CNS 14760-2003 Method of test for milk and milk products－Test of lactic acid bacteria《乳品检验法－乳酸菌之检验》.pdf

1、 1 印月 94 10 月 本標準非經本局同意得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 號 ICS 67.100.99 14760 N6371 經濟部標準檢驗局印 公布日期 修訂公布日期 92 7 月 29 日 月日 乳品檢驗法乳酸菌之檢驗 （共 2 頁） Method of test for milk and milk products Test of lactic acid bacteria 1. 適用範圍：本標準規定乳品中乳酸菌之檢驗方法。 2. 檢驗方法 2.1 工作環境：工作平台須寬敞、潔淨、光線好（操作平台光為 100 呎燭光以上）、儘可能沒有灰塵及動空氣。微生物密之要求為每 15

2、min 菌超過 15 CFU/培養皿。 2.2 器具及材 2.2.1 攪拌均質器（ Blender）或鐵胃 (Stomacher)：能適用於無菌操作者。 2.2.2 廣口瓶： 500 mL，含蓋，可滅菌三角瓶。 2.2.3 天平：可稱至 2,000 g，敏可達 0.1 g。 2.2.4 精密天平：可稱至 120 g，敏可達 1 mg。 2.2.5 培養箱：能維持內部溫溫差在 1.0 以內者。 2.2.6 水浴槽：能維持水溫溫差在 1.0 以內者。 2.2.7 高壓滅菌釜。 2.2.8 培養皿：已滅菌，內徑約 90 或 100 mm，深 15 mm，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮痕或其他缺點。

3、2.2.9 吸管或自動吸管之吸管尖：已滅菌， 1 mL 吸管應有 0.01 mL 之刻； 5 及 10 mL吸管應有 0.1 mL 之刻。 2.2.10 旋渦混合器（ Vortex mixer）。 2.2.11 藥勺、剪刀、小刀及鑷子：可滅菌。 2.2.12 光源：一般日光燈源。 2.2.13 pH 試紙：範圍 6-8。 2.2.14 pH 計 2.2.15 無菌塑膠袋：附有可重複黏貼之膠帶。 2.2.16 振盪器。 2.2.17 冰箱：能保持 53 。 2.2.18 乾熱滅菌器。 2.2.19 菌計器：適用於菌之計算者。 2.2.20 厭氧缸（ anaerobic jar）或厭氧培養箱：適用

4、於厭氧培養者。 2.2.21 培養基 2 CNS 14760, N 6371 2.2.21.1 乳酸菌 MRS 培養基（ Lactobacilli MRS agar+0.5%CaCO3，簡稱MRSA） （ peptone） 10 g 牛肉抽出物 （ beef extract） 10 g酵母抽出物 （ yeast extract） 5 g 葡萄糖 （ Dextrose） 20 gTween 80 1 g 磷酸氫二鉀 （ Dipotassium hydrogen phosphate） 2 g 醋酸鈉 （ Sodium acetate） 5 g檸檬酸銨 （ Ammonium citrate） 2 g

5、 硫酸鎂 （ Magnesium sulfate） 0.1 g硫酸錳 （ Manganese sulfate） 0.05 g 碳酸鈣 （ CaCO3） 5 g洋菜 （ Agar） 15 g蒸餾水 1000 mL 碳酸鈣預先以 180 ，以1-2小時乾熱滅菌，然後加入培養基中，加熱培養基完全溶解並以121 滅菌15分鐘，最後pH值為6.50.2。 2.2.21.2 稀釋液：取 1 g 溶於蒸餾水或去離子水中，至全量為 1000 mL，分裝於稀釋用容器中，以 121滅菌 15 分鐘，最後 pH 值為 7.00.2。 2.3 檢液之調製：取液態乳製品 50 g（或 50 mL），加入 450 mL

6、已滅菌之稀釋液用攪拌均質器攪拌，亦可以鐵胃攪拌。攪拌後即為 10 倍稀釋檢液，分別使用滅菌吸管，依序作成一系列之 100 倍、 1000 倍、 10000 倍等之稀釋倍數。 2.4 乳酸菌之培養：分別吸取各稀釋倍數之稀釋檢液及原液 1 mL、注入各別的培養皿中（至少作二重覆），加注 43-45之滅菌乳酸菌 MRS 培養基 15-20mL，振搖混合，俟其冷卻凝固後，放入 35-37培養箱厭氧培養 723 小時。 2.5 乳酸菌之計算：經培養後便可計數，計數方式依 CNS 10890食品微生物之檢驗法生菌數之檢驗第 2.5 節之規定。其中乳酸菌 MRS 培養基中添加 0.5%碳酸鈣（ CaCO3）

7、，為選擇性培養基，乳酸菌菌落會產生透明環。 引用標準： CNS 10890 食品微生物之檢驗法生菌數之檢驗 參考標準： 1. Rogosa,M and Sharpe,M.E.1959.An approach to the classification of the lactobacilli.J.Appl.Bacteriol.22:329-340 2. Vanderzant C. and Splittstoesser D.F.1984.Microbiological examination of foods.In Compendium of methods for the microbiological examination of foods. Third Edition（ Vanderzant C. and Splittstoesser D.F.eds）p.840.Canada.USA.