苷试验”两部分； 删除了4.6.1“免疫荧光抗体技

2、术”和4.6.2“SP协同凝集试验”两部分； 增加了4.5.1“样品采集”，见4.5.1； 增加了4.5.4“生化反应”，见4.5.4； 增加了4.5.5“猪链球菌2型定型PCR检测”，见4.5.5； 增加了4.5.6“猪链球菌2型相关毒力因子PCR检测”，见4.5.6； 增加了4.6.2“玻片凝集试验”，见4.6.2； 增加了相关消毒措施，见5.1.1； 对5.1.3中“用猪链球菌氢氧化铝菌苗或猪链球菌弱毒苗进行免疫注射”，改为“用猪链球菌病多价灭活疫苗或猪链球菌病活疫苗进行免疫注射”，见5.1.3； 对5.1.5中“用20%的磺胺嘧啶钠30mL/50kg肌注” 改为“用阿莫西林1015mg

3、/kg体重或环丙沙星515mg/kg体重拌料”，见5.1.5； 将5.2中治疗效果较差的庆大霉素改用头孢噻呋钠。另外，增加了针对脑膜炎型链球菌病的治疗措施，见5.2.1和5.2.2。 本标准由河北科技师范学院提出。 本标准起草单位：河北科技师范学院、河北农业大学。 本标准主要起草人: 马增军、史万玉、芮萍、刘谢荣、杨彩然、王秋悦、吴建华、宋勤叶、张铁、袁万哲。DB13/T 21962015 1 猪链球菌病防治技术规程 1 范围 本标准规定了链球菌病的诊断方法和防治措施。 本标准适用于猪链球菌病的防治。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的

4、版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 16548 畜禽病害肉尸及其产品无害化处理规程 GB/T 17823 中、小型集约化养猪场兽医防疫工作规程 GB/T 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂 GB/T 19915.3 猪链球菌2型PCR定型检测技术 GB/T 19915.4 猪链球菌2型三重PCR检测方法 GB/T 19915.5 猪链球菌2型多重PCR检测方法 GB/T 19915.7 猪链球菌2型荧光PCR检测方法 GB/T 19915.8 猪链球菌2型毒力因子荧光PCR检测方法 GB/T 19915.9 猪链球

5、菌2型溶血素基因PCR检测方法 NY 5030 无公害食品 生猪饲养兽药使用准则 NY 5031 无公害食品 生猪饲养兽医防疫准则 中华人民共和国兽药典2010年版 第一部 中华人民共和国兽药规范 3 术语和定义 下列定义和术语适用于本文件。 3.1 猪链球菌病 由多种致病性链球菌感染引起的一种人畜共患病，为法定二类动物疫病。其主要特征是败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎以及关节炎。 3.2 猪链球菌2型 属于链球菌属的一种细菌，根据其荚膜多糖抗原的差异，可分为134及1/2共35个血清型。猪链球菌2型是猪链球菌的一个血清型，不仅对猪致病性很强，而且可以感染特定的人群，是一种重要的人畜共患病病原菌

6、。 DB13/T 21962015 2 4 诊断 4.1 病原 根据群特异性抗原（C抗原）不同，用兰氏(LanceFeld)血清学分类，可将链球菌分成A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U等19个血清群。引起猪链球菌病的病原，C群中以兽疫链球菌(Szooepidemicus)和类马链球菌(Sequisimilis)为主，D群中为猪链球菌(Ssuis)，以及E、L、S、R等群。猪败血型链球菌病病原主要为C群马链球菌兽疫亚种及类马链球菌，D群、L群链球菌也能引发本病。猪脑膜炎型链球菌病主要由C群链球菌所引起，猪链球菌也可引起。猪淋巴结脓肿型链球菌病多由E群链球菌

7、引起，又称化脓性淋巴结炎。此外C、D、E、L群型溶血性链球菌也可经呼吸道感染，引起肺炎或胸膜肺炎，经生殖道感染引起不育和流产。猪链球菌2型也是近几年引发猪链球菌病的主要病原菌。 4.2 流行特点 4.2.1 本病一年四季均可发生，但以10月至次年3月份较多。各种年龄猪对致病性链球菌株均有易感性，常常是断奶前后仔猪多发，但败血症型和脑膜炎型多见于仔猪，而淋巴结炎型多发于中猪。本病的流行大多呈地方性流行，也有个别呈现流行性，甚至暴发性。 4.2.2 病猪和病愈带菌猪是本病自然流行的主要传染源。从病猪的鼻液、尿、粪、唾液、内脏及肿胀的关节内均可检出病原体。未经无害化处理的病、死猪及其肉和内脏等废弃物

