CNS 12633-2004 Method of test for fruit and vegetable juices and drinks－Determination of glucose fructose and sucrose by enzymatic analysis《水果及蔬菜汁饮料检验法－葡萄糖、果糖和蔗糖之测定（酵素法）》.pdf

1、 1 印行年月 94 年 10 月 本標準非經本局同意不得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 類號 ICS 67.160.20 N622212633經濟部標準檢驗局印行 公布日期 修訂公布日期 78 年 11 月 22 日 93 年 8 月 16 日 (共 2 頁 )水果及蔬菜汁飲料檢驗法葡萄糖、果糖和蔗糖之測定（酵素法）Method of test for fruit and vegetable juices and drinks Determination of glucose, fructose and sucrose by enzymatic analysis 1. 適用範圍：本標準

2、規定水果及蔬菜汁飲料中葡萄糖、果糖及蔗糖之檢驗方法。 2. 檢驗方法：酵素法 ( Enzymatic analysis) 2.1 裝置、器具及材料 2.1.1 分光光度計 (於 340 nm 下測定 )或光電比色計 (附汞燈者，於 365 或 334 nm下測定 )。 2.1.2 比色管光徑 1cm，玻璃或塑膠。 2.1.3 刻度吸管或微量吸管： 0.1 mL、 1 mL 及 2 mL。 2.2 試藥 2.2.1 檸檬酸緩衝溶液 (Citrate buffer) ：取 6.9g 檸檬酸 (C6H8O7 H2O)和 9.1 g 檸檬酸三鈉 (trisodium citrate； C6H5Na3O

3、7 2H2O)於二次蒸餾水約 150 mL 中，再以 2 N 氫氧化鈉調整 pH 值至 4.6，再定容至 200 mL。 2.2.2 -fructosidase 溶液，取冷凍乾燥的 -fructosidase (約 750U/mL) 10mg 溶於檸檬酸緩衝溶 2 mL，於 4下可保存 1 星期。 2.2.3 胺基三乙醇緩衝溶液 (Triethanolamine buffer； Tra buffer)：取胺基三乙醇鹽酸鹽 (triethanolamine hydrochloride)14.0 g 和硫酸鎂（ MgSO4 7H2O） 0.25 g溶於二次蒸餾水 80 mL 中，以 5 N NaO

4、H 調整 pH 至 7.6，再定容至 100 mL。於 4下可保存 4 星期。使用前先回溫。 2.2.4 NADP 溶液：將 -nicotiamide-adenine dinucleotide-disodium salt (-NADP-Na2) 60 mg 溶於二次蒸餾水 6 mL 中，於 4 下可保存 4 星期。 2.2.5 ATP 溶液：取 adenosine-5triphosphate disodium salt (ATP-Na2H2 3H2O) 300 mg 和碳酸氫鈉 (NaHCO3)300 mg 溶二次蒸餾水於 6 mL 中。於 4下可保存 4 星期。 2.2.6 Hexokina

5、se(HK)/glucose-6-phosphate dehydrogenase(G6P DH)：取 HK/mL(約280U/mL)2 mg 及 G6P-DH/mL (約 140U/mL)1 mg，配製於硫酸銨 (ammonium sulfate)中。 2.2.7 Phosphoglucose isomerase (PGI)： 2 mg/mL (約 700 U/mL)，配製於 ammonium sulphate 中。 2.3 步驟 2.3.1 葡萄糖和果糖之測定：將果汁樣品稀釋至含葡萄糖或果糖濃度為 0.1 至 1 g/L。分取試劑第 2.2.3 節、第 2.2.4 節、第 2.2.5 節各

6、1.00 mL、 0.10 mL、 2 CNS 12633, N 6222 0.10 mL 於比色管中，加樣品稀釋液 0.10 mL 和二次蒸餾水 1.9 mL，混合均勻後，靜置 3 分鐘，測其吸光值 (E1)。再加試劑第 2.2.6 節 0.02 mL 混合，約 10 15 分鐘反應完全後，測其吸光值 (E2)。再加入試劑第 2.2.7 節 0.02 mL混合，約 10 15 分鐘反應完全後，測其吸光值 (E3)。空白試驗則以二次蒸餾水取代樣品液。 2.3.2 蔗糖之測定：將果汁樣品稀釋至含蔗糖濃度為 0.1-1.5 g/L 以下。各取試劑第 2.2.1 節、第 2.2.2 節 0.20 m

7、L 於比色管中，加樣品稀釋液 0.10 mL，混合均勻，在 37下 5 分鐘或 20-25下 15 分鐘後，加試劑第 2.2.3 節、第2.2.4 節、第 2.2.5 節各 1.00 mL、 0.10 mL、 1.60 mL 及二次蒸餾水，混合均勻，以下步驟與第 2.3.1 節同。 2.4 計算 E1000VF V M(g/100mL)C21= C： D葡萄糖、 D果糖或蔗糖在試樣中的濃度 V1：最終體積 (mL)。 D葡萄糖和蔗糖同為 3.14 mL； D果糖為 3.16 mL V2：樣品體積 (mL) M：葡萄糖、果糖或蔗糖之分子量 (g/mol) F：稀釋倍數 ：光徑距離 (cm) ：

8、NADH 的莫耳吸光係數， 340 nm 下為 6.3 (1mmol-1cm-1)， 365 nm 下為3.5 (1mmol-1cm-1)， 334 nm 下為 6.18(1mmol-1cm-1)。 註： E(葡萄糖 )：樣品 (E2 E1) 空白 (E2 E1) E(果糖 )：樣品 (E3 E2) 空白 (E3 E2) E(蔗糖 )：樣品 (E2 E1) 空白 (E2 E1) 相對應國際標準： IFU Method No.55, 1985,Determination of glucose and fructose (enzymatic)； No.56, 1998, Determination of sucrose (enzymatic) 修訂日期：第一次修訂： 80 年 6 月 25 日