1、细胞冻存复苏技术 与细胞计数,医学细胞生物学实验,徐志浩 遗传与基因工程教研室 院系楼西侧一楼 2016年,掌握细胞冻存与复苏的原理。 熟悉细胞冻存复苏的一般操作过程。 掌握细胞计数的一般方法。,医学细胞生物学实验,实验目的,细胞冻存的必要性 冻存温度 冻存操作对细胞的损伤：冰晶损伤、溶液损伤 冻存保护剂 冻存复苏的原则：慢冻速融,实验原理,1、细胞冻存,医学细胞生物学实验,1ml鸡血+1ml生理盐水1500rpm离心5min(配平)弃上清加2ml冻存液混匀 (空气吹打法) 分装至1ml的冻存管标记液氮罐口（-60-70 ）10min 液氮中冻存10min （-196 ）。,无菌操作; 保护剂
2、； 细胞浓度； 梯度降温（慢冻）；,防止冻伤； 防爆； 冻存管做好标记。,2、细胞复苏与计数,医学细胞生物学实验,取出冻存管 37水浴1min融化转入离心管加至5ml培养液混匀 1500rpm离心5min弃上清加1ml培养液混匀取0.5ml 加入等体积台盼蓝染色1min 计数 计算细胞活力和细胞浓度。,如何区别死细胞和活细胞？,细胞活力（率）：活细胞所占的比率。,3、细胞计数板的使用,医学细胞生物学实验,计数之前熟悉计数板构造并熟练掌握计数方法。 使用计数板前用酒精棉球轻轻擦拭干净。 先盖盖玻片，再滴细胞悬液。 压线细胞：计上不计下、计左不计右。 计数方向：按一定顺序。,1mm,1mm,0.1mm,0.1mm3,10-4ml,7.5cm,3.5cm,医学细胞生物学实验,冻存复苏操作。 染色时间。 计数时间。,复苏细胞活力影响因素,作业,列出细胞冻存与复苏的主要操作步骤。 计算细胞浓度和细胞活力，并分析影响细胞活力的原因。,医学细胞生物学实验,