8、是散播本病的主要原因。 4.2.3 本病多经呼吸道和消化道感染，病猪与健康猪接触，或由病猪排泄物（尿、粪、唾液等）污染的饲料、饮水以及器物等可引起猪只大批发病而造成流行。 4.3 临床症状 4.3.1 败血型猪链球菌病 根据病程长短败血型猪链球菌病分为最急性型、急性型和慢性型三种类型。 最急性型：在流行初期多见，有时未见任何症状即死亡；多见食欲不振或废绝，体温升高达40.543，精神萎顿、呼吸困难、便秘、粪干硬、结膜发绀，突然倒地，从口、鼻流出淡红色泡沫样液体。多在6h24h内迅速死亡。 急性型：常见精神沉郁，体温40.542，呈稽留热，精神沉郁、呆立、嗜卧、食欲减退或废绝、喜饮水。眼结膜潮红

9、，流泪，有浆液性或脓性鼻汁，呼吸促迫。少数病猪在后期于耳尖、四肢下端以及腹下出现紫红色或出血性红斑。有的猪出现运动失调、磨牙、空嚼或昏睡等神经症状，病猪常在25d内因心力衰竭死亡，病死率高达8090。 慢性型：多由急性型转来，主要表现多发性关节炎，表现一肢或多肢关节肿胀、疼痛、高度跛行，甚至不能站立，严重者后肢瘫痪。病程较长，可达23周，病猪因心力衰竭、麻痹死亡，或逐渐好转而恢复。 4.3.2 脑膜炎型猪链球菌病 主要由C群链球菌所引起，以脑膜炎为主症。多见于哺乳仔猪和断奶后小猪，病初体温升高至40.542.5，便秘，有浆液性或黏液性鼻汁，继而病猪很快表现出神经症状，盲目走动，步态不稳，作转圈

10、运动、空嚼、磨牙、仰卧、直至后躯麻痹，侧卧于地，四肢呈游泳状运动，触及躯体时，发出尖叫或抽搐。急性者几小时或1d2d内死亡。病程稍长者，主要表现为多发性关节炎，逐渐消瘦衰竭死亡或转愈。 DB13/T 21962015 3 4.3.3 淋巴结脓肿型猪链球菌病 多见于颌下淋巴结，发生化脓性炎症，其次是咽部、耳下和颈部淋巴结。病变淋巴结首先出现小脓肿，逐渐肿大，感染后3周达5cm以上，局部显著隆起，触诊坚硬、发炎肿胀、有热痛，可影响采食、咀嚼、吞咽，甚至呼吸障碍，体温升高。有的表现咳嗽、流鼻汁。之后，脓肿中央逐渐变软，成熟后自行破溃，流出带黄绿色稠厚、无臭味的脓汁。此时全身症状显著减轻，脓汁排净后，

11、化脓部位肉芽组织新生，逐渐结痂愈合后康复。病程35周，一般不引起死亡。 4.4 病理剖检变化 4.4.1 败血型 急性败血型病猪可见如下剖检变化： a) 颈下、腹下及四肢末端等处皮肤有紫红色出血斑点，急性死亡猪可从天然孔流出暗红色血液，凝固不良； b) 鼻黏膜肿胀，充血及出血，呈紫红色，表面附有浆液或黏液，喉头、气管树枝状充血，常见大量泡沫，肺充血肿胀； c) 全身淋巴结有不同程度的肿大、充血和出血，甚至发生坏死； d) 胸腔有大量黄色或混浊液体，含微黄色纤维素絮片样物质； e) 右心室扩张，心耳、心冠沟和心室内膜有出血斑点，少数可见轻度纤维素性心包炎，心肌外膜与心包膜黏连，心包液增多，心肌柔

12、软，色淡呈煮肉样； f) 多数病例脾脏肿大，少数可见增大13倍，呈暗红色或紫蓝色，柔软而易脆裂，包膜下有小点出血，少数病例脾边缘有黑红色的出血性梗死区，切面隆起，结构模糊； g) 肝脏边缘钝厚，质硬，切面结构模糊。胆囊水肿，胆囊壁增厚； h) 肾脏多为轻度肿大，充血和出血，皮质髓质界限不清，颜色黑红； i) 胃肠黏膜和浆膜散在点状出血； j) 脑脊髓液增多，脑膜和脊髓软膜充血、出血。个别病例脑膜下水肿，脑切面可见白质与灰质有小点状出血； k) 肿大的关节囊内外有黄色胶样液体或纤维性脓性物质，关节囊膜面充血、粗糙、滑液混浊，并含有黄白色奶酪样块状物。 4.4.2 脑膜炎型 脑膜炎型病猪可见如下剖

13、检变化： a) 脑膜充血、出血。少数脑膜下充满积液。脑切面可见白质和灰质有明显的小点出血，脊髓也有类似变化； b) 心包膜有不同程度的纤维素性炎症，心包增厚，部分病例出现心包周围炎，甚至整个胸腔充满纤维素性覆盖物，腹腔有不同程度的纤维性腹膜炎； c) 全身淋巴结有不同程度的肿大，充血或出血； d) 其他的脏器病变不规则，类似败血性的内脏病变，部分病例内脏病变不明显； e) 部分病例有多发性关节炎，关节肿大，关节囊内有黄色胶样液体，但很少见到脓性渗出物； f) 部分病猪在头、颈、背、胃壁、肠系膜及胆囊壁有胶样水肿。 4.4.3 淋巴结脓肿型 可见淋巴结出现化脓灶；当出现脓毒败血症时，肺可见转移型

14、脓肿。 DB13/T 21962015 4 4.5 病原学诊断 4.5.1 样品采集 对病猪根据不同病型采取不同的病料，最急性和急性败血症型病例可无菌采集死亡猪的心、肝、肺、肾、脾脏、淋巴结等组织；淋巴结脓肿病猪可用无菌的注射器吸取未破溃淋巴结脓肿内的脓汁；慢性病例如关节炎型一般采取关节液及周围组织；脑膜炎型病猪，则以无菌操作采取脑膜、脊髓液及少量脑组织。对活猪可采取扁桃体拭子、鼻腔拭子。 4.5.2 分离培养 4.5.2.1 病料的分离和触片检查 用经火焰灭菌并冷却的接种环蘸取病料内部组织或脓汁划线接种于普通琼脂绵羊血平板（见附录A中 A.1），于361培养24 h2h，如菌落生长缓慢，可延

15、长至48 h 2 h后观察。同时取病料做组织触片，姬姆萨染色（按GB/T 4789.28的方法进行染色）后镜检，如见球菌则表明病料中可能含有链球菌。 4.5.2.2 扁桃体和鼻腔拭子的分离 扁桃体和鼻腔拭子样品加入到含有5 mL灭菌的选择性THB增菌液（见附录A中 A.4）的试管中，于361培养24 h2h后，划线接种于选择性普通琼脂绵羊血平板（见附录A中 A.2）。 4.5.3 初步鉴定 链球菌在37培养24 h后，在普通琼脂绵羊血平板和选择性普通琼脂绵羊血平板上形成圆形、隆起、边缘整齐、表面光滑、湿润、半透明的菌落，直径约0.3 mml mm，菌落周围有完全透明的溶血环，部分菌落呈现绿色溶

16、血环。可进一步做涂片镜检和纯培养以及生化特性检查。 将可疑菌落做革兰氏染色和过氧化氢酶试验。固体培养物以双球菌或35个排列的短链为主，液体培养物以链状为主，无芽孢，有时可见到带荚膜的革兰氏阳性球菌（按 GB/T 4789.28的方法进行染色），可作初步诊断。本菌过氧化氢酶试验均为阴性。根据以上菌落生长特征、革兰氏染色、菌体形态和过氧化氢酶试验符合者，可初步确定为链球菌。 4.5.4 生化反应 应用细菌生化鉴定分析系统进行生化鉴定，可直接鉴定到种。或重点选择做5%乳糖、海藻糖、七叶苷、甘露醇、山梨醇、马尿酸钠等糖发酵试验。猪链球菌2型发酵5%乳糖、海藻糖产酸，发酵七叶苷，不发酵甘露醇和山梨醇，不

17、水解马尿酸钠。 4.5.5 猪链球菌2型定型PCR检测 见GB/T 19915.3中的规定。 4.5.6 猪链球菌2型毒力因子PCR检测 必要时进行猪链球菌2型毒力因子PCR检测。PCR检测方法见GB/T 19915.4，GB/T 19915.5，GB/T 19915.7，GB/T 19915.8，GB/T 19915.9。 4.6 血清学诊断 4.6.1 乳胶凝集试验 DB13/T 21962015 5 用链球菌群或型特异血清致敏的乳胶颗粒来检测相应的链球菌特异抗原，可在数分钟内出现肉眼可见的凝集现象。 4.6.2 玻片凝集试验 将可疑菌落接种THB肉汤（见附录A中 A.3），于361培养1

18、8 h2h，取1.5 mL培养物，经10000 r/min离心3min，弃上清，用100L生理盐水将沉淀悬浮，取25L菌体悬浮液分别和等体积的25L生理盐水、猪链球菌标准阳性血清作玻片凝集试验，其中生理盐水作为稀释液对照并观察待检菌株是否有自凝现象。同时设阳性菌株对照。在生理盐水对照不凝集，阳性菌株凝集的情况下，待检菌株出现凝集为阳性反应。 5 防治 5.1 预防 5.1.1 加强猪群的饲养管理，圈舍、场地要保持清洁，并定期彻底消毒。猪场大门设消毒池，入口处设立单独的消毒缓冲间，对进场人员采取雾化消毒。消毒剂的使用必须符合NY 5030、NY5031、中华人民共和国兽药典以及中华人民共和国兽药

19、规范的规定。 5.1.2 圈舍、场地无尖锐物体，防止发生各种外伤。一旦发生外伤，要及时进行外科处理；新生仔猪断脐要用碘酊消毒，防止感染。 5.1.3 用猪链球菌病多价灭活疫苗或猪链球菌病活疫苗进行免疫注射。防疫工作必须符合GB/T 17823的规定。 5.1.4 严格按照GB 16548对病猪尸体及排泄物等进行无害化处理。 5.1.5 发病后对同群无临床症状的猪，每头每次用阿莫西林1015mg/kg体重或环丙沙星515mg/kg体重，拌料2次/d，对预防本病有一定效果。 5.2 治疗 本病的治疗应通过药敏试验选择最敏感的药物进行。无条件进行药敏试验的单位可参考下列方法进行。在治疗过程中所有药物

20、的使用必须符合NY 5030、NY 5031、中华人民共和国兽药典以及中华人民共和国兽药规范的规定。 5.2.1 对发病猪每次用青霉素23万IU /kg体重，链霉素1015mg/kg体重，混合肌注，23次/日，连用3d5d。或者用头孢噻呋钠3-5mg/kg体重，1次/日，连用3d。 5.2.2 对脑膜炎症状的病猪每头每次用青霉素80万IU180万IU，磺胺嘧啶钠50100mg/kg体重，肌注，每日12次，连用3d5d。 5.2.3 对淋巴结脓肿，当脓肿成熟后，可将肿胀部位切开，排除脓汁，用3%H2O2或0.1%高锰酸钾溶液冲洗后，涂碘酊，不缝合，几天可愈合。 DB13/T 21962015 6

21、 A A 附 录 A （规范性附录） 各种培养基的配制方法 A.1 普通琼脂绵羊血平板 A.1.1 配方 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0 g 氯化钠(NaCl) 5.0g 磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 1000 mL 脱纤维无菌绵羊血 50 mL A.1.2 制作方法 除无菌绵羊血外，混匀，加热溶解，调pH至7.6分装，115灭菌15 min，冷却至45加入5%无菌脱纤维绵羊血倾注灭菌平板。 A.2 选择性普通琼脂绵羊血平板 A.2.1 配方 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0 g 氯化钠(NaCl) 5.0g 磷酸二氢钾(KH2PO) 1.0g 琼脂 1

22、5.0 g 蒸馏水 1000 mL 无菌羊血 50 mL 叠氮钠 0.4g 结晶紫 0.0004 g 亚硫酸钠 0.2g A.2.2 制作方法 除无菌绵羊血和结晶紫外，混匀，加热溶解，调pH至7.6分装，加入结晶紫（可配成适当溶液），115灭菌15 min，冷却至46加入5%无菌脱纤维绵羊血，混匀，倾注灭菌平板。 A.3 Todd-Hewitt肉汤(简称THB) A.3.1 配方 DB13/T 21962015 7 牛肉膏 5.0g 胰蛋白胨 20.0g 葡葡糖 2.0g 碳酸钠 2.5g 氯化钠(NaCl) 2.0g 磷酸氢二钠(Na2HPO4) 0.4g;或十二水合磷酸氢二钠(Na2HPO

23、412H2O)1.0 g 蒸馏水 1000 mL A.3.2 制作方法 将以上各成分混合煮沸，完全溶化，冷却至室温后，调pH，于115灭菌10 min，最终pH为7.8。 A.4 选择性Todd-Hewitt肉汤(简称选择性THB) A.4.1 配方 牛肉膏 5.0g 胰蛋白胨 20.0g 葡萄糖 2.0g 碳酸钠 2.5g 氯化钠(NaCl) 2.0g 磷酸氢二钠(Na2HPO4) 0.4g；或十二水合磷酸氢二钠(Na2 HPO412H2O)1.0 g 叠氮钠 0.4g 结晶紫 0.0004 g 亚硫酸钠 0.2g 蒸馏水 1000 mL A.4.2 制作方法 将以上各成分（结晶紫除外）混合煮沸，完全溶化，冷却至室温后，调pH，加入结晶紫（可配成适当溶液），于115灭菌10 min，最终pH为7.8。 _